测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法与流程

本发明属于医药
技术领域：
，涉及一种药品的检测方法，尤其是涉及一种复方氨基酸注射液的检测方法，该方法尤其是用于测定复方氨基酸注射液中的游离氨。本发明方法呈现如本发明中所述的优异技术效果。
背景技术：
：复方氨基酸注射液是由多种氨基酸配制而成的灭菌水溶液，主要用于不能口服或经肠道补给营养以及营养不能满足需要的患者，通过静脉输注本品以满足机体获取氨基酸合成蛋白质的需要。目前，在国家食品药品监督管理总局收录的国产的与“复方氨基酸注射液”有关的国产药品有多达500多个批准文号，2015年版中国药典二部收录的复方氨基酸注射液的药品标准也达5种之多。复方氨基酸注射液在生产及贮藏过程中，氨基酸可以因发生脱氨作用而产生游离氨(即，nh3)。由于复方氨基酸注射液属于大容量肠外营养补充剂，患者使用时间长，且用量大，对于长期输注本品的患者，大量摄入的游离氨可以在一定条件下转化为亚硝酸盐，而亚硝酸盐能使血液中正常携氧的低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白而失去携氧能力而引起组织缺氧，且亚硝酸盐有可能在体内转化为强致癌物质亚硝胺，对人体健康有极大害处。因此，应对复方氨基酸注射液产品中游离氨的含量进行严格控制。现有的游离氨测定方法通常采用的是酶催化紫外-可见分光光度法。其原理为：氨与2-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶(gidh)作用下，将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nadh)氧化，即：被氧化的nadh量与氨的量呈线性关系，可通过340nm吸光值确定nadh量来推定氨的含量。该方法操作过程中存在多步添加试剂的过程，且每一步需严格控制反应时间，结果受人为操作影响较大，易出现波动，且最后一步需每隔2分钟测定一次紫外吸收值至吸光度稳定，操作较繁琐。张永亮文献(张永亮，等，心肌氨基酸代谢与早期急性心肌缺血的关系中国法医学杂志，1993年02期)报道，通过结扎家兔左冠状动脉前降支，对急性心肌缺血时蛋白质的降解和氨基酸代谢进行了研究。用离子交换色谱法测定缺血心肌组织游离氨基酸(酸性、中性、碱性)以及氨含量，发现缺血时大多数游离氨基酸含量上升，丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和组氨酸含量在缺血15min即有明显增加，但苏氨酸、谷氨酸和游离氨基酸总量却随缺血时间的延长而逐渐下降。丝氨酸含量在缺血早期上升，缺血60～480min，含量无明显变化。缺血120min以后，甘氨酸和精氨酸含量逐渐下降。组织氨含量在缺血早期上升，晚期下降。游离氨基酸总量、苏氨酸、甘氨酸、精氨酸以及组织氨含量的降低是缺血心肌氨基酸代谢的特征性变化，并认为测定缺血心肌游离氨基酸及组织氨含量有助于急性心肌缺血的早期诊断。然而，本发明人已经发现，上述用于生物样品(即，心肌组织)检测游离氨的张永亮文献方法并不适用于检测市售复方氨基酸注射液中的游离氨。因此，对于需要大批量逐批测定游离氨含量的药品生产企业质量控制部门或药品检验检测机构而言，建立一种快速、简便、灵敏且稳定的复方氨基酸注射液中游离氨测定方法迫在眉睫。技术实现要素：本发明目的在于提供一种复方氨基酸注射液中的游离氨的定性定量测定方法，期待该方法具有快速、简便、灵敏、稳定等一个或者多个的效果。已经发现，通过本发明方法能够获得上述一个或者多个技术效果，本发明基于此发现而得以完成。