本发明涉及泰乐菌素检测技术领域，具体为一种禽肉中泰乐菌素检测方法及试剂盒。
背景技术：
泰乐菌素(tylosin)是弗氏链霉菌产生的一种大环内酯类抗生素，自80年代开始，泰乐菌素在国际上被广泛地用作禽畜专用的抗菌促生剂，对治疗禽畜的支原体疾病和革兰氏阳性菌的感染、促禽畜生长、降低死亡率和提高饲料转化率有明显的作用，泰乐菌素在动物组织中的残留，会威胁到食品安全，对人类的健康造成危害，我国农业部235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》对泰乐菌素在动物性食品中残留制定了最高残留限量，其中，规定了泰乐菌素在鸡肝组织中的最高残留限量为0.13mg/kg，泰乐菌素在猪肉组织中的最高残留限量为0.2mg/kg。
近年来，食品安全问题一直为人们所讨论的热门话题，禽肉中残留的泰乐菌素经常被提起，禽肉中残留的泰乐菌素严重危害了人们的健康，现有泰乐菌素的检测方法大多为微生物法和仪器分析法，但微生物法的精确度低，仪器分析法的成本过高，过于繁琐，检测效率低，为此，我们提出一种高效快捷的禽肉中泰乐菌素检测方法及试剂盒。
技术实现要素：
（一）解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种禽肉中泰乐菌素检测方法及试剂盒，解决了检测效率低的问题。
（二）技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种禽肉中泰乐菌素用的试剂盒，所述试剂盒的内部放置有磷酸二氢铵溶液、无水磷酸二氢铵、磷酸、二水合磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、三水合磷酸氢二钾、正己烷、甲醇、石油醚、三蒸水和二氯甲烷。
一种禽肉中泰乐菌素检测方法，检测方法包括如下步骤：
S1，用移液器取出0.1-0.5mol/L的磷酸二氢铵溶液，用电子天平称取0.1-0.5g的无水磷酸二氢铵，放入烧杯内溶解，在4-10℃的环境下，反应5-10min；
S2，量取12-14mL的磷酸，加水定容至800-1000mL，并标记为A液，称取30-32g的二水合磷酸二氢钠，加水定容至800-1000mL，并标记为B液，取A液450-455mL，451.6mL、453.5mL、454.1mL、B液545-550mL，548.4mL、546.5mL、545.9mL，配制成PH为2.1-2.5的磷酸盐缓冲液I，并用PH值测定仪经常实时监测；
S3，用电子天平称取4-5g的磷酸二氢钾和0.5-0.8g的三水合磷酸氢二钾，放入烧杯内溶解，加水定容至450-500mL，配制成 PH为5.5-5.8的磷酸盐缓冲液II，并用PH值测定仪经常实时监测；
S4，称取10-20g的禽肉样品，粉碎后用滤纸包好放入索氏提取器中，加入0.5-1g的正己烷，用60-75℃水浴脱脂至无色，并取出晾干备用；
S5，称取1-2g的脱脂后样品，并放入冷冻离心机的离心管内，加入10-15mL的甲醇，超声提取25-30min，提取完毕后，在5-10℃的环境下，8000-10000r/min离心10-15min，取上清液，残渣再次提取2次，合并3次提取液，在4-10℃的环境下，4500-5000r/min离心5-10min，并将提取液标记为甲液；
S6，当S5完成后，取出30-50mL的甲液并放入125mL的分液漏斗中，取30-40mL的石油醚并加入分液漏斗内，振荡1-3min，静置分层后，取下层溶液于300mL的分液漏斗中，并加入10-20mL的三蒸水和20-30mL的二氯甲烷，振荡3-5min，静置分层后，将下层溶液收集在烧瓶中，再向300mL的分液漏斗加入20-30mL的二氯甲烷，振荡3-5分钟，静置分层后，将下层溶液再次收集在烧瓶中；
S7，将两次收集的二氯甲烷层在50-60℃的环境下蒸干，并标记为A残渣，取0.5-1g的A残渣、3-5mL的磷酸盐缓冲液I和0.5-1mL的乙腈放入烧杯内，反应3-5min，取0.5-1g的A残渣、3-5mL的磷酸盐缓冲液II和0.5-1mL的乙腈放入另一个烧杯内，反应3-5min，供高效液相色谱检测。
优选的，所述离心管的容量为50mL。
优选的，所述烧杯、分液漏斗和离心管的数量均至少为五个。
优选的，所述电子天平的型号为AL204。
优选的，所述索氏提取器的型号为SXT-06。
优选的，所述PH值测定仪的型号为BPH-200A。
