数为5%的氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，得到净化液； c、 将净化液在40°C水浴中氮气吹干，再加入1毫升定溶液，涡旋溶解后经0. 22 μ m水系 滤膜过滤，得到待测液。
[0036] 第四实施例：检测牛奶中那卡霉素的方法。
[0037] 1、仪器。
[0038] 仪器：超高效液相色谱-串联四级杆质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI) (TQD美国 Waters)。
[0039] 色谱条件：色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3柱（Φ2· IX 100毫米，L 8微米）；柱温 为40°C ;进样体积为10微升；洗脱液体，流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0. 1%的 甲酸水溶液；流速为〇. 3毫升/分钟。
[0040] 梯度洗脱程序：〇分钟，10%所述流动相A，其余部分为所述流动相B ;0至1.5分 钟，10%至25%所述流动相A，其余部分为所述流动相B ; 1. 5至2. 5分钟，25%至100%所述 流动相A，其余部分为所述流动相B ;2. 5至3. 0分钟，100%所述流动相A，其余部分为所述 流动相B ;3. 0至3. 5分钟，100%至10%所述流动相A，其余部分为所述流动相B ;3. 5至4. 5 分钟，10%所述流动相A，其余部分为所述流动相B。
[0041] 质谱条件：离子化模式为电喷雾正离子模式；质谱扫描方式为多反应监测；电离 电压为3. 00千伏；离子源温度为120°C ;去溶剂气温度为400°C ;去溶剂气为氮气，流量为 600升/小时；碰撞气为高纯Ar,流量为50升/小时；锥孔电压、碰撞能量及定性和定量离 子等质谱参数如下所示。
[0042] 液相色谱-串联质谱法的质谱参数为： 保留时间：2. 52分钟； 驻留时间：〇. 05秒； 锥孔电压：40V ; 母离子质荷比：485. 1 ; 第一碰撞能量：25eV ; 第一子尚子质荷比：162. 6 ; 第二碰撞能量：15eV; 第二子离子质荷比：323. 8。
[0043] 2、检测步骤。
[0044] 2. 1、待测牛奶样品的前处理：按照第一实施例的样本前处理方法对待测牛奶样品 进行前处理，得到待测液。
[0045] 2. 2、用液相色谱-串联质谱法对待测液中卡那霉素的含量进行检测： a、用超高效液相色谱-串联四级杆质谱仪对标准工作液中卡那霉素进行检测，以定量 离子的峰面积Y对其质量浓度X ( μ g/L)得到卡那霉素的标准曲线Y=8. 09849X-14. 8214， 其相关系数大于〇. 99，说明线性关系良好。
[0046] b、用超高效液相色谱-串联四级杆质谱仪对待测液中卡那霉素进行检测，定量离 子峰面积在标准曲线上对应的浓度即为待测液中卡那霉素的含量。
[0047] 2. 3、根据待测液中卡那霉素的含量计算得到待测牛奶样品中卡那霉素的含量。
[0048] 第五实施例：检测牛奶中那卡霉素的方法。
[0049] 1、仪器：与第四实施例所述"仪器"相同。
[0050] 2、检测步骤。
[0051] 2. 1、待测牛奶样品的前处理：按照第二实施例的样本前处理方法对待测牛奶样品 进行前处理，得到待测液。
[0052] 2. 2、用液相色谱-串联质谱法对待测液中卡那霉素的含量进行检测： a、用超高效液相色谱-串联四级杆质谱仪对标准工作液中卡那霉素进行检测，以定量 离子的峰面积Y对其质量浓度X ( μ g/L)得到卡那霉素的标准曲线Y=8. 09849X-14. 8214， 其相关系数大于〇. 99，说明线性关系良好。
[0053] b、用超高效液相色谱-串联四级杆质谱仪对待测液中卡那霉素进行检测，定量离 子峰面积在标准曲线上对应的浓度即为待测液中卡那霉素的含量。
[0054] 2. 3、根据待测液中卡那霉素的含量计算得到待测牛奶样品中卡那霉素的含量。
[0055] 第六实施例：检测牛奶中那卡霉素的方法。
[0056] 1、仪器：与第四实施例所述"仪器"相同。
[0057] 2、检测步骤。
[0058] 2. 1、待测牛奶样品的前处理：按照第三实施例的样本前处理方法对待测牛奶样品 进行前处理，得到待测液。
[0059] 2. 2、用液相色谱-串联质谱法对待测液中卡那霉素的含量进行检测： a、用超高效液相色谱-串联四级杆质谱仪对标准工作液中卡那霉素进行检测，以定量 离子的峰面积Y对其质量浓度X ( μ g/L)得到卡那霉素的标准曲线Y=8. 09849X-14. 8214， 其相关系数大于〇. 99，说明线性关系良好。
[0060] b、用超高效液相色谱-串联四级杆质谱仪对待测液中卡那霉素进行检测，定量离 子峰面积在标准曲线上对应的浓度即为待测液中卡那霉素的含量。
[0061] 2. 3、根据待测液中卡那霉素的含量计算得到待测牛奶样品中卡那霉素的含量。
[0062] 回收率和精密度验证。
[0063] 回收率验证方法：取不含卡那霉素的牛奶作为空白样品，向空白样品中添加卡那 霉素标准品得到加标样品，卡那霉素的添加浓度为10 μ g/L、20 μ g/L和50 μ g/L。用本发明 第四至第六实施例的方法对加标样品中卡那霉素的含量进行检测，并根据检测结果计算回 收率，计算结果如表1所示。得到卡那霉素的最终回收率在79. 63%?97. 87%之间，方法回 收率可以满足检测的需要。
[0064]表 1 :
【主权项】
