一种双和汤标准汤的HPLC指纹图谱测定方法与流程

技术特征：

1.一种双和汤标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)供试样品溶液的制备：精密量取不同批次的双和汤的标准汤，加载于已活化好的SPE柱，先用30体积份数的纯水洗脱，弃去洗脱液，再用10重量份数的甲醇洗脱，收集洗脱液，将洗脱液低温浓缩至干，最后用2体积份数的甲醇溶解，用微孔滤膜过滤，取续滤液，得供试样品溶液，备用；

(2)混合对照品溶液的制备：精密称取5-HMF、芍药苷、毛蕊异黄酮苷、甘草苷、阿魏酸、桂皮醛、甘草酸、6-姜酚对照品适量，加甲醇配制成每1体积份数含5-HMF、芍药苷、毛蕊异黄酮苷、甘草苷、阿魏酸、桂皮醛、甘草酸、6-姜酚分别为0.01、0.12、0.03、0.01、0.01、0.04、0.05和0.03重量份数的混合对照品溶液，摇匀，滤过，备用；

(3)单味药材阴性对照品溶液的制备：按照3倍处方量称取各单味药材粉末，粉碎，过筛得粗粉，取3倍处方量粗粉至全自动煎药锅中，精密量取纯水，浸泡，煎煮，煎煮期间搅拌，趁热过滤，滤液混合均匀，取适量用纯水定容至250mL容量瓶中即为单味药材阴性对照品溶液，备用；

(4)分别精密吸取供试样品溶液、混合对照品溶液和单味药材阴性对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，分别得到供试样品溶液、混合对照品溶液和单味药材阴性对照品溶液的液相色谱；

(5)采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试样品溶液、混合对照品溶液和单味药材阴性对照品溶液的液相色谱进行数据匹配，即得标准指纹图谱。

所述重量份数与所述体积份数的关系为g/mL。

2.根据权利要求1所述的双和汤标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：所述步骤(4)的色谱条件如下：

色谱柱：Accurasil C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；

流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液；

流速：1.0mL/min；

波长：280nm；

进样量：10μL；

柱温：30℃；

理论塔板数按芍药苷峰计算不低于7000；

梯度洗脱程序见表1：

表1指纹图谱梯度洗脱程序

3.根据权利要求1所述的双和汤标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：所述标准指纹图谱包括16个共有峰：峰2、3、4来自白芍，峰5来自炙黄芪，峰6、11、14来自炙甘草，峰7、8、9、16来自酒当归和川芎，峰10、12、13来自肉桂，峰15来自生姜，峰1来自酒熟地、川芎，以4号峰为参照峰。

4.根据权利要求1所述的双和汤标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：所述标准指纹图谱中1号峰为5-HMF，4号峰为芍药苷，5号峰为毛蕊异黄酮苷，6号峰为甘草苷，7号峰为阿魏酸，13号为桂皮醛，14号峰为甘草酸，15号为6-姜酚。

5.根据权利要求1所述的双和汤标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中用0.22μm微孔滤膜过滤。

6.根据权利要求1所述的双和汤标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：所述单味药材阴性对照品溶液的制备方法如下：按照3倍处方量称取各单味药材粉末，粉碎，过10-40目筛得粗粉；取3倍处方量粗粉至全自动煎药锅中，精密量取900mL纯水倒入，浸泡30min，煎煮75min，煎煮期间搅拌三次，趁热用300目滤布过滤，滤液体积约为500mL，滤液混合均匀，取三分之一用纯水定容至250mL容量瓶中即为单味药材阴性对照品溶液，备用。

7.根据权利要求1所述的双和汤标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：所述双和汤的标准汤的制备方法如下：按照处方比例称取九味药材，粉碎，过10-40目筛得粗粉；取三倍处方量粗粉至全自动煎药锅中，精密量取900mL纯水倒入，浸泡30min，煎煮75min，煎煮期间搅拌三次，趁热用300目滤布过滤，滤液体积约为500mL，滤液混合均匀，取三分之一用纯水定容至250mL容量瓶中即为标准汤原液，备用。

8.权利要求1-7任一项所述的方法在双和汤的药物制剂的质量检测和质量控制中的应用。

9.一种双和汤标准颗粒的质量控制方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)按照权利要求1-7所述的测定方法建立双和汤标准汤的标准指纹图谱；

(2)取待检的双和汤标准颗粒，按照权利要求1-7所述的测定方法得到指纹图谱；

(3)将步骤(2)得到的指纹图谱与步骤(1)得到的标准指纹图谱进行对比，符合即为合格产品，不符合即为不合格产品。