为此，本发明第一方面提供了测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法，该方法包括如下步骤：(1)提供测定设备：提供氨基酸分析仪和色谱柱(例如，氨基酸分析仪为日立l-8900型；例如，色谱柱是钠离子型磺酸基强酸性阳离子交换树脂为填充剂的色谱柱，例如色谱柱的规格为4.6mm×60mm，3μm)；(2)配制分离分析用的缓冲液：按照下表的配方，配制分离用缓冲液b1、b2、b3、b4和b5：试剂b1b2b3b4b5水700ml700ml700ml700ml700ml柠檬酸钠，以其二水合物计量6.19g7.74g13.31g26.67g-氢氧化钠0.24g0.8g--8.0g氯化钠5.66g7.07g3.74g54.35g-柠檬酸，以其一水合物计量19.8g22.0g12.8g6.1g-乙醇135.0ml25.0ml9.0ml-100.0ml加水定容至1000ml1000ml1000ml1000ml1000ml；(3)配制衍生化反应试剂：取乙二醇单甲基醚979ml，充入氮气5分钟，加入硼氢化钠83mg，继续充入氮气30分钟，作为氨基酸分析用显色液r1；取乙二醇单甲基醚401ml，置1000ml量瓶中，加入无水醋酸钠204g，加入冰醋酸123ml，加水336ml，溶解，加水定容至刻度，充入氮气30分钟，作为氨基酸分析用显色液r2；取乙醇50ml，加水稀释至1000ml，作为氨基酸分析用显色液r3；(上述显色液r1、r2、r3亦可称为衍生化反应试剂、反应试剂、衍生试剂等)(4)色谱条件：作为流动相的缓冲液b1、b2、b3、b4和b5流速为0.40ml/min，衍生试剂r1、r2、r3的流速为0.35ml/min，柱温57℃，反应器温度为135℃，检测波长570nm，进样量5μl，按下表进行梯度洗脱：时间，分钟b1，％b2，％b3，％b4，％b5，％r1，％r2，％r3，％0.01000000505003.010000003.101000006.001000006.1001000014.8001000014.9000100029.0000100029.1000010032.05050032.110033.0000010033.1010000034.0010000034.1100000037.00010037.15050053.0100000050500(5)供试品溶液的配制：精密量取供试品复方氨基酸注射液适量，用超纯水(其例如用纯水机制备，电阻率≥18.2mω)稀释至总氨基酸含量为0.8％m/v，作为供试品溶液；(6)对照品溶液的配制：精密称取氯化铵对照品(可以容易的从市场获得，例如，其来源于国药集团化学试剂公司，例如其纯度为100％)适量，加超纯水溶解配制成含游离氨为浓度在0.75～12.5μg/ml范围内的对照品溶液(例如根据待测复方氨基酸注射液中初步测得的游离氨浓度，配制大致相近浓度的对照品溶液，例如0.75μg/ml、1μg/ml、1.5μg/ml、2μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、7.5μg/ml、10μg/ml、12.5μg/ml等浓度的对照品溶液)；(7)色谱测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各2～20μl(例如2μl、5μl、10μl、20μl，例如5μl)注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品溶液中游离氨的浓度，并根据供试品溶液配制方法计算复方氨基酸注射液中游离氨的含量，即得。根据本发明第一方面的方法，其中所述氨基酸分析仪为日立l-8900型。根据本发明第一方面的方法，其中所述色谱柱是钠离子型磺酸基强酸性阳离子交换树脂为填充剂的色谱柱。根据本发明第一方面的方法，其中所述色谱柱的规格为4.6mm×60mm，3μm。根据本发明第一方面的方法，其中所述缓冲液中柠檬酸钠的添加量是以其二水合物计量。根据本发明第一方面的方法，其中所述缓冲液中柠檬酸的添加量是以其一水合物计量。根据本发明第一方面的方法，其中所用超纯水是用纯水机制备的电阻率≥18.2mω的超纯水。根据本发明第一方面的方法，其中所述对照品溶液中的游离氨浓度在0.75～12.5μg/ml范围内，例如在1～10μg/ml范围内，例如为0.75μg/ml、1μg/ml、1.5μg/ml、2μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、7.5μg/ml、10μg/ml、12.5μg/ml。根据本发明第一方面的方法，其中色谱进样体积为2～20μl，例如5～15μl，例如5μl。