;
[0055] (4)反相色谱填料：200 μ L粒径为40-60 μ m反相色谱填料HLB ;
[0056] (5)阳离子交换色谱填料：200 μ L粒径为40-60 μ m阳离子交换色谱填料MCX。
[0057] 2、组装方法（具体见附图1)
[0058] 向聚丙烯或玻璃柱管（附图1中的1)中先填入一片筛板（附图1中的8)，加入 阳离子交换色谱填料（附图1中的7)，再填入第二块筛板（附图1中的6)，加入反相色谱 填料（附图1中的5)，再填入第三块筛板（附图1中的4)，加入弱阴离子色谱填料（附图 1中的3)，再填入第四块筛板（附图1中的2)，压紧。
[0059] 实施例2 :固相萃取柱的原料及制备
[0060] 1、原料
[0061] (1)柱管：6mL的聚丙烯或玻璃柱管，内径12. 7mm ;
[0062] (2)筛板：10-30微米孔径的聚乙烯或聚四氟乙烯筛板；
[0063] (3)弱阴离子色谱填料：1000 μ L粒径为40-60 μ m弱阴离子色谱填料NH2;
[0064] (4)反相色谱填料：600 μ L粒径为40-60 μ m反相色谱填料HLB ;
[0065] (5)阳离子交换色谱填料：200 μ L粒径为40-60 μ m阳离子交换色谱填料MCX。
[0066] 2、组装方法
[0067]向聚丙烯或玻璃柱管中先填入一片筛板，加入阳离子交换色谱填料，再填入第二 块筛板，加入反相色谱填料，再填入第三块筛板，加入弱阴离子色谱填料，再填入第四块筛 板，压紧。
[0068] 实施例3 :固相萃取柱的原料及制备
[0069] 1、原料
[0070] (1)柱管：6mL的聚丙烯或玻璃柱管，内径12. 7mm ;
[0071] (2)筛板：10-30微米孔径的聚乙烯或聚四氟乙烯筛板；
[0072] (3)弱阴离子色谱填料：1000 μ L粒径为40-60 μ m弱阴离子色谱填料NH2;
[0073] (4)反相色谱填料：600 μ L粒径为40-60 μ m反相色谱填料HLB ;
[0074] (5)阳离子交换色谱填料：600 μ L粒径为40-60 μ m阳离子交换色谱填料MCX。
[0075] 2、组装方法
[0076] 向聚丙烯或玻璃柱管中先填入一片筛板，加入阳离子交换色谱填料，再填入第二 块筛板，加入反相色谱填料，再填入第三块筛板，加入弱阴离子色谱填料，再填入第四块筛 板，压紧。
[0077] 实施例4 :固相萃取柱的原料及制备
[0078] 1、原料：
[0079] (1)柱管：6mL的聚丙烯或玻璃柱管，内径12. 7mm ;
[0080] (2)筛板：10-30 μ m孔径的聚乙烯或聚四氟乙烯筛板；
[0081] (3)弱阴离子色谱填料：600 μ L粒径为40-60 μ m弱阴离子色谱填料NH2;
[0082] (4)阳离子交换色谱填料：200 μ L粒径为40-60 μ m阳离子交换色谱填料MCX。
[0083] 2、组装方法（具体见附图2)
[0084] 向聚丙烯或玻璃柱管（附图2中的1)中先填入一片筛板（附图2中的6)，加入阳 离子交换色谱填料（附图2中的5)，再填入第二块筛板（附图2中的4)，加入弱阴离子色 谱填料（附图2中的3)，再填入第三块筛板（附图2中的2)，压紧。
[0085] 实施例5 :固相萃取柱的原料及制备
[0086] 1、原料
[0087] (1)柱管：6mL的聚丙烯或玻璃柱管，内径12. 7mm ;
[0088] (2)筛板：10-30微米孔径的聚乙烯或聚四氟乙烯筛板；
[0089] (3)弱阴离子色谱填料：1000 μ L粒径为40-60 μ m弱阴离子色谱填料NH2;
[0090] (4)阳离子交换色谱填料：200 μ L粒径为40-60 μ m阳离子交换色谱填料MCX。
[0091] 2、组装方法
