专利名称：利用CdTe量子点和AuNPs之间荧光内滤效应检测牛奶中三聚氰胺的制作方法
技术领域：
基于巯基乙酸(TGA)修饰的CdTe量子点和柠檬酸配体包覆的金纳米粒子(AuNPs) 之间的荧光内滤效应(IFE)而建立的牛奶中三聚氰胺的检测方法，属于分析化学技术领域。
背景技术：
三聚氰胺(melamine)的化学名称为2，4，6_三氨基-I，3，5_三嗪，其结构式如下它是一种重要的氮杂环有机化工原料，可以用来生产三聚氰胺甲醛树脂。由于它含氮量高达66%，而食品检测中通常所采用的凯氏定氮法无法对氮元素的来源进行识别，因此它经常被人为地添加到食品和动物饲料中以提高蛋白质含量。三聚氰胺的急性口服毒性不强，但三聚氰胺和其共存物三聚氰酸可以在肾脏内形成不溶性结晶。长期摄入高浓度的三聚氰胺能导致肾衰竭甚至死亡，尤其对儿童和青少年危害甚大。2008年9月，甘肃、江苏等多个省市集中出现婴儿结石事件，随后调查发现患儿多有食用三鹿牌婴幼儿配方奶粉的历史，经相关部门调查，发现该公司生产的三鹿牌婴幼儿配方奶粉存在严重质量问题，随后三鹿集团发出召回，声称奶粉受到三聚氰胺的污染，并决定立即召回2008年8月6日以前生产的三鹿牌婴幼儿奶粉。而后，一些国内生产的其他品牌奶粉和部分有奶粉成分的食品中也陆续检出了三聚氰胺，导致中国乳制品行业的诚信危机，也给人们的日常生活带来巨大的负面影响。目前，检测三聚氰胺的方法主要有高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法、气相色谱串联质谱法、酶联免疫吸附法(ELISA)和毛细管电泳法等。这些方法具有较高的灵敏度和较好的准确性，但其前处理步骤复杂、耗时，且需要昂贵的设备以及专业的操作技能，因此其广泛应用受到了限制。近年来，电化学方法、表面增强拉曼光谱(SERS)、红外光谱，基于聚乙二炔脂质体的比色传感器等其他方法也被陆续用于检测三聚氰胺，但这些方法也受限于复杂的化学合成、高成本或低灵敏度等。因此急需开发一种快速、简便、灵敏、低成本的检测方法用于检测三聚氰胺。我国政府规定三聚氰胺在婴幼儿奶粉和其它日常食品中的最大允许残留量分别为 I. O 和 2. 5mg/kg
发明内容
本发明的目的是提供一种基于TGA修饰的CdTe量子点和柠檬酸配体包覆的AuNPs 之间的IFE而建立的方法，用于快速、简单、灵敏地检测牛奶中三聚氰胺的含量。技术问题基于TGA修饰的CdTe量子点和柠檬酸配体包覆的AuNPs之间的IFE而建立的牛奶中三聚氰胺的检测方法，其特点在于AuNPs可以引起CdTe量子点的荧光猝灭， 而三聚氰胺可诱导AuNPs聚集，使CdTe量子点的荧光强度得到恢复，进而可通过观察体系荧光强度的变化来检测牛奶中的三聚氰胺。本发明的技术方案包括以下步骤=AuNPs的制备JGA-CdTe量子点的合成与纯化；AuNPs和CdTe量子点的光谱表征；AuNPs透射电镜表征；不同浓度AuNPs对CdTe量子点荧光强度的影响； AuNPs浓度的优化；检测方法的建立；不同干扰物质对体系的干扰实验；检测牛奶中的三聚氰胺。(I)AuNPs 的制备实验中所用的玻璃器皿都用王水浸泡24h，二次蒸馏水清洗，烘干备用，配制试剂所用蒸懼水需通过O. 45 μ m的滤膜过滤；制备时，向三口烧瓶中加入lmmol/L的氯金酸 50mL，在搅拌的情况下加热使其沸腾，快速加入38. 8mmol/L的柠檬酸三钠5mL，边加热边搅拌，溶液由淡黄色变成酒红色，反应持续lOmin，停止加热，继续搅拌lOmin，溶液冷却至室温后，用O. 45 μ m的微孔膜过滤，4°C保藏，所制得的AuNPs粒径为13nm ;将制得的AuNPs用纯净水按体积比I : I稀释待用，稀释后的浓度为4. 7X 10_7mol/L。(2) TGA-CdTe量子点的合成与纯化首先称量O. 0256gTe粉和O. 