进一步的，本发明第二方面提供了一种复方氨基酸注射液，其是采用本发明第一方面任一实施方案所述方法进行游离氨检测的。在本申请描述的方法步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本申请全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。本申请的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本申请任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本申请作进一步的描述。本申请所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本申请不一致时，以本申请的表述为准。此外，本申请使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本申请仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本申请所表述的含义为准。下文实施例1中的缓冲液b4中还添加了0.05％w/v依地酸钠钙，全部试验结果是在添加此试剂条件下获得的。在本发明的一个补充试验(可称为补充试验1)中，上述缓冲液未添加上述量的依地酸钠钙，结果在图2所示的供试品溶液色谱图中，游离氨峰与其后的色谱峰分离度仅为1.23，显示分离度难以令人接受，这将大大影响方法的准确性尤其是峰面积的积分准确性。因此在本发明任一方面的一个实施方案中，所述缓冲液b4中还添加了0.05％w/v依地酸钠钙。在本发明的另一个试验(可称为实施例2)中使用本文实施例1的方法和条件，测定数批市售复方氨基酸注射液(、复方氨基酸注射液(3aa，h19993577)、复方氨基酸注射液(6aa，h41024958)、复方氨基酸注射液(9aa，h20033657)、复方氨基酸注射液(15aa，h19993475)、复方氨基酸注射液(17aa-ⅰ，h44024796)、复方氨基酸注射液(18aa，h44024799)复方氨基酸注射液(18aa-ⅸ，h20050224)、复方氨基酸注射液(20aa，h20064829))中游离氨的含量，结果：上述“方法学验证”中的各项参数(除分离度外)均与实施例1基本相同；而游离氨与其它相邻峰的分离度均为约2.7或者大于4(3～9种氨基酸的品种，可能是其中未添加约24min处的成分)。高纯文献(高纯，等，肿瘤代谢与营养电子杂志，2019-02)中详细介绍了复方氨基酸注射液及其临床应用的注意事项，例如，氨基酸是构成人体营养所需蛋白质的基本物质，也是机体合成抗体、激素、酶类等其他分子的前体，在体内参与一系列代谢反应，可转变为碳水化合物和脂肪，最终代谢为二氧化碳、水及尿素，产生能量，是营养治疗的三大宏量营养素之一。组成人体的蛋白质由20种氨基酸构成，其中8种氨基酸人体自身无法合成，必须从外源补充，称为必需氨基酸(essentialaminoacid，eaa)。人体内能由前体物质合成，不需要从食物中获取的氨基酸，称为非必需氨基酸(nonessentialaminoacid，neaa)。此外，有些氨基酸人体虽能合成，但在特殊情况下不能满足正常的需要，称为半必需氨基酸或条件必需氨基酸(conditionallyessentialaminoacid，ceaa)，如处于生长发育期的婴儿，组氨酸是必需氨基酸；酪氨酸对于早产儿、半胱氨酸对于早产儿及足月儿都是必需氨基酸；对于肾病患者，酪氨酸是必需氨基酸；对于肝病患者，半胱氨酸是必需氨基酸。这种分类方式仅是从体内能否合成而言，而不是从营养价值而言。就完成代谢功能而言，所有的氨基酸都是需要的，每一种氨基酸都有其特定的生理功能。氨基酸根据其侧链结构又分为：芳香族氨基酸、脂肪族氨基酸和杂环氨基酸。芳香族氨基酸包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。在脂肪族氨基酸中，亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸其侧链只是烃链，且又带有支链，故称支链氨基酸(branched-chainaminoacid，bcaa)。