一种用气相色谱法分离测定依普利酮中三氯乙酰胺的方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及气相色谱法分离测定依普利酮中三氯乙酰胺的方法。

背景技术：

依普利酮是一种新型选择性醛固酮受体拮抗剂，只作用于盐皮质激素受体，对雄激素和黄体酮受体的亲和力极低，临床上用于治疗高血压、心力衰竭和心肌梗死。依普利酮化学名为：9,11α-Epoxy-7α-(methoxycarbonyl)-3-oxo-17α-pregn-4-ene-21,17-carbolactone，分子式为C₂₄H₃₀O₆。

药品在临床使用中产生的不良反应除了与药品本身的药理活性有关，有时与药品中存在的杂质也有很大关系，为保证药品的质量与安全性，注册申报的药品要求对其工艺过程中引入的杂质进行研究和有效控制。合成依普利酮工艺中引入的有机杂质有三氯乙酰胺，其分子式为C₂H₂Cl₃NO，结构式为：

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选择合适的分析方法，准确地分离和测定依普利酮中杂质三氯乙酰胺，对提高依普利酮质量、保证用药安全具有重要的意义。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种分离、检测合成依普利酮工艺中引入的有机杂质三氯乙酰胺的方法，从而达到对依普利酮纯度和质量的有效控制，保证依普利酮的质量及用药安全性。

1．本发明所述的一种分离、测定依普利酮有关物质的方法，是采用气相色谱分析技术，选用合适的溶剂将样品溶解，根据待分析杂质的结构及理化性质，选用甲基聚硅氧烷类色谱柱和电子捕获检测器。

上述所说的溶剂可以为乙醇、甲醇、二氯甲烷或N，N-二甲基甲酰胺中的一种或几种。

上述所说的色谱柱选自Agilent、Supelco、Phenomenex或Restek等品牌。

上述所说的色谱柱为弱极性或中等级性聚硅氧烷类毛细管色谱柱。

本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：

1）取依普利酮适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含依普利酮100mg的溶液，作为供试品溶液；另取三氯乙酰胺适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含三氯乙酰胺6μg的溶液，作为对照品溶液。

2）设置进样口温度为250~300℃，载气流速为0.8~1.2mL/min，程序升温法，升温程序为初始温度100°C，以每分钟10~30°C的升温速率至200°C，恒温2~5min，检测器温度为280~320℃，分流比为10:1~50:1。

3）取1）中供试品溶液和对照品溶液各0.8～3μL，按2）的色谱条件，注入气相色谱仪，采用外标法计算依普利酮中三氯乙酰胺的含量。其中：

气相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的气相色谱仪为岛津（2010 plus）气相色谱仪

检测器：电子捕获检测器；

色谱柱：CP-Sil 8 CB毛细管色谱柱（30m*0.32mm，1.00μm）；

进样口温度：280℃；

检测器温度：300℃；

载气（氮气）流速：1.0mL/min；

分流比：50:1；

进样体积：1μL

柱箱升温程序：

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本发明采用气相色谱法，选用甲基聚硅氧烷类弱极性毛细管色谱柱（30m*0.32mm，1.00μm），能快速有效地分离测定依普利酮中三氯乙酰胺，解决了合成依普利酮工艺中引入的有机杂质三氯乙酰胺的分离测定问题，从而达到对依普利酮纯度的有效控制。结果见附图1~6。

附图说明

图1为实施例1时溶剂（无水乙醇）的气相色谱图；

图2为实施例1时依普利酮的气相色谱图；

图3为实施例1时三氯乙酰胺的气相色谱图；

图4为实施例1时加入三氯乙酰胺的依普利酮样品气相色谱图；

图5为实施例2时三氯乙酰胺的气相色谱图；

图6为实施例3时三氯乙酰胺的气相色谱图。

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。以下通过实例形式，对本发明涉及的依普利酮中三氯乙酰胺检测方法作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

仪器与条件

色谱仪：岛津 2010 plus气相色谱仪；

检测器：电子捕获检测器；

色谱柱：CP-Sil 8 CB毛细管色谱柱（30m*0.32mm，1.00μm）；

进样口温度：280℃；

检测器温度：300℃；

载气（氮气）流速：1.0mL/min；

分流比：50:1；

进样体积：1μL

柱箱升温程序：

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实验步骤

取依普利酮适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含依普利酮100mg的溶液，作为依普利酮样品溶液；取三氯乙酰胺适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含三氯乙酰胺6μg的溶液，作为对照品溶液；另取无水乙醇作为空白溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算依普利酮中三氯乙酰胺的含量。结果见附图1~4，图1为空白溶液色谱图；图2为依普利酮样品溶液色谱图。图3中保留时间6.351min的色谱峰为三氯乙酰胺。