0386gNaBH4加入到三口烧瓶中，用高纯水配制pH=ll 的NaOH溶液IOOmL,向其中通入IOminN2，装于一恒压滴定漏斗①中，用高纯水配制浓度为 4X l(T3mol/L 的 CdCl2 溶液 IOOmL,加入 67 μ LTGA,用 lmol/L 的 NaOH 溶液调节 pH =11， 向其中通入IOminN2，将得到的澄清透明溶液装于另一恒压滴定漏斗②中，将整个装置与真空、N2系统连接起来，经历几次抽真空和通N2的步骤除去体系中的O2 ;略微加热，打开漏斗 ①，加入3 5滴水，电磁搅拌，引发反应，待Te粉基本反应完全后(溶液为红色并且黑色粉末消失)，将①中的水全部加入，得到透明浅红色溶液，再将②中溶液全部加入，整个过程都进行N2保护；溶液全部加入后继续搅拌lOmin，撤去N2保护，将得到的混合溶液用50%的微波功率输出加热进行晶体生长反应；得到的产物加入等体积的异丙醇洗涤，并离心除去过量前体，最后将其再分散在200mL的纯净水中；将制得的CdTe量子点用纯净水按体积比 I 9稀释待用，稀释后的浓度为3.60X10_6mol/L。(3) AuNPs和CdTe量子点的光谱表征采用UV-2550紫外.可见分光光度计(日本岛津公司)分别测量AuNPs和CdTe 量子点的紫外可见吸收光谱；采用RF-5301荧光光度计(日本岛津公司)测量激发波长为 450nm时的荧光光谱。(4) AuNPs透射电镜表征将AuNPs和AuNPs-三聚氰胺分别滴于镀有碳膜的铜网上，室温晾干后，用TEcNAI F20透射电镜观察其尺寸和形貌，加速电压为200kV。(5)不同浓度AuNPs对cdTe量子点荧光强度的影响在9个试管(5. OmL)中先依次加入不同量的AuNPs (a，O μ L ;b，100 μ L ;c，200 μ L ;d，300 μ L ；θ,400μ L ；f,500y L ；g,600y L ；h,700y L ;i，800 μ L)，再分别加入纯净水定容至2mL，使混合物在25°C下反应lOmin，最后加入3. 6 X 10_6mol/L的CdTe量子点lmL，测量其荧光光谱。(6) AuNPs浓度的优化取33个试管(5. OmL)分成3组，每组11个；向3组试管中分别加入500 μ L、 800yL,960uL AuNPs，再依次向各组①-O号试管中加入不同浓度的三聚氰胺，使其分另Ij 达到一定的最终浓度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ；e,40 μ g/L ；f, 50 μ g/L ；g, 60 μ g/L ；h, 70 μ g/L ； ,80μ g/L ；j, 90 μ g/L ;k，100y g/L)，使混合物在 25 °C 下反应lOmin，最后加入CdTe量子点lmL，测量其荧光光谱。(7)检测方法的建立在11个试管(5. OmL)中先分别加入800 μ L AuNPs,再依次加入不同浓度的三聚氰胺，使其分别达到一定的最终浓度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ；e, 40 μ g/L ；f, 50 μ g/L ；g,60y/L ；h, 70 μ g/L ； ,80μ g/L ；j, 90 μ g/L ；k, 100 μ g/L),使混合物在25°C下反应lOmin，最后加入CdTe量子点lmL，测量其荧光光谱。(8)不同干扰物质对体系的干扰实验分别将不同的干扰物质加入到含有50 μ g/L的三聚氰胺的AuNPs-CdTe体系中，按权利要求8所述检测方法，测量荧光光谱各干扰物质的浓度分别为维生素B1 (O. 44g -L-1)， 葡萄糖(30g · L-1)，苏氨酸(143g · L-1)，K+(143g · L-1)，Na+(43g · L-1)，Cr(141g · L-1)， N<V(150g · I71),色氨酸(7-5g · I71)，甘氨酸(7. 