一种平消片有效成分含量测定方法
【专利摘要】本发明涉及平消片有效成分的含量测定方法，包括对照品溶液、供试品溶液的制备、高效液相色谱条件的制定，其中柚皮苷含量不低于2.26mg/片，新橙皮苷含量不低于1.33mg/片，该方法简单、安全可靠，能够真实反映产品的含量及质量，适合产业化的日常生产检验。
【专利说明】一种平消片有效成分含量测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药领域，尤其是涉及有效成分的含量测定方法。
【背景技术】[0002]现有中成药平消片，是一种常用抗肿瘤中成药。在药典及部颁标准记载的平消片的【含量测定】取本品30片，除去包衣，精密称定，研细，取粉末约4g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入氯仿20ml与浓氨溶液1ml，密塞，称定重量，冷浸48小时，或超声提取40分钟，称重，用氯仿补足损失的重量，充分振摇，滤过，精密量取滤液10ml，置分液漏斗中，以硫酸溶液(0.5mol/L)提取4次，每次10ml，提取液均以硫酸溶液(0.5mol/L)预先湿润的滤纸滤入50ml量瓶中，并以硫酸溶液(0.5mol/L)适量洗涤滤器，洗液并入量瓶中，再加硫酸溶液(0.5mol/L)至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加硫酸液(0.5mol/L)至刻度，摇匀照分光光度法，在262nm及300nm波长处测定吸收度，平均片重本品每片含马钱子以士的宁(C12H22N2O2)计，应为0.25~0.35mg。
[0003]平消片处方为郁金54g仙鹤草54g五灵脂45g白矾54g硝石54g干漆(制)18g枳壳(麸炒)90g马钱子粉36g，枳壳的含量最多，是最主要的组分，上述药典中含量测定方法只测定马钱子中士的宁的含量，不能真实反映产品的质量，以至于产品的稳定性无法控制，给生产及患者带来隐患。
【发明内容】
[0004]为了解决上述技术问题，本发明提供了一种平消片有效成分的含量测定方法，该方法准确、可靠、能够真实反映产品的质量。
[0005]本发明是通过以下技术方案实现的:
[0006]一种平消片中有效成分的含量测定方法，包括如下步骤:
[0007](I)对照品的制备:取柚皮苷、新橙皮苷对照品适量；
[0008](2)供试品的制备:取样品用甲醇或乙醇提取后至于容量瓶中备用；
[0009](3)高效液相色谱条件:C184.6 X 250mm, 5 μ m色谱柱、流动相乙腈-水、流速
0.5-1.2ml.mirT1 检测波长 245_360nm ；
[0010](4)测定法:精密吸取对照品及供试品溶液注入液相色谱仪即得。
[0011]上述步骤⑴所述柚皮苷对照品浓度为80ug/lml，新橙皮苷对照品浓度60ug/lml。上述步骤(2)中所述的供试品用甲醇超声提取后至于容量瓶中备用。优选步骤
(2)中所述的供试品加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
[0012]上述步骤(3)中流动相的pH值为2.0-5.0，流动相乙腈-水15_30: 85-70.所述流动相用酸调节PH值，优选为pH值3.0，流动相乙腈-水=20: 80;所述的酸包括但不限于为磷酸、醋酸、甲酸、柠檬酸、酒石酸、硫酸氢纳、硫酸氢钾、盐酸、硫酸、碳酸、高氯酸、苹果酸、枸椽酸、水杨酸、咖啡酸等，优选磷酸、醋酸、甲酸、柠檬酸、酒石酸、硫酸氢纳、硫酸氢钾等，最佳为磷酸。所述磷酸浓度为5-20%，优选浓度为10%。本发明中优选10%磷酸能够使平消片中各色谱峰有很好的分离，改善峰拖尾现象。
[0013]上述步骤⑶中所述的优选流动相乙腈-水=20: 80,流速为1.0ml.mirT1,检测波长283nm
[0014]上述步骤(4)中所述测定，优选柚皮苷含量不低于2.26mg/片，新橙皮苷含量不低于 1.33mg/ 片。
[0015]本发明最佳的平消片有效成分含量测定方法，包括如下步骤:
[0016](I)对照品的制备:精密称取柚皮苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含柚皮苷SOug的溶液；精密称取新橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含新橙皮苷60ug的溶液；
[0017](2)取本品20片，置研钵中研细过四号筛，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；