[0092] 向聚丙烯或玻璃柱管中先填入一片筛板，加入阳离子交换色谱填料，再填入第二 块筛板，加入弱阴离子色谱填料，再填入第三块筛板，压紧。
[0093] 实施例6 :固相萃取柱的原料及制备
[0094] 1、原料
[0095] (1)柱管：6mL的聚丙烯或玻璃柱管，内径12. 7mm ;
[0096] (2)筛板：10-30微米孔径的聚乙烯或聚四氟乙烯筛板；
[0097] (3)弱阴离子色谱填料：1000 μ L粒径为40-60 μ m弱阴离子色谱填料NH2;
[0098] (4)阳离子交换色谱填料：600 μ L粒径为40-60 μ m阳离子交换色谱填料MCX。
[0099] 2、组装方法
[0100] 向聚丙烯或玻璃柱管中先填入一片筛板，加入阳离子交换色谱填料，再填入第二 块筛板，加入弱阴离子色谱填料，再填入第三块筛板，压紧。
[0101] 实施例7 :真菌毒素的穿漏法
[0102] (1)准确称取5. 0g(精确至0.0 lg)均质好的樱桃样品在带盖的离心管中，加入 25mL酸化乙腈溶液（乙腈含量80%，含1 %甲酸），涡旋振荡2min后，150r/min常温振荡提 取0. 5h。然后在1000 OXg下离心5min，收集上清液待净化。
[0103] ⑵取5mL上清液，自然通过固相萃取柱（ImL)，收集过柱后的上清液，60°C下氮吹 近干。
[0104] (3)残渣用乙腈/5mM的醋酸铵水溶液（40/60, v/v)溶解，过0. 22 μm的滤膜后， 过滤液（即净化液）待进样分析。
[0105] 实施例8 :对实施例7的样品进行检测分析
[0106] 1、检测分析条件如下：
[0107] (1)液相分离的条件为：色谱柱为Waters UPLC BEH C18柱 (IOOmmX 2. 1mm，1. 7 μ m)或与其性质类似的反相色谱柱，流动相为（A) 5mM醋酸铵水溶液和 (B)乙腈。流速为0.3mL/min进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如下表1所示：
[0108] 表1流动相梯度洗脱程序（体积）
[0110] (2)质谱条件：离子源模式：正负离子模式（ESI+和ESI );喷雾电压：3. 5kv(ESI+) 和-I. 5kv(ESI );气化温度：400°C ;干燥气流速：12mL/min ;进样体积为5 μ L ;8种真菌毒 素的质谱参数见表2。
[0111] 表2链格孢毒素的质谱参数
[0112] CN 105148558 A 说明书 7/8 页
[0113] 注：*，定量离子
[0114] (3)真菌毒素固相萃取柱的重复性和变异系数：
[0115] 称取经测定空白试样5. 0g，加入200 μ L的上述8种真菌毒素混合标准溶液 (500ng/mL 1 的 Α0Η、AME、TeA、ALT、TEN、0ΤΑ、PAT、CIT)，充分混匀，并于室温下静置 lh，按照 实施例4的方法进行前处理并测定含量，每个处理方法平行测定6份。
[0116] 2、所有真菌毒素的添加回收率和变异系数见表3-1、3-2。
[0117] 表3-1 :8种真菌毒素的回收率及精密度
[0120] 表3-2 :8种真菌毒素的回收率及精密度
[0121] CN 105148558 A 说明书 8/8 页
[0122] 表3-U3-2的结果表明：与经过Romer的多功能净化柱相比，本发明所述固相萃 取柱具有更广的适用范围，可一次性对不同真菌毒素进行净化，所有真菌毒素的回收率为 87. 2%~106. 4%，且操作简单。
[0123] 3、基质效应
[0124] 本发明的方法考察了 8种真菌毒素在不同填料中的基质效应，具体结果见图3和 表4。
[0125] 表4 :8种真菌毒素的基质效应（％ )
