°C下发酵培养25天后，放出20L的发酵液， 补入20L灭菌后的发酵培养基，继续发酵10天;如此不断放料、补料，反复3次，发酵结束可得 发酵液11化，发酵周期为55天。
[0029] 2)微滤过滤:分别将四次发酵后的中国被毛抱发酵液20L、20L、20L和5化通过微滤 过滤，分别得到中国被毛抱湿菌丝体2.化g、2.15kg、2.10kg、5.化g (含水量75 %左右），微滤 透析液17.8Kg、17.85Kg、17.9Kg和49.5Kg，透析液的透光率为82-85%，C0D为40-60mg/L。微 滤过滤所用的膜材料是孔径为50nm的陶瓷膜，具体工艺条件是:操作溫度为50~6(TC，进压 为3. Obar，出压为1. Obar，压力差为2. Obar。
[0030] 3)低溫干燥:将步骤2得到的2.化g、2.1化邑、2.101^、5.51^中国被毛抱湿菌丝体进 入真空烘箱进行烘干，得到0.56化g、0.554kg、0.541kg和1.418kg水分含量3%左右的中国 被毛抱菌丝体，该菌丝体腺巧为0.12-0.16 %，甘露醇含量10-13 %，氨基酸含量在35-40 %。 依据WS3-181 (Z-60)-2006(Z)-2010标准方法检验。具体干燥工艺条件是:干燥溫度65°C，真 空度为-〇.〇85Mpa。
[0031] 传统生产工艺与本发明实施例1工艺产品产量、质量对比表
[0032]
[0034] 从上述表格可W看出采用传统工艺64天发酵2个批次，可获得菌丝体2.83化g;而 采用本发明工艺总发酵周期为55天，可获得4个批次的菌丝体3.08kg，发酵周期为传统工艺 的86%，而获得菌丝体产量是传统的111.5%，并且菌丝体产品质量要高于传统工艺生产。 因此采用本发明工艺既可缩短发酵周期，提高产量和质量，降低生产成本。
[0035] 实施例2
[0036] 1)中国被毛抱菌株(0曲iocordyceps sinensis)由中国工业微生物菌种保藏管理 中屯、提供并鉴定，保藏编号CICC14114。将培养好的中国被毛抱菌株种子液种到种子培养 基，接种量是10 %，种子培养基组成为葡萄糖2 %、蛋白腺0.8 %、奶粉0.5 %、教皮1.5 %、憐 酸二氨钟0.3 %、屯水硫酸儀0.3%、消泡剂0.02%，调节pH值6.0;培养条件为:通风比为1: 0.5vvm，罐压0.03Mpa，培养溫度18~20°C，培养7天左右即可得到种子液。将培养好种子液 接种到灭菌后1〇化发酵培养基，接种量15%，发酵培养基组成为葡萄糖2.5%、玉米粉2%、 蛋白腺1 %、酵母粉0.7 %、教皮2.5 %、憐酸二氨钟0.3 %、屯水硫酸儀0.3 %、消泡剂0.03 % ; 调节pH值6.5;通风比为1:0.5vvm，罐压0.04Mpa，在20 °C下发酵培养25天后，放出40L的发酵 液，补入40L灭菌后的发酵培养基，继续发酵10天;如此不断放料、补料，反复3次，发酵结束 可得发酵液23化，发酵周期为55天。
[0037] 2)微滤过滤：分别将四次发酵后的中国被毛抱发酵液40L、40L、40L和11化通过微 滤过滤，分别得到中国被毛抱湿菌丝体4.4kg、4.3kg、4.2kg、11 kg (含水量75 %左右），微滤 透析液35.6Kg、35.7Kg、35.8Kg和99Kg，透析液的透光率为83-87 %，COD为40-60mg/L。微滤 过滤所用的膜材料是孔径为50nm的陶瓷膜，具体工艺条件是:操作溫度为50~60°C，进压为 S.Obar，出压为1 .Obar，压力差为S.Obar。
[0038] 3)低溫干燥:将步骤2得到的4.4kg、4.3kg、4.2kg、11kg中国被毛抱湿菌丝体进入 真空烘箱进行烘干，得到1.13化g、1.108kg、1.08kg和2.84化g水分含量3 %左右的中国被毛 抱菌丝体，该菌丝体腺巧为0.12-0.16%，甘露醇含量10-13%，氨基酸含量在35-40%。依据 WS3-181(Z-60)-2006(Z)-2010标准方法检验。具体干燥工艺条件是:干燥溫度65°C，真空度 为-〇.085Mpa。
[0039] 传统生产工艺与本发明实施例2工艺产品产量、质量对比表
[0040]
[0042]从上述表格可W看出采用传统工艺64天发酵2个批次，可获得菌丝体5.52化g;而 采用本发明工艺总发酵周期为55天，可获得4个批次的菌丝体6.16化g，发酵周期为传统的 86%，而获得菌丝体产量是传统的111.6%，并且菌丝体产品质量要高于传统工艺生产。因 此采用本发明工艺既可缩短发酵周期，提高产量和质量，降低生产成本。
【主权项】