[0018](3)高效液相色谱条件
[0019]色谱柱:WatersC18柱 4.6X 250mm, 5 μ m,流动相:乙腈-水=20: 80,用10%磷酸调节PH值3.0 ;检测波长为283nm ;柱温:室温；流速:1.0ml.mirT1 ;进样方式:自动进样；
[0020]⑷测定法
[0021]分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0022]本发明所述的平消片的处方为:重量份药材郁金1-5份、仙鹤草1-5份、五灵脂1-5份、白矾1-5、硝石1-5、制干漆0.5-3份、麸炒枳壳3_7份、马钱子粉0.5-4份。优选重量份药材郁金2-4份、仙鹤草2-4份、五灵脂2-4份、白矾2-4、硝石2_4份、制干漆0.5-2份、麸炒枳壳4-6份、马钱子粉1-3份。最佳重量份药材郁金3份、仙鹤草3份、五灵脂2.5份、白矾3份、硝石3份、制干漆I份、麸炒枳壳5份、马钱子粉2份。
[0023]本发明平消片的制备方法按照药典制备，优选下述方法制备:
[0024]以上8味药材，取干漆、五灵脂、白矾、硝石粉碎成细粉，取郁金、麸炒枳壳粉碎，用乙醇为溶剂进行渗漉，收集渗漉液；渗漉后的药渣与仙鹤草加水煎煮二次，滤过，合并煎液；渗漉液回收乙醇后，与上述滤液合并，减压浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入马钱子粉、上述细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0025]最佳地，本发明所述的制备方法，包括如下步骤:
[0026]以上八味，干漆、五灵脂、白矾、硝石粉碎成细粉；郁金、麸炒枳壳粉碎成最粗粉，用70%乙醇为溶剂，进行渗漉，收集渗漉液；药渣与仙鹤草加水煎煮二次，滤过，合并煎液；渗漉液回收乙醇后，与上述滤液合并，减压浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入马钱子粉、上述细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0027]为了更好的证明本发明的含量测定的安全可靠，本发明通过下述方法学加以验证。
[0028]试验例方法学验证
[0029]1、仪器与试药
[0030]试剂:乙腈(色谱纯)，甲醇、磷酸均为分析纯。[0031]样品:西安正大制药有限公司提供。
[0032]对照品:柚皮苷对照品(批号:110722-200309)、新橙皮苷对照品(批号:111857-201001)均由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用。
[0033]仪器:高效液相色谱仪(Agilentl200) ； ；DELTA 320PH计(梅特勒-托利多仪器有限公司);AL-204型电子分析天平(Max = 210g、d = 0.0OOlg、梅特勒-托利多仪器有限公司)；TG332A型微量分析天平(Max = 20g、d = 0.01mg) ；HQ-500DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
[0034]2、色谱条件:见实施例一
[0035]3、对照品溶液制备:见实施例一
[0036]4、供试品溶液制备:见实施例一
[0037]5、缺枳壳的阴性供试品溶液的制备
[0038]按处方组成十分之一份量，取除去枳壳的其余药味一起，按工艺要求制得不含枳壳的阴性样品，取该阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备缺枳壳的阴性供试品溶液。
[0039]6、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0040]7、缺枳壳的阴性样品干扰性测定:
[0041]分别精密吸取上述对照品溶液，供试品溶液及缺枳壳的阴性供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，供试品溶液在与对照品溶液保留时间相同处有相应的色谱峰，缺枳壳的阴性供试品溶液在与对照品溶液保留时间相同处没有相应的色谱峰，但与供试品溶液其它色谱峰保留时间一致，色谱峰信息丰富，阴性样品无干扰。
[0042]8、线性关系的考察