优选的，所述冷冻离心机的型号为X-15R。
（三）有益效果
本发明提供了一种禽肉中泰乐菌素检测方法及试剂盒，具备以下有益效果：
（1）该禽肉中泰乐菌素检测方法及试剂盒，本申请所提出的检测方法，实用性能好，通过磷酸盐缓冲液I和磷酸盐缓冲液II，配合高效液相色谱的效果，能够对样品内部的泰乐菌素进行有效的检测，检测更加方便，省时省力，检测精确度更高。
（2）该禽肉中泰乐菌素检测方法及试剂盒，通过设置有试剂盒，配合本申请所提出的泰乐菌素检测方法，能够对禽肉内的残留泰乐菌素进行精确的检测，有效的避免了泰乐菌素对人们健康的危害，成本更低，检测效率高。
（3）该禽肉中泰乐菌素检测方法及试剂盒，通过配套多个烧杯、分液漏斗和离心管，能够进行多次检测和对比，保证了实验的相对精确性，本申请所提到的设备，其型号均为优选型号，精确度更好，实验效果更好，有效的降低了检测的偏差。
具体实施方式
基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种技术方案：一种禽肉中泰乐菌素用的试剂盒，试剂盒的内部放置有磷酸二氢铵溶液、无水磷酸二氢铵、磷酸、二水合磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、三水合磷酸氢二钾、正己烷、甲醇、石油醚、三蒸水和二氯甲烷。
实施例1
一种禽肉中泰乐菌素检测方法，检测方法包括如下步骤：
S1，用移液器取出0.1mol/L的磷酸二氢铵溶液，用电子天平称取0.1g的无水磷酸二氢铵，放入烧杯内溶解，在4℃的环境下，反应5min；
S2，量取12mL的磷酸，加水定容至800mL，并标记为A液，称取30g的二水合磷酸二氢钠，加水定容至800mL，并标记为B液，取A液451.6mL，B液548.4mL，配制成PH为2.1的磷酸盐缓冲液I，并用PH值测定仪经常实时监测；
S3，用电子天平称取4g的磷酸二氢钾和0.5g的三水合磷酸氢二钾，放入烧杯内溶解，加水定容至450mL，配制成 PH为5.5的磷酸盐缓冲液II，并用PH值测定仪经常实时监测；
S4，称取10g的禽肉样品，粉碎后用滤纸包好放入索氏提取器中，加入0.5g的正己烷，用60℃水浴脱脂至无色，并取出晾干备用；
S5，称取1g的脱脂后样品，并放入冷冻离心机的离心管内，加入10mL的甲醇，超声提取25min，提取完毕后，在5℃的环境下，8000r/min离心10min，取上清液，残渣再次提取2次，合并3次提取液，在4℃的环境下，4500r/min离心5min，并将提取液标记为甲液；
S6，当S5完成后，取出30mL的甲液并放入125mL的分液漏斗中，取30mL的石油醚并加入分液漏斗内，振荡1min，静置分层后，取下层溶液于300mL的分液漏斗中，并加入10mL的三蒸水和20mL的二氯甲烷，振荡3min，静置分层后，将下层溶液收集在烧瓶中，再向300mL的分液漏斗加入20mL的二氯甲烷，振荡3分钟，静置分层后，将下层溶液再次收集在烧瓶中；
S7，将两次收集的二氯甲烷层在50℃的环境下蒸干，并标记为A残渣，取0.5g的A残渣、3mL的磷酸盐缓冲液I和0.5mL的乙腈放入烧杯内，反应3min，取0.5g的A残渣、3mL的磷酸盐缓冲液II和0.5mL的乙腈放入另一个烧杯内，反应3min，供高效液相色谱检测。
该实施例1的检测方法与实施例2和实施例3相比存在以下特点：
检测用时短，检测速度快，检测效率高；
检测精确度和检测成本均低于实施例2和实施例3；
检测精确度≥94％。
实施例2
一种禽肉中泰乐菌素检测方法，检测方法包括如下步骤：
S1，用移液器取出0.3mol/L的磷酸二氢铵溶液，用电子天平称取0.3g的无水磷酸二氢铵，放入烧杯内溶解，在6℃的环境下，反应6min；
S2，量取13mL的磷酸，加水定容至900mL，并标记为A液，称取31g的二水合磷酸二氢钠，加水定容至900mL，并标记为B液，取A液453.5mL，B液546.5mL，配制成PH为2.3的磷酸盐缓冲液I，并用PH值测定仪经常实时监测；
S3，用电子天平称取4.5g的磷酸二氢钾和0.7g的三水合磷酸氢二钾，放入烧杯内溶解，加水定容至480mL，配制成 PH为5.6的磷酸盐缓冲液II，并用PH值测定仪经常实时监测；
S4，称取15g的禽肉样品，粉碎后用滤纸包好放入索氏提取器中，加入0.8g的正己烷，用70℃水浴脱脂至无色，并取出晾干备用；