1. 一种快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是该方法包括下述步 骤： 1) 中国被毛孢半连续发酵液制备:将中国被毛孢种子液接种到灭菌后的发酵培养基进 行深层液态发酵得到中国被毛孢发酵培养液，接种量为体积含量的10~20%，通风比为1: 0.5-1.5vvm，罐压0.02~0.05Mpa，在15~20°C下发酵培养10-30天后，放出培养器容积的 10-50%的发酵液，补入同等体积的灭菌后的发酵培养基，继续发酵1-10天;如此不断放料、 补料，每次补料继续发酵1-10天，反复多次，得到中国被毛孢发酵液； 2) 中国被毛孢发酵液陶瓷膜过滤:将步骤1)中所得的中国被毛孢发酵液通过微滤膜得 到发酵液的微滤透析液和菌丝体，收集菌丝体； 3) 低温真空烘干:将步骤2)中所得的菌丝体在真空度为-0.065~-0.095Mpa，70~85°C 条件下进行干燥。2. 根据权利要求1所述的快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是步 骤1)所述的发酵条件为通风比为l:〇.5VVm，罐压0.04Mpa，在20°C下发酵培养25天。3. 根据权利要求1所述的快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是所 述的中国被毛孢种子液是通过以下方法制备得到的：中国被毛孢种子培养基组成为葡萄糖 1-3 %、蛋白胨0.5-2 %、奶粉0.1-1 %、麸皮1-3 %、磷酸二氢钾0.1-0.5 %、七水硫酸镁0. ΙΟ. 5 % 、 消泡剂0.01-0.05 % ; 调节pH值 5.5-6. 5; 培养条件为:通风比为1:0.5-1. 5vvm ， 罐压 0.02~0.05Mpa，培养温度15~20°C，培养周期5-15天。4. 根据权利要求3所述的快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是所 述的中国被毛孢种子液是通过以下方法制备得到的:将经活化摇瓶中国被毛孢菌菌种接入 种子培养基，中国被毛孢种子培养基组成为葡萄糖2%、蛋白胨0.8%、奶粉0.5%、麸皮 1.5 %、磷酸二氢钾0.3 %、七水硫酸镁0.3 %、消泡剂0.02-0.03 % ;调节pH值5.5-6.5;培养 条件为:通风比为l:〇.5-lvvm，罐压0.03~0.04Mpa，培养温度18~20°C，培养周期5-10天。5. 根据权利要求1所述的快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是中 国被毛孢发酵培养基组成为葡萄糖1-3 %、玉米粉1-3 %、蛋白胨0.5-2 %、酵母粉0.1-1 %、 麸皮1-3 %、磷酸二氢钾0.1-0.5 %、七水硫酸镁0.1-0.5 %、消泡剂0.01-0.05 % ;调节pH值 5.5~6.5〇6. 根据权利要求1所述的快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是该 方法所述的微滤膜为陶瓷膜或有机膜，其孔径在0.05~0.5μπι，操作温度为50~60°C，工作 压力:进压为2~4bar，出压为0~5bar。7. 根据权利要求6所述的快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是该 方法所述的微滤膜为陶瓷膜或有机膜，其孔径在50nm，操作温度为50~60°C，工作压力：进 压为3bar，出压为lbar。
【专利摘要】本发明公开了一种快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，该方法是将中国被毛孢菌种采用半连续发酵工艺快速获取富含大量的菌丝体的发酵液，然后将发酵液通过微滤膜处理分离得到中国被毛孢的菌丝体。本发明改变了传统中国被毛孢间歇性的分批发酵工艺，并且菌丝体的分离采用高效的陶瓷膜微滤替代离心机分离方式。半连续发酵工艺克服了传统分批发酵工艺的工艺环节多，中间间隙时间长，设备效率低等缺点；而采用高效的陶瓷膜过滤发酵液，能够减少进入滤液的菌丝体，既能提高菌丝体的收率，降低滤液的COD，降低污水处理量，又不破坏细胞本身，保证胞内有效成分的全部回收。与传统的工艺相比，本发明具有显着的经济效益、社会效益和环保效益。
【IPC分类】C12N1/14, C12R1/645, C12N1/02
【公开号】CN105670942
【申请号】CN201610146343
【发明人】王文风, 徐国华, 徐玲, 杨亚威, 张芙蓉, 孙妮娜, 董彩虹, 刘新利
【申请人】江苏神华药业有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月15日