5g · I71)，赖氨酸(14g · I71)，组氨酸(7. 5g · L—1)，维生素 C(lg · L—1)，Mg2+(lg · L—1)，Ca2+(5. 65g · L—1)，乳糖(25g · L—1)， PO43IlOg · L-1)。(9)检测牛奶中的三聚氰胺将不同浓度的三聚氰胺加入到牛奶中，使其中的三聚氰胺分别达到一定的最终浓度(a, Omg/L ；b, O. lmg/L ；c, 0. 2mg/L ；d, 0. 3mg/L ；e, 0. 4mg/L ；f, 0. 5mg/L ；g, 0. 6mg/L ；h,
0.7mg/L ；i,0. 8mg/L ； j,0. 9mg/L ；k, I. Omg/L ；1,1. lmg/L);然后在 IOmL 的离心管中，向 2mL 的上述不同牛奶中分别加入2mL的水、ImL的氯乙酸和ImL的氯仿,镟润震荡Imin,将蛋白质沉淀，并溶解基质中的有机物，然后超声处理15min，12000rmp离心IOmin分离沉淀；将 2mL的上清液转移到另一个离心管中，使用IM的Na2CO3调整pH为8. 0，溶液在IOOOOrmp再次离心IOmin除去沉淀；上清液用O. 45 μ m GTTP (聚碳酸酯滤膜)过滤，各取300 μ L最终溶液，按权利要求8所述检测方法，加入到检测体系中,测量各自的荧光光谱。本发明的有益效果本发明制备了一种柠檬酸配体包覆的AuNPs和一种TGA修饰的CdTe量子点，并建立了一种可快速、简便、灵敏、低成本地检测牛奶中三聚氰胺的方法， 为今后乳品行业的监管提供了方便。
图la =AuNPs的紫外可见吸收光谱；b =TGA-CdTe量子点的荧光光谱；c =TGA-CdTe 量子点的紫外可见吸收光谱。图2透射电镜照片(A)AuNPs ； (B)AuNPs-三聚氰胺；A中插图为标尺为20nm时的 AuNPs0图3不同浓度AuNPs存在下CdTe量子点的荧光光谱。a_i中AuNPs浓度分别为0、0. 16、
0.32,0. 48,0. 6,0. 72,0. 88,1. 0,1. 25Xl(T7mol/L ；CdTe 量子点:1. 2Xl(T7mol/L。图4CdTe量子点在含有不同浓度的AuNPs-三聚氰胺体系中的荧光响应值。 AuNPs · 0. 8X l(T7mol/L ■ :I. 25X l(T7mol/L ▲ :I. 5X l(T7mol/LCdTe I. 2X l(T7mol/L图5不同浓度三聚氰胺对AuNPs-CdTe体系荧光强度的影响。a_k中三聚氰胺浓度分别为0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、10(^8/1 ；AuNPs :1. 25Xl(T7mol/L ;CdTe 量子点
1.2Xl(T7mol/L。图6(A)不同干扰物质存在时体系的荧光光谱；(B)不同干扰物质对体系的影响。 干扰物质维生素 B1 (O. 44g · L—1)，葡萄糖(30g · L—1)，苏氨酸(143g · L-1)，K+(143g · L-1)， Na+ (43g · L—1)，Cl— (141g · L—1)，N03_ (150g · L—1)，色氨酸(7. 5g · L—1)，甘氨酸(7. 5g · L—1)，赖氨酸(14g · I71),组氨酸(7. 5g · I71),维生素 C(lg · I71)，Mg2+(lg · I71)，Ca2+ (5. 65g · I71)， 乳糖(25g · Γ1)，PO43IlOg · Γ1)。三聚氰胺50 μ g/L ；AuNPs :1. 25Xl(T7mol/ ；CdTe 量子点1. 2Xl(T7mol/L。图7实际样品检测的标准曲线。a-Ι中三聚氰胺浓度分别为0、0. 1,0. 2,0. 3,0. 4、 O. 5,0. 6,0. 7,0. 8,0. 9、I. O、I. lmg/L ；AuNPs :1. 25Xl(T7mol/ ；CdTe 量子点:1. 2Xl(T7mol/ L。图8加标回收实验。