[0127] 由图3和表4可知，采用本发明所述的固相萃取柱，几乎完全消除实施例4的基质 效应，固相萃取柱的净化效果要好于Romer固相萃取柱。
[0128] 虽然，上文中已经用一般性说明、【具体实施方式】及试验，对本发明作了详尽的描 述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见 的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的 范围。
【主权项】
1. 一种净化真菌毒素的固相萃取柱，其特征在于，该固相萃取柱包含以下部件中的至 少两种：弱阴离子交换色谱填料、反相色谱填料、阳离子交换色谱填料。2. 根据权利要求1所述的固相萃取柱，其特征在于，固相萃取柱包含弱阴离子交换色 谱填料和阳离子交换色谱填料时，弱阴离子交换色谱填料和阳离子交换色谱填料的体积比 为 1-5 :1-3 ; 优选地，弱阴离子交换色谱填料和阳离子交换色谱填料的体积比为3-5 :1-3 ; 进一步优选，弱阴离子交换色谱填料和阳离子交换色谱填料的体积比为3-5 :1。3. 根据权利要求1所述的固相萃取柱，其特征在于，所述固相萃取柱中包含弱阴离子 交换色谱填料、反相色谱填料与阳离子交换色谱填料时，三者的体积比为1-5 :1-3 :1-3 ; 优选地，弱阴离子交换色谱填料、反相色谱填料与阳离子交换色谱填料的体积比为 3-5:1-3:1-3; 进一步优选，弱阴离子交换色谱填料、反相色谱填料与阳离子交换色谱填料的体积比 为 3-5 :1-3 :1〇4. 根据权利要求1-3任一项所述的固相萃取柱，其特征在于，还含有筛板，筛板在不同 色谱填料中间，将填料隔开；所述筛板优选为3-4层，分别在不同色谱填料的两边和中间。5. 根据权利要求1-4任一项所述的固相萃取柱，其特征在于，所述弱阴离子交换色谱 填料为NH2，其主要成分是以硅胶为基质的氨丙基，其粒径优选为40-60 y m。6. 根据权利要求1-4任一项所述的固相萃取柱，其特征在于，所述反相色谱填料为 HLB，其主要成分为N-乙烯基吡咯烷酮-二乙烯基苯共聚物，其粒径优选为40-60 y m。7. 根据权利要求1-4任一项所述的固相萃取柱，其特征在于，所述阳离子交换色谱填 料为MCX，其粒径优选为40-60 ym ;所述筛板为10-30微米孔径的聚乙烯或聚四氟乙烯筛 板。8. -种制备权利要求1-7任一项所述的固相萃取柱的方法，其特征在于，该方法包括 以下步骤：在阳离子交换色谱填料上加入一层筛板，在此筛板上加入反向色谱填料，其上再 加入一层筛板，在此筛板上加入弱阴离子色谱填料；或 在筛板上加入阳离子交换色谱填料，再加入一层筛板，在此筛板上加入反向色谱填料， 其上再加一层筛板，在此筛板上加入弱阴离子色谱填料，其上再加入一层筛板，压紧，即得 固相萃取柱。9. 权利要求1-7任一项所述的固相萃取柱在净化真菌毒素方面的应用，SPE柱与样本 溶液的体积比为I :5-1 :30。10. 权利要求1-7任一项所述的固相萃取柱在净化其他中性或酸性毒素方面的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种净化真菌毒素的固相萃取柱及其应用，该固相萃取柱包含以下部件中的至少两种：弱阴离子交换色谱填料、反相色谱填料、阳离子交换色谱填料。本发明提供的固相萃取柱可以适用于各种水果、蔬菜、粮食、饲料和食品样品。
【IPC分类】G01N30/06, B01D15/20
【公开号】CN105148558
【申请号】CN201510491362
【发明人】王蒙, 冯晓元, 姜楠, 韦迪哲, 先宏, 王纪华
【申请人】北京农业质量标准与检测技术研究中心
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年8月11日