益心舒制剂的指纹图谱检测方法及其指纹图谱的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种益心舒制剂的指纹图谱检测方法及其指纹图谱，所述的指纹图谱检测方法是以五味子醇甲对照品为参照，采用高效液相色谱法测定其指纹图谱。本发明所提供的方法建立的益心舒制剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；本发明建立了益心舒制剂HPLC特征指纹图谱共有模式，标定了15个共有峰，建立的指纹图谱技术含量高，避免了益心舒制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。
【专利说明】益心舒制剂的指纹图谱检测方法及其指纹图谱
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种益心舒制剂的指纹图谱检测方法及其指纹图谱，属于中药检测【技术领域】。
【背景技术】
[0002]心脑血管疾病是严重危害人类的常见疾病。近年来，由于社会的发展、工作、生活、饮食结构及环境的变化，心脑血管疾病呈上升趋势。对于心血管疾病的治疗，虽然中药单靶点的作用强度低于西药，但其多途径、多靶点、动态整体治疗、毒副作用小的特点则远非西药所能企及，疗效确切的中成药的综合治疗效果要超过西药。益心舒制剂多用来治疗心血管疾病，例如益心舒胶囊、益心舒颗粒、益心舒片、益心舒丸、益心舒注射制剂等。这些益心舒制剂(均含有人参、麦冬、五味子、黄芪、丹参等药材)因其配方不同，或者配方比例不同，或者提取精制方法不同，或者剂型不同，治疗效果也有所差异。另外由于这些益心舒制剂的质量控制方法不够全面，难以全面表征他们的物理化学特征。因此，对益心舒制剂的提取精制方法、质量控制方法进行改进成为人们积极研究的课题。
[0003]目前，对益心舒制剂的鉴定，往往是选取益心舒制剂的一两种中药成分进行鉴定，比如申请号为200910102647.4、名称为“益心舒中药制剂中麦冬的质量控制方法”，公开了一种对益心舒中药制剂中麦冬进行鉴定的方法；申请号为200910102648.9、名称为“益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法”，公开了一种对益心舒中药制剂中五味子进行鉴定的方法；还有一些文献公开了对益心舒中药制剂中人参、丹参、川芎、黄芪、山楂中的一种或多种进行鉴别的方法。
[0004]中药指纹图谱是指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。在现阶段，中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，中药指纹图谱对于有效控制中药材或中成药的质量具有重要的意义。日本汉方药主要生产企业在20世纪80年代就已经在企业内部采用高效液相指纹图谱控制质量。德国、法国在对银杏叶提取物联合开发的过程中，发现银杏叶提取物的医疗作用是提取物所得物质群的整体作用结果，而对这一个整体的质量控制，亦采用高效液相指纹图谱方法。美国最近几年也明确把指纹图谱作为混合物群的质量控制方法。随着研究的深入，人们发现，作为中医理论的实践产物，中药，尤其是复方中药，其中所含的任一种成分都不能代表其整体疗效。人们逐渐认识至1J，现行的参照西药(合成药)质量控制模式的质量标准不能恰当的反映中药内在的质量。从先行的质量控制模式向一种综合的、宏观的、可量化的鉴别与主要有效成分含量测定结合已是发展的趋势。
[0005]益心舒制剂是由人参、麦冬、五味子等制成的，临床上用于治疗气阴两虚、心悸脉结代、胸闷不舒、胸痛及冠心病、心绞痛等症，其治疗效果已经得到临床的验证，而是否能够保证药物的质量以及益心舒制剂中有效成分含量，是决定益心舒制剂疗效的基础。如果用一两种人参或五味子等的活性成分来说明益心舒制剂的内在质量，具有一定的片面性，更不用说无药效的指标成分了。要控制益心舒制剂的功效，只针对其一两个化学成分进行表征和控制是不够的，必须对它的物质群整体予以控制。所以，除了“微观分析”外，还应该用某种“宏观分析”方法，从整体上有效的表征中药质量。指纹图谱作为中草药及其提取物的质量控制方法，目前已经成为国际共识。现在对五味子中活性成分如无五味子醇甲、五味子醇乙等的测定方法较多，对丹参中活性成分如丹参酮、丹参素等的测定方法较多，但如何能从更宏观的角度以益心舒制剂中化学成分为指标建立宏观指纹图谱的方法却未见报道。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于，提供一种益心舒制剂的指纹图谱检测方法及其指纹图谱，通过此方法可以保证益心舒制剂的质量稳定性、一致性和可控性，从而确保益心舒制剂的安全性和有效性。
[0007]本发明中所述的益心舒制剂由人参200g，麦冬200g，五味子133g，黄芪200g，丹参267g，川芎133g和山楂200g制备而成。具体的制备方法为:称取上述重量的人参，粉碎成细粉，备用；称取上述重量的五味子和丹参，用85%乙醇回流提取两次，第一次3小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩为80°C的相对密度为1.25?1.30的浸膏；其余四味药材加水煎煮两次，第一次2.5小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩为80°C的相对密度为1.10?1.15的浸膏；加入一倍量的85%乙醇，混匀，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，与上述的五味子和丹参的提取物合并同时加入上述的人参细粉，混匀，干燥，加入适量辅料，按照常规方法制备成相应的益心舒制剂。
[0008]为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案:一种益心舒制剂的指纹图谱检测方法，以五味子醇甲对照品为参照，采用高效液相色谱法测定其指纹图谱。
[0009]具体的，所述的益心舒制剂的指纹图谱检测方法包括以下步骤:
[0010](I)供试品溶液的制备:取益心舒制剂或其内容物2g，精密称定，置于25ml容量瓶中，加甲醇15?25ml,超声提取20?40min,放冷,加甲醇至刻度,摇勻，过滤,取续滤液,作为供试品溶液；
[0011](2)对照品溶液的制备:取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
[0012](3)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5?15 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录120分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得益心舒制剂的指纹图谱。
[0013]前述方法中，所述高效液相色谱测定的色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相Α，以0.005%磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流速0.5?1.5ml.η?η-1,柱温28?42°C,检测波长185?240nm ;理论塔板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。