具体实施例方式AuNPs 的制备材料/试剂购自北京化工厂的氯金酸和柠檬酸三钠。方法实验中所用的玻璃器皿都用王水浸泡24h，二次蒸馏水清洗，烘干备用，配制试剂所用蒸懼水需通过O. 45 μ m的滤膜过滤；制备时，向三口烧瓶中加入lmmol/L的氯金酸50mL，在搅拌的情况下加热使其沸腾，快速加入38. 8mmol/L的柠檬酸三钠5mL，边加热边搅拌，溶液由淡黄色变成酒红色，反应持续lOmin，停止加热，继续搅拌lOmin，溶液冷却至室温后，用O. 45 μ m的微孔膜过滤，4°C保藏，所制得的AuNPs粒径为13nm ;将制得的AuNPs 用纯净水按体积比I : I稀释待用，稀释后的浓度为4. 7X 10_7mol/L。结果经透射电镜表征，所制得的金纳米粒子粒径为13nm，且分散性良好，粒径均匀。TGA-CdTe量子点的合成与纯化材料/试剂购自国药集团化学试剂有限公司的Te粉、NaBH4、TGA、CdCl2 ;购自北京化工厂的NaOH。方法首先称量O. 0256gTe粉和O. 0386gNaBH4加入到三口烧瓶中，用高纯水配制 PH=Il的NaOH溶液IOOmL,向其中通入IOminN2，装于一恒压滴定漏斗①中，用高纯水配制浓度为 4X l(T3mol/L 的 CdCl2 溶液 IOOmL,加入 67 μ LTGA，用 lmol/L 的 NaOH 溶液调节 pH=ll， 向其中通入IOminN2，将得到的澄清透明溶液装于另一恒压滴定漏斗②中，将整个装置与真空、N2系统连接起来，经历几次抽真空和通N2的步骤除去体系中的O2 ;略微加热，打开漏斗 ①，加入3 5滴水，电磁搅拌，引发反应，待Te粉基本反应完全后(溶液为红色并且黑色粉末消失)，将①中的水全部加入，得到透明浅红色溶液，再将②中溶液全部加入，整个过程都进行N2保护；溶液全部加入后继续搅拌lOmin，撤去N2保护，将得到的混合溶液用50%的微波功率输出加热进行晶体生长反应；得到的产物加入等体积的异丙醇洗涤，并离心除去过量前体，最后将其再分散在200mL的纯净水中；将制得的CdTe量子点用纯净水按体积比 I . 9稀释待用。结果所制得的TGA-CdTe量子点粒径为2. 6nm,浓度为3. 60 X 10_6mOl/L，且分散性良好，粒径均匀。研究不同浓度AuNPs对CdTe量子点的荧光光谱的影响材料/试剂13nm的金纳米粒子；CdTe量子点。方法在9个试管(5. OmL)中先依次加入不同量的AuNPs (a，O μ L ;b，100 μ L ;c， 200 μ L ；d,300y L ；e,400y L ；f,500y L ；g,600y L ；h,700y L ； ,800μ L)，再分别加入纯净水定容至2mL，使混合物在25 V下反应lOmin，最后加入3. 6 X 10_6mol/L的CdTe量子点 lmL，测量其荧光光谱。结果不同浓度的AuNPs可使CdTe量子点的荧光发生不同程度的猝灭。AuNJPs浓度的优化材料/试剂13nm的金纳米粒子；CdTe量子点；三聚氰胺溶液。方法取33个试管(5. OmL)分成3组，每组11个；向3组试管中分别加入500 μ L、 800 μ L、960 μ LAuNPs,再依次向各组①-Θ号试管中加入不同浓度的三聚氰胺，使其分另Ij 达到一定的最终浓度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ；e,40 μ g/L ；f, 50 μ g/L ；g, 60 μ g/L ；h, 70 μ g/L ； ,80μ g/L ；j, 90 μ g/L ;k，100y g/L)，使混合物在 25 °C 下反应lOmin，最后加入CdTe量子点lmL，测量其荧光光谱。结果结果表明，最适AuNPs的浓度为I. 