6%，制得的固定化葡萄糖氧化酶中葡萄糖氧化酶的负载量为247.6mg酶/g载体。
[0058]实施例4
[0059](I)称取2.43g FeCl3.6H2O和0.9g FeCl2.4H20溶解在300mL蒸馏水中，向溶液中滴加氨水，调节溶液PH为10，将混合溶液在30 0C下反应Ih，得到纳米Fe3O4 ；制得的纳米Fe3O4可保存在pH=7的Tris-HCl的缓冲溶液中；
[0060](2)称取1mg微晶纤维素，-12°C条件下溶解在含有质量百分比为7%Na0H与12%Urea的NaOH-Urea水溶液中，其中，NaOH-Urea溶液和纤维素的质量比是1: 0.05;在磁力搅拌条件下加入20mg的Fe3O4,然后向混合溶液中加水使纤维素再生，用磁铁将其分离，并用蒸馏水洗涤三次，得到磁性纤维素纳米晶；
[0061 ] (3)取23.799mg六水合硝酸锌溶解在2mL蒸馏水中，与30mg步骤(I)制得的磁性纤维素纳米晶混合搅拌20min，搅拌速度为300rpm ；得到混合溶液；
[0062](4)将26.272mg的2-甲基咪唑溶解在2mL蒸馏水中，加入步骤(3)制得的混合溶液中，搅拌条件(搅拌速度为300rpm)下反应Ih;将所得产物用蒸馏水洗涤，冷冻干燥后得到磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐；
[0063](5)将葡萄糖氧化酶粗酶粉溶解在水中，过滤除去不溶性杂质，取ImL酶液(酶含量1mg)与步骤(3)制得的载体磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐混合，25°C搅拌条件下进行固定化6h，然后用蒸馏水洗涤未固定化到载体上的酶，得到固定化葡萄糖氧化酶；
[0064]本实施例固定化酶效率为92.6%,酶活回收率为79.4%,制得的固定化葡萄糖氧化酶中葡萄糖氧化酶的负载量为286.7mg酶/g载体。
[0065]实施例5
[0066](I)称取2.43g FeCl3.6H2O和0.9g FeCl2.4H20溶解在300mL蒸馏水中，向溶液中滴加氨水，调节溶液PH为10，将混合溶液在30 0C下反应Ih，得到纳米Fe3O4 ；制得的纳米Fe3O4可保存在pH=7的Tris-HCl的缓冲溶液中；
[0067](2)称取1mg微晶纤维素，_12°C条件下溶解在含有质量百分比为7%Na0H与12%Urea的NaOH-Urea水溶液中，其中，NaOH-Urea溶液和纤维素的质量比是1: 0.02;在磁力搅拌条件下加入30mg的Fe3O4,然后向混合溶液中加水使纤维素再生，用磁铁将其分离，并用蒸馏水洗涤三次，得到磁性纤维素纳米晶；
[0068](3)取23.799mg六水合硝酸锌溶解在2mL蒸馏水中，与40mg步骤(I)制得的磁性纤维素纳米晶混合搅拌20min，搅拌速度为10rpm，得到混合溶液；
[0069](4)将26.272mg的2-甲基咪唑溶解在2mL蒸馏水中，加入步骤(3)制得的混合溶液中，搅拌条件(搅拌速度为10rpm)下反应30min;将所得产物用蒸馏水洗涤，冷冻干燥后得到磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐。
[0070](5)将葡萄糖氧化酶粗酶粉溶解在水中，过滤除去不溶性杂质，取ImL酶液(酶含量1mg)与步骤(3)制得的载体磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐混合，25°C搅拌条件下进行固定化应12h，用蒸馏水洗涤未固定化到载体上的酶，得到固定化葡萄糖氧化酶；
[0071 ]本实施例固定化酶效率为84.7%,酶活回收率为86.9%,制得的固定化葡萄糖氧化酶中葡萄糖氧化酶的负载量为275.8mg酶/g载体。
[0072]实施例6
[0073](I)称取2.43g FeCl3.6H2O和0.9g FeCl2.4H20溶解在300mL蒸馏水中，向溶液中滴加氨水，调节溶液PH为10，将混合溶液在30 0C下反应Ih，得到纳米Fe3O4 ；制得的纳米Fe3O4可保存在pH=7的Tris-HCl的缓冲溶液中；