1. 一种检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法，其特征在于，包括： 取待测牛奶样品，加入磷酸水溶液振荡提取8至10分钟，再加入三氯乙酸水溶液，混合 30秒后离心，取所述离心后的上清液经滤纸过滤，得到滤液； 将所述滤液用混合型阳离子交换固相萃取柱净化，得到净化液；以及 将所述净化液在40°C水浴中氮气吹干，再加入定溶液，涡旋溶解后经0. 22 y m水系滤 膜过滤，得到待测液；所述定溶液的配制方法为：取4毫升甲酸，用0. 01摩尔/升的庚烷磺 酸钠水溶液定容至100毫升。
2. 如权利要求1所述的检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法，其中，所述磷酸水溶 液中磷酸的体积分数为5%，处理每克所述待测牛奶样品需要所述磷酸水溶液的量为3. 75 晕升。
3. 如权利要求1所述的检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法，其中，所述三氯乙酸 水溶液中三氯乙酸的浓度为1克/毫升，处理每克所述待测牛奶样品需要所述三氯乙酸水 溶液的量为0.375毫升。
4. 如权利要求1所述的检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法，其中，所述离心的转 速为4000至5000转/分钟，离心时长为8至10分钟。
5. 如权利要求1所述的检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法，其中，所述净化的步 骤为：将所述滤液加入已活化的混合型阳离子交换固相萃取柱，控制流速不高于2毫升/分 钟，待所述滤液全部通过后，依次用3毫升体积分数为2%的甲酸水溶液和3毫升甲醇洗涤 所述混合型阳离子交换固相萃取柱，弃去全部流出液，最后用3毫升体积分数为5%的氨化 甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，得到所述净化液。
6. 如权利要求5所述的检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法，其中，所述混合型阳 离子交换固相萃取柱活化的方法为：先用3至5毫升甲醇过柱，再用3至5毫升水过柱。
7. -种检测牛奶中卡那霉素的方法，其特征在于，包括： 用权利要求1所述的检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法对待测牛奶样品进行前 处理，得到待测液；以及 用液相色谱-串联质谱法对待测液中卡那霉素的含量进行检测。
8. 如权利要求7所述的检测牛奶中卡那霉素的方法，其中，所述液相色谱-串联质谱法 的色谱条件为： 色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3 柱； 柱温：40°C ; 进样体积：10微升； 洗脱液体：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0. 1%的甲酸水溶液； 梯度洗脱： 0分钟，10%所述流动相A，其余部分为所述流动相B ; 0至1. 5分钟，10%至25%所述流动相A，其余部分为所述流动相B ; 1. 5至2. 5分钟，25%至100%所述流动相A，其余部分为所述流动相B ; 2. 5至3. 0分钟，100%所述流动相A，其余部分为所述流动相B ; 3. 0至3. 5分钟，100%至10%所述流动相A，其余部分为所述流动相B ; 3. 5至4. 5分钟，10%所述流动相A，其余部分为所述流动相B ;和 流速：〇. 3晕升/分钟。
9. 如权利要求7所述的检测牛奶中卡那霉素的方法，其中，所述液相色谱-串联质谱法 的质谱条件为： 离子化模式：电喷雾正离子模式； 质谱扫描方式：多反应监测； 电离电压：3. 00千伏； 离子源温度：120°C ; 去溶剂气温度：400°C ; 去溶剂气：氮气；流量：600升/小时；和 碰撞气：高纯Ar ;流量：50升/小时。
10. 如权利要求9所述的检测牛奶中卡那霉素的方法，其中，所述液相色谱-串联质谱 法的质谱参数为： 保留时间：2. 52分钟； 驻留时间：〇. 05秒； 锥孔电压：40V ; 母离子质荷比：485. 1 ; 第一碰撞能量：25eV ; 第一子尚子质荷比：162. 6 ; 第二碰撞能量：15eV ; 第二子离子质荷比：323. 8。
【专利摘要】本发明提供了一种检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法，包括：取待测牛奶样品，加入磷酸水溶液振荡提取8至10分钟，再加入三氯乙酸水溶液，混合30秒后离心，取离心后的上清液经滤纸过滤，得到滤液；将滤液用混合型阳离子交换固相萃取柱净化，得到净化液；以及将净化液在40℃水浴中氮气吹干，再加入定溶液，涡旋溶解后经0.22μm水系滤膜过滤，得到待测液；定溶液的配制方法为：取4毫升甲酸，用0.01摩尔/升的庚烷磺酸钠水溶液定容至100毫升。该样本前处理方法操作简单快速，可有效保留样本中的卡那霉素。本发明还提供了利用上述样本前处理方法的检测方法。
【IPC分类】G01N30-14
【公开号】CN104597175
【申请号】CN201310522269
【发明人】崔向云, 常建军, 张雪峰, 程国栋, 金珠, 袁凤琴, 宋晓东
【申请人】内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2013年10月30日