25 X l(T7mol/L。反应时间的优化材料/试剂13nm的金纳米粒子；三聚氰胺溶液。方法将lmg/L三聚氰胺加入到I. 25 X 10^7mol/L的AuNPs溶液中，每隔30s扫描其吸收光谱。结果结果表明，最佳反应时间为lOmin。pH的优化材料/试剂13nm的金纳米粒子；CdTe量子点；三聚氰胺溶液。方法在8个试管(5. OmL)中依次加入AuNPs、三聚氰胺和量子点，最终浓度分别为 I. 25Xl(T7mol/L、50y g/L、l. 2Xl(T6mol/L。用 O. lmol/L 的 HCl 或 NaOH 调节 pH 从 4 到 11，测量其荧光光谱。结果结果表明，最佳pH为8。检测方法的建立材料/试剂13nm的金纳米粒子；CdTe量子点；三聚氰胺溶液。方法在11个试管(5. OmL)中先分别加入800 μ L AuNPs,再依次加入不同浓度的三聚氰胺，使其分别达到一定的最终浓度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ； e,40 μ g/L ；f,50 μ g/L ；g,60 μ g/L ；h,70 μ g/L ；i,80 μ g/L ；j,90 μ g/L ；k, 100 μ g/L)，使混合物在25°C下反应lOmin，最后加入CdTe量子点lmL，测量其荧光光谱。结果不同浓度的三聚氰胺可使AuNPs-CdTe体系的荧光发生不同程度的恢复，该方法可用于三聚氰胺的定量检测。不同干扰物质对体系的干扰实验材料/试剂13nm的金纳米粒子；CdTe量子点；三聚氰胺溶液。方法分别将不同的干扰物质加入到含有50 μ g/L的三聚氰胺的AuNPs-CdTe 体系中，按权利要求8所述检测方法，测量荧光光谱；各干扰物质的浓度分别为维生素 B1 (O. 44g · L-1)，葡萄糖(30g · L-1)，苏氨酸(143g · L-1)，K. (143g · L-1)，Na+ (43g · L-1)， Cr(141g .L-1)，N03_(150g 吨―1)，色氨酸(7. 5g 吨―1)，甘氨酸(7. 5g H，赖氨酸(14g .L-1)， 组氨酸(J. 5g · I71),维生素 C(lg · I71), Mg2+(lg · I71), Ca2+(5. 65g · I71),乳糖(25g · I71), PO43IlOg · L-1)。结果牛奶中可能存在的干扰物质对该检测方法无影响。对牛奶实际样品进行检测。材料/试剂13nm的金纳米粒子；CdTe量子点；三聚氰胺溶液；购自北京化工厂的氯乙酸、氯仿；本地市场上购买的牛奶。方法在IOmL的离心管中，向2mL的牛奶中分别加入2mL的水，ImL的氯乙酸和 ImL的氯仿,镟润震荡Imin,将蛋白质沉淀,并溶解基质中的有机物,然后超声处理15min, 12000rmp离心IOmin分离沉淀；将2mL的上清液转移到另一个离心管中，使用IM的Na2CO3 调整pH为8. 0，溶液在IOOOOrmp再次离心IOmin除去沉淀；上清液用O. 45 μ m GTTP聚碳酸酯滤膜过滤获得最终溶液，用于权利要求6中所述检测方法；当将一定量的三聚氰胺加入到牛奶中时，也与前述过程采取相同的预处理和分析步骤。结果本发明中，三聚氰胺的检出限为O. 02mg/L，线性范围为O. I I. lmg/L，加标回收率为(103 104) % ο
权利要求
1.基于巯基乙酸(TGA)修饰的CdTe量子点和柠檬酸配体包覆的金纳米粒子(AuNPs) 之间的荧光内滤效应(IFE)而建立的牛奶中三聚氰胺的检测方法，其特点在于AuNPs可以引起CdTe量子点的荧光猝灭，而三聚氰胺可诱导AuNPs聚集，使CdTe量子点的荧光强度得到恢复，进而可利用以上原理检测牛奶中的三聚氰胺，包括以下步骤=AuNPs的制备； TGA-CdTe量子点的合成与纯化；AuNPs和CdTe量子点的光谱表征；AuNPs透射电镜表征； 不同浓度AuNPs对CdTe量子点荧光强度的影响；AuNPs浓度的优化；不同浓度三聚氰胺对 AuNPs-CdTe体系荧光强度的影响；不同干扰物质对体系的干扰实验；检测牛奶中的三聚氰胺。