[0074](2)称取1mg微晶纤维素，_12°C条件下溶解在含有质量百分比为7%Na0H与12%Urea的NaOH-Urea水溶液中，其中，NaOH-Urea溶液和纤维素的质量比是1: 0.02;在磁力搅拌条件下加入15mg的Fe3O4,然后向混合溶液中加水使纤维素再生，用磁铁将其分离，并用蒸馏水洗涤三次，得到磁性纤维素纳米晶；
[0075](3)取23.799mg六水合硝酸锌溶解在2mL蒸馏水中，与25mg步骤(I)制得的磁性纤维素纳米晶混合搅拌20min，搅拌速度为300rpm，得到混合溶液；
[0076](4)将26.272mg的2-甲基咪唑溶解在2mL蒸馏水中，加入步骤(3)制得的混合溶液中，搅拌条件(搅拌速度为300rpm)下反应24h;将所得产物用蒸馏水洗涤，冷冻干燥后得到磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐。
[0077]实施例7
[0078](I)称取2.43g FeCl3.6H2O和0.9g FeCl2.4H20溶解在300mL蒸馏水中，向溶液中滴加氨水，调节溶液PH为10，将混合溶液在30 0C下反应Ih，得到纳米Fe3O4 ；制得的纳米Fe3O4可保存在pH=7的Tris-HCl的缓冲溶液中；
[0079](2)称取10mg微晶纤维素，_12°C条件下溶解在含有质量百分比为7%Na0H与12%Urea的NaOH-Urea水溶液中，其中，NaOH-Urea溶液和纤维素的质量比是1: 0.02;在磁力搅拌条件下加入150mg的Fe3O4,然后向混合溶液中加水使纤维素再生，用磁铁将其分离，并用蒸馏水洗涤三次，得到磁性纤维素纳米晶；
[0080](3)取23.799mg六水合硝酸锌溶解在2mL蒸馏水中，与25mg步骤(I)制得的磁性纤维素纳米晶混合搅拌20min，搅拌速度为300rpm，得到混合溶液；
[0081 ] (4)将26.272mg的2-甲基咪唑溶解在2mL蒸馏水中，加入步骤(3)制得的混合溶液中，搅拌条件(搅拌速度为300rpm)下反应12h;将所得产物用蒸馏水洗涤，冷冻干燥后得到磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐。
[0082]实施例8
[0083](I)称取2.43g FeCl3.6H2O和0.9g FeCl2.4H20溶解在300mL蒸馏水中，向溶液中滴加氨水，调节溶液PH为9，将混合溶液在30 °C下反应Ih，得到纳米Fe3O4 ；制得的纳米Fe3O4可保存在pH=7的Tris-HCl的缓冲溶液中；
[0084](2)称取1mg微晶纤维素，_12°C条件下溶解在含有质量百分比为7%Na0H与12%Urea的NaOH-Urea水溶液中，其中，NaOH-Urea溶液和纤维素的质量比是1: 0.02;在磁力搅拌条件下加入15mg的Fe3O4,然后向混合溶液中加水使纤维素再生，用磁铁将其分离，并用蒸馏水洗涤三次，得到磁性纤维素纳米晶；
[0085](3)取23.799mg六水合硝酸锌溶解在2mL蒸馏水中，与25mg步骤(I)制得的磁性纤维素纳米晶混合搅拌20min，搅拌速度为300rpm，得到混合溶液；
[0086](4)将26.272mg的2-甲基咪唑溶解在2mL蒸馏水中，加入步骤(3)制得的混合溶液中，搅拌条件下反应24h，搅拌速度为300rpm;将所得产物用蒸馏水洗涤，冷冻干燥后得到磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐。
[0087]效果实施例
[0088]对实施例1?5制得的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐分别进行红外光谱和X-射线衍射检测;结果见图1和图2。
[0089]从图1可以看出，实施例1?3制得的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐在3440和3370cm—1处峰分别反映纤维素分子内和分子间氢键的峰。594cm—1处有很强的吸收峰，是Fe304特征吸附峰。
[0090]从图2可以看出，衍射角为12.4，20.2和22.2°的三个峰为再生纤维素衍射峰，在衍射角为30.24，35.60，43.24，和57.16°出现明显的峰为Fe3O4的晶面衍射峰。并且随着Fe3O4含量增多，其峰强度明显增强。