[0014]优选的，所述的益心舒制剂的指纹图谱检测方法，包括以下步骤:
[0015](I)供试品溶液的制备:取益心舒制剂或其内容物2g，精密称定，置于25ml容量瓶中，加甲醇20ml，超声提取30min，放冷，加甲醇至刻度，摇勻，过0.22 μ m的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
[0016](2)对照品溶液的制备:取五味子醇甲对照品3mg，精密称定，置于IOml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成浓度为0.3mg/mL的溶液，过0.22 μ m的微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液；
[0017](3)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录120分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得益心舒制剂的指纹图
-1'TfeP曰。
[0018]所述高效液相色谱测定的色谱条件优选为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.005%磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml.mirT1，柱温30，1:检测波长210nm，理论塔板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。
[0019]前述的益心舒制剂的指纹图谱检测方法中，梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为:0 ~30min, A相 20%, B 相 80% ；30 ~60min, A相 20%_43%，B 相 80%-57% ；60 ~70min,A 相 43%-53%，B 相 57%-47% ；70 ~85min, A 相 53%, B 相 47% ；85 ~IOOmin, A 相 53%_70%，B相47%-30% ；100~120min, A相70%_90%，B相30%-10% ;即梯度洗脱程序如下表:
[0020]表1
[0021]
【权利要求】
1.一种益心舒制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于，以五味子醇甲对照品为参照，采用高效液相色谱法测定其指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的益心舒制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)供试品溶液的制备:取益心舒制剂或其内容物2g，精密称定，置于25ml容量瓶中，加甲醇15?25ml,超声提取20?40min,放冷,加甲醇至刻度,摇勻，过滤,取续滤液,作为供试品溶液； (2)对照品溶液的制备:取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液； (3)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5?15μ 1，注入高效液相色谱仪，记录120分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得益心舒制剂的指纹图谱。
3.根据权利要求2所述的益心舒制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱测定的色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相Α，以0.005%磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流速0.5?1.5ml.mirT1，柱温28?42°C，检测波长185?240nm ;理论塔板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。
4.根据权利要求3所述的益心舒制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)供试品溶液的制备:取益心舒制剂或其内容物2g，精密称定，置于25ml容量瓶中，加甲醇20ml，超声提取30min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过0.22 μ m的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液； (2)对照品溶液的制备:取五味子醇甲对照品3mg，精密称定，置于IOml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成浓度为0.3mg/mL的溶液，过0.22 μ m的微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液； (3)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入高效液相色谱仪，记录120分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得益心舒制剂的指纹图谱。
5.根据权利要求3或4所述的益心舒制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于:所述高效液相色谱测定的色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相Α，以0.005%磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml.mirT1，柱温30，1:检测波长210nm，理论塔板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。
6.根据权利要求5所述的益心舒制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于:梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为:0?30min，A相20%，B相80% ；30?60min，A相20%_43%，B 相 80%-57% ；60 ?70min, A 相 43%_53%，B 相 57%-47% ；70 ?85min, A 相 53%, B 相 47% ；85 ?IOOmin, A 相 53%_70%，B 相 47%-30% ；100 ?120min, A 相 70%_90%，B 相 30%_10%。
7.如权利要求1?6中任一项所述益心舒制剂的指纹图谱检测方法得到的益心舒制剂指纹图谱，其特征在于:所述图谱中有15个共有峰。
【文档编号】G01N30/88GK103604898SQ201310560887
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年11月12日 优先权日:2013年11月12日
【发明者】张观福 申请人:贵州信邦制药股份有限公司