2.如权利要求I所述的方法，其中所述AuNPs的制备步骤如下实验中所用的玻璃器皿都用王水浸泡24h，二次蒸馏水清洗，烘干备用，配制试剂所用蒸懼水需通过O. 45 μ m的滤膜过滤；制备时，向三口烧瓶中加入lmmol/L的氯金酸50mL,在搅拌的情况下加热使其沸腾，快速加入38. 8mmol/L的朽1檬酸三钠5mL,边加热边搅拌,溶液由淡黄色变成酒红色，反应持续lOmin，停止加热，继续搅拌lOmin，溶液冷却至室温后，用 O. 45 μ m的微孔膜过滤，4°C保藏，所制得的AuNPs粒径为13nm ;将制得的AuNPs用纯净水按体积比I : I稀释待用，稀释后的浓度为4. 7X 10_7mol/L。
3.如权利要求I所述的方法，其中所述TGA-CdTe量子点的合成与纯化步骤如下首先称量O. 0256g Te粉和O. 0386gNaBH4加入到三口烧瓶中，用高纯水配制pH = 11 的NaOH溶液IOOmL,向其中通入IOmin N2，装于一恒压滴定漏斗①中，用高纯水配制浓度为 4X l(T3mol/L 的 CdCl2 溶液 IOOmL,加入 67 μ L TGA,用 lmol/L 的 NaOH 溶液调节 pH = 11， 向其中通入IOmin N2，将得到的澄清透明溶液装于另一恒压滴定漏斗②中，将整个装置与真空、N2系统连接起来，经历几次抽真空和通N2的步骤除去体系中的O2 ;略微加热，打开漏斗①，加入3 5滴水，电磁搅拌，引发反应，待Te粉基本反应完全后(溶液为红色并且黑色粉末消失)，将①中的水全部加入，得到透明浅红色溶液，再将②中溶液全部加入，整个过程都进行N2保护；溶液全部加入后继续搅拌lOmin，撤去N2保护，将得到的混合溶液用50% 的微波功率输出加热进行晶体生长反应；得到的产物加入等体积的异丙醇洗涤，并离心除去过量前体，最后将其再分散在200mL的纯净水中；将制得的CdTe量子点用纯净水按体积比I : 9稀释待用，稀释后的浓度为3. 60X10_6mol/L。
4.如权利要求I所述的方法，其中所述AuNPs和CdTe量子点的光谱表征步骤如下采用UV-2550紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)分别测量AuNPs和CdTe量子点的紫外可见吸收光谱；采用RF-5301荧光光度计(日本岛津公司)测量激发波长为450nm 时的突光光谱。
5.如权利要求I所述的方法，其中所述AuNPs透射电镜表征的步骤如下将AuNPs和AuNPs-三聚氰胺分别滴于镀有碳膜的铜网上，室温晾干后，用TECNAI F20 透射电镜观察其尺寸和形貌，加速电压为200kV。
6.如权利要求I所述的方法，其中所述观察不同浓度AuNPs对CdTe量子点荧光强度的影响的步骤如下在9个试管(5. OmL)中先依次加入不同量的AuNPs (a，0 μ L ;b，100 μ L :c，200 μ L ;d， 300 μ L ;e，400 μ L ；f, 500 μ L ;g，600 μ L ；h, 700 μ L ;i，800 μ L)，再分别加入纯净水定容至 2mL，使混合物在25 V下反应lOmin，最后加入3. 6 X 10_6mol/L的CdTe量子点lmL，测量其突光光谱。
7.如权利要求I所述的方法，其中所述AuNPs浓度的优化步骤如下取33个试管(5. OmL)分成3组，每组11个；向3组试管中分别加入500 μ L、800 μ L、 960 μ L AuNPs，再依次向各组①-0号试管中加入不同浓度的三聚氰胺，使其分别达到一定的最终浓度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ；e,40 μ g/L ；f, 50 μ g/ L ；g, 60 μ g/L ；h, 70 μ g/L ； ,80μ g/L ；j, 90 μ g/L ;k，100 μ g/L)，使混合物在 25°C 下反应 lOmin，最后加入CdTe量子点lmL，测量其荧光光谱。