S5，称取1.5g的脱脂后样品，并放入冷冻离心机的离心管内，加入12mL的甲醇，超声提取28min，提取完毕后，在8℃的环境下，900r/min离心12min，取上清液，残渣再次提取2次，合并3次提取液，在8℃的环境下，4800r/min离心8min，并将提取液标记为甲液；
S6，当S5完成后，取出40mL的甲液并放入125mL的分液漏斗中，取35mL的石油醚并加入分液漏斗内，振荡2min，静置分层后，取下层溶液于300mL的分液漏斗中，并加入15mL的三蒸水和25mL的二氯甲烷，振荡4min，静置分层后，将下层溶液收集在烧瓶中，再向300mL的分液漏斗加入25mL的二氯甲烷，振荡4分钟，静置分层后，将下层溶液再次收集在烧瓶中；
S7，将两次收集的二氯甲烷层在55℃的环境下蒸干，并标记为A残渣，取0.8g的A残渣、4mL的磷酸盐缓冲液I和0.8mL的乙腈放入烧杯内，反应4min，取0.8g的A残渣、4mL的磷酸盐缓冲液II和0.8mL的乙腈放入另一个烧杯内，反应4min，供高效液相色谱检测。
该实施例2的检测方法存在以下特点：
该实施例2的检测精确度和检测成本均高于实施例1，但实施例2的检测速度和检测效率均低于实施例1，且实施例2的检测时间长于实施例1的检测时间；
该实施例2的检测精确度和检测成本均低于实施例3，但实施例2的检测速度和检测效率均高于实施例3，且实施例2的检测时间短于实施例3的检测时间；
检测精确度≥96%。
实施例3
一种禽肉中泰乐菌素检测方法，检测方法包括如下步骤：
S1，用移液器取出0.5mol/L的磷酸二氢铵溶液，用电子天平称取0.5g的无水磷酸二氢铵，放入烧杯内溶解，在10℃的环境下，反应10min；
S2，量取14mL的磷酸，加水定容至1000mL，并标记为A液，称取32g的二水合磷酸二氢钠，加水定容至1000mL，并标记为B液，取A液454.1mL，B液545.9mL，配制成PH为2.5的磷酸盐缓冲液I，并用PH值测定仪经常实时监测；
S3，用电子天平称取5g的磷酸二氢钾和0.8g的三水合磷酸氢二钾，放入烧杯内溶解，加水定容至500mL，配制成 PH为5.8的磷酸盐缓冲液II，并用PH值测定仪经常实时监测；
S4，称取20g的禽肉样品，粉碎后用滤纸包好放入索氏提取器中，加入1g的正己烷，用75℃水浴脱脂至无色，并取出晾干备用；
S5，称取2g的脱脂后样品，并放入冷冻离心机的离心管内，加入15mL的甲醇，超声提取30min，提取完毕后，在10℃的环境下，10000r/min离心15min，取上清液，残渣再次提取2次，合并3次提取液，在10℃的环境下，5000r/min离心10min，并将提取液标记为甲液；
S6，当S5完成后，取出50mL的甲液并放入125mL的分液漏斗中，取40mL的石油醚并加入分液漏斗内，振荡3min，静置分层后，取下层溶液于300mL的分液漏斗中，并加入20mL的三蒸水和30mL的二氯甲烷，振荡5min，静置分层后，将下层溶液收集在烧瓶中，再向300mL的分液漏斗加入30mL的二氯甲烷，振荡5分钟，静置分层后，将下层溶液再次收集在烧瓶中；
S7，将两次收集的二氯甲烷层在60℃的环境下蒸干，并标记为A残渣，取1g的A残渣、5mL的磷酸盐缓冲液I和1mL的乙腈放入烧杯内，反应5min，取1g的A残渣、5mL的磷酸盐缓冲液II和1mL的乙腈放入另一个烧杯内，反应5min，供高效液相色谱检测。
该实施例3的检测方法与实施例1和实施例2相比存在以下特点：
检测精确度和检测成本均高于实施例1和实施例2；
检测时间长，检测速度慢，检测效率低；
检测精确度≥98%。
综上所述，该禽肉中泰乐菌素检测方法及试剂盒，本申请所提出的检测方法，实用性能好，通过磷酸盐缓冲液I和磷酸盐缓冲液II，配合高效液相色谱的效果，能够对样品内部的泰乐菌素进行有效的检测，检测更加方便，省时省力，检测精确度更高，通过设置有试剂盒，配合本申请所提出的泰乐菌素检测方法，能够对禽肉内的残留泰乐菌素进行精确的检测，有效的避免了泰乐菌素对人们健康的危害，成本较低，检测效率高，检测精确度≥98%。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下。由语句“包括一个......限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素”。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。