[0091]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐的制备方法，其特征在于包含如下步骤: (1)将纤维素溶解于NaOH-Urea水溶液中，在搅拌条件加入纳米Fe3O4，加水再生，产物分离并洗涤，得到磁性纤维素； (2)将步骤(I)制得的磁性纤维素与硝酸锌溶液混合搅拌5?30min，得到混合溶液； (3)在步骤(2)制得的混合溶液中加入2-甲基咪唑溶液，搅拌反应0.5?24h，将所得固体磁性分离，洗涤，干燥，得到磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐。2.根据权利要求1所述的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐的制备方法，其特征在于: 步骤(I)中所述的纳米Fe304的制备方法，包含如下步骤: 将FeCl3.6H20和FeCl2.4H20溶解在水中，调节溶液pH为9?12;然后将混合溶液在30°C下反应0.5?3h，得到纳米Fe3〇4。3.根据权利要求1所述的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐的制备方法，其特征在于: 步骤(I)中所述的NaOH-Urea水溶液包含如下按质量百分比计的组分:7%Na0H和12%Urea04.根据权利要求1所述的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐的制备方法，其特征在于: 步骤(I)中所述的溶解的温度为_12°C以下。5.根据权利要求1所述的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐的制备方法，其特征在于: 步骤(I)中所述的纤维素与纳米Fe3O4的质量比为1:(0.1?3)。6.根据权利要求1所述的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐的制备方法，其特征在于: 步骤(2)中所述的硝酸锌溶液中的硝酸锌与磁性纤维素的质量比为1:(0.5?2)。7.根据权利要求1所述的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐的制备方法，其特征在于: 步骤(3)中所述的2-甲基咪唑溶液中的2-甲基咪唑与步骤(2)中硝酸锌溶液中的硝酸锌的摩尔比为4:1。8.一种磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐，其特征在于:通过权利要求1?7任一项制备方法制备得到。9.权利要求8所述的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐在酶固定化领域中的应用。10.根据权利要求9所述的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐在酶固定化领域中的应用，其特征在于包含如下步骤: 将权利要求8所述的磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐作为载体与酶液混合，在O?25 0C的温度下固定化I?12h，得到固定化酶。
【专利摘要】本发明属于新功能材料技术领域，具体涉及一种磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐及其制备方法与应用。本发明将纤维素溶解于NaOH-Urea水溶液中，在搅拌条件加入纳米Fe3O4，加水再生，产物分离并洗涤，得到磁性纤维素；将磁性纤维素与硝酸锌溶液混合搅拌5～30min，然后加入2-甲基咪唑溶液，搅拌条件下反应0.5～24h，将所得固体磁性分离，洗涤，干燥，得到磁性纤维素-二甲基咪唑锌盐；该产物能够用作固定化酶的载体，能够固定化脂肪酶、木瓜蛋白酶、绿豆环氧化物酶、过氧化物酶等一系列酶，具有作为蛋白质药物载体的潜质。
【IPC分类】C08K5/3445, C08L1/04, C12N11/12, C08K3/22
【公开号】CN105622985
【申请号】CN201610111487
【发明人】娄文勇, 徐红, 曹诗林, 宗敏华
【申请人】华南理工大学
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年2月29日