图4为加入三氯乙酰胺的依普利酮样品气相色谱图。图1~图4表明：本发明提供的方法能快速有效地分离测定依普利酮中三氯乙酰胺，并可以准确进行定量检测，从而达到对依普利酮纯度和质量的有效控制。

实施例2

仪器与条件

色谱仪：岛津 2010 plus气相色谱仪；

检测器：电子捕获检测器；

色谱柱：CP-Sil 8 CB毛细管色谱柱（30m*0.32mm，1.00μm）；

进样口温度：285℃；

检测器温度：300℃；

载气（氮气）流速：1.0mL/min；

分流比：50:1；

进样体积：1μL

柱箱升温程序：

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实验步骤

取三氯乙酰胺适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含有三氯乙酰胺6μg的溶液，作为对照品溶液；另取无水乙醇作为空白溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。结果见附图5，图5中保留时间6.363min的色谱峰为三氯乙酰胺。

实施例3

仪器与条件

色谱仪：岛津 2010 plus气相色谱仪；

检测器：电子捕获检测器；

色谱柱：CP-Sil 8 CB毛细管色谱柱（30m*0.32mm，1.00μm）；

进样口温度：280℃；

检测器温度：300℃；

载气（氮气）流速：1.1mL/min；

分流比：50:1；

进样体积：1μL

柱箱升温程序：

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实验步骤

取三氯乙酰胺适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含有三氯乙酰胺6μg的溶液，作为对照品溶液；另取无水乙醇作为空白溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。结果见附图6，图6中保留时间6.010min的色谱峰为三氯乙酰胺。

本发明对所述依普利酮中三氯乙酰胺分析方法的以下项目进行了验证：

系统适用性实验

取依普利酮及三氯乙酰胺适量，分别用无水乙醇溶解样品，配制成含依普利酮及三氯乙酰胺的供试液。按实施例1的色谱条件进行气相色谱分析，记录色谱图。由图1~图4可知，在此条件下三氯乙酰胺与相邻峰之间分离度良好，溶剂和依普利酮其他杂质均不干扰三氯乙酰胺的测定。

进样重复性试验

将依普利酮的有关物质三氯乙酰胺供试液，按实施例1的色谱条件，重复进样6次，考察方法的重复性。由结果可加，该方法进样重复性良好。

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定量限、检测限

取依普利酮的有关物质三氯乙酰胺适量，精密称定，分别用无水乙醇溶解样品，配制成响应的供试液，再精密量取供试液适量，逐级稀释，按实施例1的色谱条件进样考察。三氯乙酰胺定量限和检测限数据如下表所示：

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线性

取依普利酮的有关物质三氯乙酰胺适量，精密称定，分别用无水乙醇溶解，配制成三氯乙酰胺贮备液；精密量取三氯乙酰胺贮备液，分别稀释成1%（约为定量限浓度）、50%、80%、100%和120%限度浓度的三氯乙酰胺供试品溶液，将各溶液按实施例1的色谱条件进样考察，结果见下表：

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准确度

取依普利酮的有关物质三氯乙酰胺适量，精密称定，分别用无水乙醇溶解，配制成三氯乙酰胺贮备液；精密量取三氯乙酰胺贮备液适量，用无水乙醇稀释，分别配成80%、100%和120%限度浓度的准确度试验溶液。取依普利酮约100mg，分别用上述80%、100%和120%限度浓度的准确度试验溶液1mL溶解，作为80%、100%和120%供试品溶液，各浓度水平供试品溶液平行配制3份；另取依普利酮约100mg，加入1mL 无水乙醇溶解，作为空白样品溶液。将上述溶液按实施例1的色谱条件进样考察，图4为100%供试品溶液（即依普利酮中加入三氯乙酰胺）的色谱图，保留时间为6.343min的色谱峰为三氯乙酰胺，进样结果见下表：

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耐用性

通过微调进样口温度、载气流速、检测器温度和色谱柱品牌等色谱条件，我们进一步考察了方法的耐用性。结果发现，该方法对不同品牌的色谱柱、进样口温度变化±5℃、载气流速变化±0.1mL/min、检测器温度变化±5℃等条件下耐用性良好。在不同品牌色谱柱、不同进样口温度、载气流速及检测器温度条件下，三氯乙酰胺保留时间无显著变化，且均能达到有效分离。