值得注意的是，若要保证氨基酸的充分利用，前提是给予足够的非蛋白热量(non-proteincalorie，npc)，即葡萄糖和脂肪提供的热量(1g葡萄糖可提供约4kcal热量、1g脂肪可提供约9kcal热量)，否则补充的氨基酸会被当做热量消耗。大多数病情稳定的患者热氮比为150kcal:1g氮，围术期患者这一比例为100～150kcal:1g氮。其中含氮量可由公式“氮量(g)＝氨基酸量(g)×16％”计算获得。复方氨基酸注射液的出现使静脉补充氨基酸成为可能，目前国家药品监督管理局批准上市的复方氨基酸注射液有20余种。复方氨基酸注射液主要分为平衡型氨基酸注射液和疾病适用型氨基酸注射液，其氨基酸浓度范围在3％～15％。平衡型复方氨基酸注射液是以人乳、牛奶、土豆等氨基酸配比为处方依据的，常见的有复方氨基酸注射液(18aa)、复方氨基酸注射液(18aa-ⅰ)、复方氨基酸注射液(18aa-ⅱ)、复方氨基酸注射液(18aa-ⅲ)、复方氨基酸注射液(18aa-ⅳ)、复方氨基酸注射液(18aa-ⅴ)、复方氨基酸注射液(14aa)、复方氨基酸注射液(17aa)等。疾病适用型复方氨基酸注射液是根据不同疾病的氨基酸代谢特点为处方依据的，包括肝病适用型、肾病适用型和创伤适用型。肝病适用型有复方氨基酸注射液(3aa)、复方氨基酸注射液(6aa)、复方氨基酸注射液(17aa-ⅲ)和复方氨基酸注射液(20aa)等。肾病适用型有复方氨基酸注射液(9aa)和复方氨基酸注射液(18aa-ⅸ)等。创伤适用型有复方氨基酸注射液(15-hbc)和复方氨基酸注射液(18aa-ⅶ)等。此外还有儿童专用的复方氨基酸注射液，如小儿复方氨基酸注射液(18aa-i)、小儿复方氨基酸注射液(18aa-ⅱ)和小儿复方氨基酸注射液(19aa-i)等。谷氨酰胺是一种重要的条件必需氨基酸，由于谷氨酰胺在水溶液和长时间保存时不稳定，并且溶解度很低(约3g/l，20℃)，故静脉用药时将其制成二肽即丙氨酰谷氨酰胺单独添加，其临床代表药物为丙氨酰谷氨酰胺注射液，此外还有甘氨酰谷氨酰胺、甘氨酰酪氨酸的双肽注射液。为了保证复方氨基酸注射液产品中氨基酸的稳定性，氨基酸制剂在处方中普遍添加亚硫酸盐(焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠)作为抗氧化剂。亚硫酸盐具有潜在的毒性风险，具体表现在两个方面:诱发超敏反应、损害组织与器官。蛋白质是维持机体生存的关键物质，几乎所有临床营养评定方法中都涉及对蛋白质代谢的评估，氮平衡可动态反映机体的蛋白质水平及能量平衡状况，机体摄入氮量大于排出量为正氮平衡，小于排出量为负氮平衡。人体在一定程度内对氮平衡有调节作用，正常成年人每日摄入的蛋白质增加或减少时，体内蛋白质的分解速度及排出量也会随之增加或减少。但在某些疾病状态下，如胰腺炎、胃肠道切除术后、库欣综合征、创伤、感染、肾功能障碍、烧伤等，会导致负氮平衡。因此，机体在正常状态下或不同的疾病状态下对蛋白质的需求也不相同。复方氨基酸注射液是目前肠外营养中主要的蛋白质供给形式，充分满足机体的蛋白质需求，合理选择不同配方氨基酸注射液，可望达到较好的营养治疗目的。复方氨基酸注射液的出现与发展使静脉补充氨基酸成为可能，但同时作为药品，复方氨基酸注射液在临床应用中应确保有效性和安全性。有效性方面，静脉输注各种氨基酸比例应符合机体需求，尤其是处于特殊病理、生理状态下，不能经胃肠道途径给予营养的患者，应该根据特殊人群的代谢特点，在合适的时机选择适宜的氨基酸制剂与剂量，才能起到氨基酸注射液应有的营养治疗作用。安全性方面，临床应用中不仅要关注配伍安全，避免已知的药物相互作用，还应关注复方氨基酸注射液中抗氧化剂等成分对药品本身及易感人群的不良影响，明确相应质量标准范围及国内外有关复方氨基酸注射液制剂质量进展。今后，随着科技与制药工艺的不断发展，期待人们将可以应用更安全有效的复方氨基酸注射液。同时，随着营养代谢、临床营养领域研究的不断发展，期待人们也将推出更为科学严谨的复方氨基酸注射液临床应用方法。本发明方法呈现如本发明所述一个或多个方面的优异技术效果。