8.如权利要求I所述的方法，其中所述检测方法的建立的步骤如下在11个试管(5. OmL)中先分别加入800 μ L AuNPs，再依次加入不同浓度的三聚氰胺， 使其分别达到一定的最终浓度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ；e,40 μ g/ L ；f, 50 μ g/L ；g, 60 μ g/L ；h, 70 μ g/L ； ,80μ g/L ；j, 90 μ g/L ；k, 100 μ g/L),使混合物在 25°C下反应lOmin，最后加入CdTe量子点lmL，测量其荧光光谱。
9.如权利要求I所述的方法，其中所述不同干扰物质对体系的干扰实验步骤如下分别将不同的干扰物质加入到含有50 μ g/L的三聚氰胺的AuNPs-CdTe体系中，按权利要求8所述检测方法，测量荧光光谱；各干扰物质的浓度分别为维生素B1 (O. 44g · L-1)， 葡萄糖(30g · L-1)，苏氨酸(143g · L-1)，K+(143g · L-1)，Na+(43g · L-1)，Cr(141g · L-1)， N<V(150g · I71),色氨酸(7. 5g · I71),甘氨酸(7. 5g · I71),赖氨酸(14g · I71),组氨酸(7. 5g · L—1)，维生素 C(lg · L—1)，Mg2+(lg · L—1)，Ca2+(5. 65g · L—1)，乳糖(25g · L—1)， PO43IlOg · L-1)。
10.如权利要求I所述的方法，其中所述检测牛奶中的三聚氰胺的步骤如下将不同浓度的三聚氰胺加入到牛奶中，使其中的三聚氰胺分别达到一定的最终浓度(a, Omg/L ；b, O. lmg/L ；c, 0. 2mg/L ；d, 0. 3mg/L ；e, 0. 4mg/L ；f, 0. 5mg/L ；g, 0. 6mg/L ；h, 0. 7mg/L ；i,0. 8mg/L ； j,0. 9mg/L ；k, I. Omg/L ；1,1. lmg/L);然后在 IOmL 的离心管中，向 2mL 的上述不同牛奶中分别加入2mL的水、ImL的氯乙酸和ImL的氯仿,镟润震荡Imin,将蛋白质沉淀，并溶解基质中的有机物，然后超声处理15min，12000rmp离心IOmin分离沉淀；将 2mL的上清液转移到另一个离心管中，使用IM的Na2CO3调整pH为8. 0，溶液在IOOOOrmp再次离心IOmin除去沉淀；上清液用O. 45 μ m GTTP (聚碳酸酯滤膜)过滤，各取300 μ L最终溶液，按权利要求8所述检测方法，加入到检测体系中,测量各自的荧光光谱。
全文摘要
本发明涉及一种基于巯基乙酸(TGA)修饰的CdTe量子点和柠檬酸配体包覆的金纳米粒子(AuNPs)之间的荧光内滤效应(IFE)而建立的牛奶中三聚氰胺的检测方法，属于分析化学领域。检测步骤包括AuNPs的制备；TGA-CdTe量子点的合成与纯化；牛奶样品的前处理；检测牛奶中的三聚氰胺。本发明根据AuNPs可以引起CdTe量子点的荧光猝灭，而三聚氰胺可诱导AuNPs聚集，使CdTe量子点的荧光强度得到恢复的原理，可简单、快速、灵敏地检测牛奶中的三聚氰胺，为以后乳品行业的监管提供了方便。
文档编号G01N21/64GK102608086SQ20121000811
公开日2012年7月25日 申请日期2012年1月12日 优先权日2012年1月12日
发明者关丰睿, 孙春燕, 平红, 张民伟, 曹先一, 李宏坤, 郭佳佳 申请人:吉林大学