[0043]分别精密吸取柚皮苷对照品溶液(浓度分别为，每Iml含柚皮苷8.48ug、25.44ug、42.4ug、59.36ug、84.8ug)各IOul，新橙皮苷对照品溶液(浓度分别为，每Iml含新橙皮苷
7.95ug、23.85ug、39.75ug、55.65ug、79.5ug)各10ul，分别注入液相色谱仪，测定。以对照品浓度为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，得柚皮苷与新橙皮苷线性回归方程。柚皮苷线性范围在8.48~84.Syg范围内呈良好的线性关系。线性回归方程为Y=15.819X-3.3008 ；R2 = 0.9999。结果分别见表1和图1。新橙皮苷线性范围在7.95~79.5μ8范围内呈良好的线性关系。线性回归方程为Y= 17.518X-1.9234;R2= I。结果分别见表2和图2。
[0044]表1柚皮苷线性关系考察结果
[0045]
【权利要求】
1.一种平消片中有效成分的含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)对照品的制备:取柚皮苷、新橙皮苷对照品适量； (2)供试品的制备:取平消片除去包衣，用甲醇或乙醇提取后至于容量瓶中备用； (3)高效液相色谱条件:C184.6Χ250.ι，5μπι色谱柱、流动相乙腈-水、流速0.5-1.2ml.mirT1 检测波长 245_360nm ； (4)测定法:精密吸取对照品及供试品溶液注入液相色谱仪即得。
2.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于:所述的步骤(I)柚皮苷对照品浓度为80ug/ml,新橙皮苷对照品浓度60ug/ml。
3.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于:步骤(2)中所述的供试品用甲醇超声提取后至于容量瓶中备用。
4.如权利要求3所述的含量测定方法，其特征在于:步骤(2)中所述的供试品加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
5.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于:所述的步骤(3)中流动相的pH值为 2.0-5.0，流动相乙腈-水=15-30: 85-70。
6.如权利要求4所述的含量测定方法，其特征在于:所述的步骤(3)中流动相用酸调节PH值为3.0，所述的酸为磷酸、醋酸、甲酸、柠檬酸、酒石酸、硫酸氢纳、硫酸氢钾中的一种。
7.如权利要求5所述的含量测定方法，其特征在于:所述的步骤(3)中酸为磷酸，浓度为 5-20% ο
8.如权利要求1或5所述含量测定方法，其特征在于:步骤(3)中所述的流动相乙腈-水=20: 80，流速为1.0ml.mirT1，检测波长283nm
9.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于:步骤(4)中所述测定，柚皮苷含量不低于2.26mg/片，新橙皮苷含量不低于1.33mg/片。
10.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在，包括如下步骤: (1)对照品的制备:精密称取柚皮苷对照品适量，加甲醇制成每Irnl含柚皮苷SOug的溶液；精密称取新橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含新橙皮苷60ug的溶液； (2)供试品的制备:取平消片20片，出去包衣，置研钵中研细过四号筛，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得； (3)高效液相色谱条件 色谱柱:WatersC18柱4.6X 250mm, 5 μ m,流动相:乙腈-水=20: 80,用10%磷酸调节PH值3.0 ;检测波长为283nm ;柱温:室温；流速:1.0ml.mirT1 ;进样方式:自动进样； (4)测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。
【文档编号】G01N30/02GK103543213SQ201210240969
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2012年7月12日 优先权日:2012年7月12日
【发明者】宋强, 杜宏伟, 何莉, 李鹏, 安毅, 葛亚宁, 孙艳霞 申请人:西安正大制药有限公司