附图说明图1是典型的对照品色谱图，游离氨的保留时间在22.6min处。图2是复方氨基酸注射液供试品的色谱图，游离氨与其它相邻峰的分离度优良。图3是空白溶剂的图谱，显示在游离氨保留时间处无色谱峰。具体实施方式通过下面的实施例可以对本申请进行进一步的描述，然而，本申请的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本申请的精神和范围的前提下，可以对本申请进行各种变化和修饰。本申请对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本申请目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本申请仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本申请，而不是限制本申请。下文制备步骤为了举例的目的，并基于各举例的可比较性而作了某些具体描述，本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本申请涉及的产品或方法。实施例1：检测复方氨基酸注射液中的游离氨1.仪器和设备：氨基酸分析仪(日立l-8900型)；钠离子型磺酸基强酸性阳离子交换树脂为填充剂的色谱柱(规格：4.6mm×60mm，3μm)2.分离用缓冲液(流动相)的配制：按以下表1配制氨基酸分离用缓冲液b1、b2、b3、b4和b5：表1：分离用缓冲液配制表试剂b1b2b3b4b5水700ml700ml700ml700ml700ml柠檬酸钠，以其二水合物计量6.19g7.74g13.31g26.67g-氢氧化钠0.24g0.8g--8.0g氯化钠5.66g7.07g3.74g54.35g-柠檬酸，以其一水合物计量19.8g22.0g12.8g6.1g-乙醇135.0ml25.0ml9.0ml-100.0ml加水定容至1000ml1000ml1000ml1000ml1000ml3.反应液(亦可称为显色液、衍生反应试剂、衍生试剂等)的配制：取乙二醇单甲基醚979ml，充入氮气5分钟，加入硼氢化钠83mg，继续充入氮气30分钟，作为氨基酸分析用显色液r1；取乙二醇单甲基醚401ml，置1000ml量瓶中，加入无水醋酸钠204g，加入冰醋酸123ml，加水336ml，溶解，加水定容至刻度，充入氮气30分钟，作为氨基酸分析用显色液r2；取乙醇50ml，加水稀释至1000ml，作为氨基酸分析用显色液r3。4.色谱条件：流动相b1～b5的流速为0.40ml/min，衍生试剂r1～r3的流速为0.35ml/min，按下表进行梯度洗脱；柱温57℃；反应器温度为135℃；检测波长570nm；进样量5μl；按表2梯度洗脱：表2：梯度洗脱表时间(分钟)b1(％)b2(％)b3(％)b4(％)b5(％)r1(％)r2(％)r3(％)0.01000000505003.010000003.101000006.001000006.1001000014.8001000014.9000100029.0000100029.1000010032.05050032.110033.0000010033.1010000034.0010000034.1100000037.00010037.15050053.01000000505005.供试品溶液的配制：精密量取复方氨基酸注射液适量，用超纯水(纯水机制备，电阻率≥18.2mω)稀释至总氨基酸含量约为0.8％(m/v)，作为供试品溶液。6.对照品溶液的配制：取氯化铵对照品(购自国药集团化学试剂公司，纯度：100％)，加超纯水配制成含游离氨(nh3)约为5μg/ml的对照品溶液。如果供试品溶液中经测定游离氨浓度与此浓度相差较大，则调整配液浓度使对照品溶液中游离氨的浓度与供试品溶液中的浓度相近，通常，根据本文的线性试验，在0.5～20μg/ml尤其是0.75～15μg/ml尤其是0.75～12.5μg/ml范围内的浓度是适宜的。7.色谱测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各2～20μl(例如2μl、5μl、10μl、20μl，本实例为5μl)注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品溶液中游离氨的浓度，并根据供试品溶液配制方法计算复方氨基酸注射液中游离氨的含量，即得。