一种口蹄疫抗体检测试剂盒、检测方法及其应用与流程

文档序号:12119400阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种口蹄疫抗体检测试剂盒,其包括包被板、抗原抗体反应板、抗原、口蹄疫兔抗工作液、羊抗兔IgG-HRP工作液、阳性质控血清、阴性质控血清、样本稀释液、洗液和底物,其特征在于:所述包被板为链霉亲和素包被板,所述抗原为生物素化的口蹄疫病毒抗原。

2.根据权利要求1所示的一种口蹄疫抗体检测试剂盒,其特征在于:所述链霉亲和素包被板由2~20μg/mL的链霉亲和素,100μl/孔,包被形成。

3.根据权利要求1所示的一种口蹄疫抗体检测试剂盒,其特征在于:所述口蹄疫兔抗工作液为含有2~10μg/ml口蹄疫兔多抗、1wt%酪蛋白的PBS缓冲液,pH为7.2~7.4。

4.根据权利要求1所示的一种口蹄疫抗体检测试剂盒,其特征在于:所述羊抗兔IgG-HRP工作液为含有0.5~2.5μg/ml羊抗兔IgG-HRP、1wt%酪蛋白的PBS缓冲液,pH为7.2~7.4。

5.根据权利要求1所示的一种口蹄疫抗体检测试剂盒,其特征在于:所述阴性质控血清为未感染口蹄疫病毒的偶蹄动物血清,抗体检测效价小于1:8;所述阳性质控血清为阴性质控血清添加口蹄疫抗体制得,抗体检测效价大于1:720。

6.根据权利要求1所示的一种口蹄疫抗体检测试剂盒,其特征在于:所述样本稀释液为含有1wt%酪蛋白的PBS缓冲液,pH为7.2~7.4。

7.根据权利要求1所示的一种口蹄疫抗体检测试剂盒,其特征在于:,所述洗液为20倍的浓缩洗液,所述20倍的浓缩洗液为含18wt%NaCl、1wt%Tween20和1wt%Proclin300的Tris-HCl缓冲液,pH为7.4~7.6。

8.根据权利要求1所示的一种口蹄疫抗体检测试剂盒,其特征在于:所述底物包括底物A和底物B;所述底物A为含有1.26wt%N,N-二甲基甲酰胺、5.85 mmol/L鲁米诺、9.86 mmol/L四苯硼钠和1.06 mg/L对乙酰氨基酚的Tris-HCl缓冲液,pH为8.8~9.0;所述底物B为含0.615 mg/mL过硼酸钠的Tris-HCl缓冲液,pH为4.8~5.0。

9.如权利要求1~8中任一所述的口蹄疫抗体检测试剂盒的检测方法,包括以下步骤:

(1)在抗原抗体反应板中,使用样本稀释液对待测血清样本、阳性质控血清、阴性质控血清进行倍比稀释,50μl/孔,所述待测血清样本、阳性质控血清、阴性质控血清的稀释范围分别为(1:4~1:512)、( 1:8~1:1024)、(1:2~1:4),抗原对照设置4孔,分别加入50μl样本稀释液;

(2)加入生物素化的口蹄疫病毒抗原工作液,50μl/孔,振荡,37℃温育60分钟;

(3)将反应液转移至链霉亲和素包被板中,50μl/孔,37℃温育30分钟;

(4)洗板,甩干,向链霉亲和素包被板中加入口蹄疫兔抗工作液,50μl/孔,37℃温育30分钟;

(5)洗板,甩干,向链霉亲和素包被板中加入羊抗兔IgG-HRP工作液,50μl/孔,37℃温育30分钟;

(6)洗板,甩干,加入底物A和底物B,50μl/孔,测定相对光强度(RLU);

(7)判定待测血清的效价:抗原对照的4孔,弃去最高和最低RLU值,计算剩余2孔的平均RLU值,以55%~75% 抗原对照平均值为临界值;待检血清RLU值大于临界值的孔为阴性孔,小于等于临界值的孔为阳性孔;若临界值与稀释倍数最高阳性孔的RLU相同,则以待检血清阳性孔的最高稀释倍数作为该血清的抗体效价;若临界值处于2个稀释孔RLU之间,抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值。

10.如权利要求1~9中任一所述的口蹄疫抗体检测试剂盒在口蹄疫抗体检测中的应用。

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