本实施例1检测的样品为复方氨基酸注射液(18aa-ⅱ，h20066335)。8.方法学验证：8.1线性线性溶液的配制：精密称取氯化铵对照品42.88mg至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为线性试验用贮备液(含nh3浓度为136.25μg/ml)。照表3线性溶液的配制，配制系列线性试验用溶液。分别精密量取线性试验用溶液1-5各5μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标进行线性回归。数据详见表4氨(nh3)线性实验结果。表3：线性溶液的配制线性溶液线性贮备液体积(ml)量瓶体积(ml)氨(nh3)浓度(μg/ml)10.25500.68120.25201.70330.5203.40641.0206.81351.01013.625表4：游离氨(nh3)线性实验结果线性溶液氨(nh3)浓度(μg/ml)氨(nh3)峰面积10.68112420721.70328871433.40670366246.8131409118513.6252807765试验结果：氨(nh3)在0.681μg/ml～13.625μg/ml范围内，氨(nh3)的浓度与峰面积的线性方程为y＝208805x-28616，相关系数r＝0.9997；符合本领域一般的试验要求。8.2准确度准确度以回收率来考察，以6μg/ml氨(nh3)的80％、100％、120％水平进行回收率试验以验证方法的准确度。精密量取复方氨基酸注射液(18aa-ⅱ)2ml，置20ml量瓶中，加入线性试验用贮备液(nh3含量136.25μg/ml)0.4ml、0.5ml、0.6ml，(n＝3×3)，加水稀释至刻度，摇匀，分别进样，记录色谱图，按外标法分别计算回收率。具体结果见表5。表5：氨(nh3)加样回收率实验结果结论：氨(nh3)的回收率在97.80％～99.04％范围内，平均回收率为98.1％，rsd为0.6％，符合本领域一般的试验要求。8.3精密度精密度以重复性试验来考察：按照准确度项下100％回收率样品溶液配制6份，作为重复性样品溶液，按照准确度方法项下进行测定，以考察方法的精密度。结果详见表6氨(nh3)重复性实验结果。表6：氨(nh3)重复性实验结果8.4定量限和检测限氨(nh3)定量限及检测限溶液的制备：取线性试验用溶液4(氨(nh3)浓度6.813μg/ml)，逐级稀释后注入氨基酸分析仪测定，至信噪比s/n作为10:1为定量限，s/n为3:1作为检测限。经测定，氨(nh3)定量限为0.43μg/ml，检测限为0.14μg/ml。8.5溶液稳定性取线性试验溶液4(含氨(nh3)6.813μg/ml)，室温放置，分别在0小时、2小时、4小时、8小时测定氨(nh3)含量，以氨(nh3)峰面积相对标准偏差考察溶液稳定性。结果详见表7。表7：氨(nh3)稳定性实验结果根据上述结果可见，氨(nh3)对照品溶液在室温下放置8小时内稳定，符合试验要求。符合本领域一般的试验要求。本实施例1的典型图谱：图1是典型的对照品色谱图，游离氨的保留时间在22.6min处；图2是复方氨基酸注射液供试品的色谱图，游离氨与其它相邻峰的分离度达2.76，满足一般的关于分离度通常要达到1.5以上的要求；图3是用于配制对照品溶液或供试品溶液的空白溶剂的图谱，显示在游离氨保留时间处无色谱峰。对于本领域技术人员而言，显然本申请不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本申请的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本申请。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本申请的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本申请内。当前第1页1 2 3