中药复方中组分的抗氧化活性贡献程度的确定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药复方质量控制领域，特别涉及中药复方中组分的抗氧化活性贡献 程度的确定方法。
【背景技术】
[0002] 传统中医理论认为，活血化瘀类中药复方具有顺畅血行、消散瘀血、活血通络的功 效；现代药理研究表明，活血化瘀类中药复方具有很强的抗氧化、抗血小板聚集、血管内皮 保护、及改善血流变等作用。其中，抗氧化是活血化瘀类中药能够发挥疾病治疗作用的重要 机制之一。
[0003] 中药复方抗氧化能力的大小一般通过其抗氧化活性来体现。目前，对活血化瘀类 中药复方抗氧化活性的研究对象主要是单一成分，通过试验筛选出具有抗氧化活性的单一 成分，并以此单体化合物的抗氧化活性的高低来确定其在活血化瘀类中药复方中的抗氧化 活性贡献程度。
[0004] 然而，活血化瘀类中药复方是通过多成分协同作用发挥药效，任何单一成分都无 法全面表征中药复方的药效物质基础，其抗氧化活性强弱也无法代表其对活血化瘀类中药 复方的抗氧化活性贡献程度。抗氧化活性贡献程度确定不仅与抗氧化活性大小有关，还与 浓度、固含物重量等参数有关，因此，只是依据抗氧化活性大小来确定抗氧化活性贡献程度 是不合理的。
【发明内容】
[0005] 为解决上述问题，本发明实施例公开了中药复方中组分的抗氧化活性贡献程度的 确定方法。技术方案如下：
[0006] 中药复方中组分的抗氧化活性贡献程度的确定方法，包括：
[0007] 通过制备液相色谱获得目标中药复方的各组分，并将各组分制备成干粉；
[0008] 通过预先设定的自由基清除活性实验，确定各组分在指定浓度下的自由基清除活 性RSA的值a;
[0009] 根据所述预先设定的自由基清除活性实验，确定各组分中每一组分的n个指定浓 度Q、C2、C3……k、Cn分别对应的自由基清除活性RSAi、RSA2、RSA3……RSAn_i、RSAn，计算 得到各组分中每一组分的自由基清除活性-浓度曲线下面积AUC;通过将所得到各组分中 每一组分的自由基清除活性-浓度曲线下面积除以其中的最大值进行归一化处理，得到各 组分的自由基清除活性-浓度曲线下面积的归一化结果b;
[0010] 其中，各组分中每一组分的自由基清除活性-浓度曲线下面积AUC的计算方法 为：
[0011] AUC= (RSAi+RSA2)X(CfC) /2+ (RSA2+RSA3)X(c3-c2) /2+......+(RSAn^+RSAn)X(Cn
[0012] 精密称定所制备的各组分干粉重量，得到各组分固含物重量，通过将所得到各组 分固含物重量除以其中的最大值进行归一化处理，得到各组分固含物重量的归一化结果 C；
[0013] 根据已确定的各组分的自由基清除活性RSA的值a、各组分自由基清除活性-浓度 曲线下面积的归一化结果b及各组分固含物重量的归一化结果c，得到各组分的三元网络 回归面积A，所述三元网络回归面积A的计算公式为：
【主权项】
1. 中药复方中组分的抗氧化活性贡献程度的确定方法，其特征在于，包括： 通过制备液相色谱获得目标中药复方的各组分，并将各组分制备成干粉； 通过预先设定的自由基清除活性实验，确定各组分在指定浓度下的自由基清除活性RSA的值a; 根据所述预先设定的自由基清除活性实验，确定各组分中每一组分的n个指定浓度Cp C2、C3……Cm、Cn分别对应的自由基清除活性RSA^RSA2、RSA3……RSAn_i、RSAn，计算得到各 组分中每一组分的自由基清除活性-浓度曲线下面积AUC;通过将所得到各组分中每一组 分的自由基清除活性-浓度曲线下面积除以其中的最大值进行归一化处理，得到各组分的 自由基清除活性-浓度曲线下面积的归一化结果b; 其中，各组分中每一组分的自由基清除活性-浓度曲线下面积AUC的计算方法为： AUC=(RSAJRSAJX(Q-Ci)/2+(RSA2+RSA3)X(C3-C2)/2+......+ (RSAn_1+RSAn)X(Cn- D/2 ; 精密称定所制备的各组分干粉重量，得到各组分固含物重量，通过将所得到各组分固 含物重量除以其中的最大值进行归一化处理，得到各组分固含物重量的归一化结果c; 根据已确定的各组分的自由基清除活性RSA的值a、各组分自由基清除活性-浓度曲线 下面积的归一化结果b及各组分固含物重量的归一化结果c，得到各组分的三元网络回归 面和A，所沭=元网络冋归而和A的计筧公式为
： 并根据所述三元网络回归面积A的大小来确定各组分在目标中药复方中的抗氧化活 性贡献程度，即组分的三元网络回归面积A越大，其在目标中药复方中的抗氧化活性贡献 程度越大。
2. 如权利要求1所示的方法，其特征在于，通过制备液相色谱获得目标中药复方的各 组分，并将各组分制备成干粉，包括： 将Vi体积的目标中药复方的提取液置于乂2体积的容量瓶中，加入体积分数为0? 100%甲醇稀释并定容至刻度，超声混匀，离心后得到供试品溶液； 在预设的制备液相色谱条件下，取v3体积的供试品溶液注入制备液相色谱中，采用自 动收集装置，每t分钟收集一次组分，收集N个组分，反复进样M次，收集合并相同组分，浓 缩、干燥优选冻干，得到各组分干粉，其中，M> 1。
3. 如权利要求2所示的方法，其特征在于，所述预设的制备液相色谱条件还包括： 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶的固定相； 流动相：〇. 01?1%的甲酸水溶液-甲醇，优选〇. 05?0. 5%的甲酸水溶液-甲醇，更 优选0. 1 %的甲酸水溶液-甲醇； 流速：5?20mL/分钟； 柱温:室温； 进样量：1?5mL; 检测波长：254和286nm。
4. 如权利要求1所示的方法，其特征在于，所述预先设定的自由基清除活性实验为 DPPH自由基清除活性实验。
5. 如权利要求4所示的方法，其特征在于，根据DPPH自由基清除活性实验确定各组分 自由基清除活性的方法，包括： 用指定溶剂分别制备已知浓度为C#s的各组分样品溶液； 向体积为V4的各组分样品溶液中分别加入体积为V5浓度为C_的DPPH溶液，并设置 空白对照组及DPPH对照组，所述空白对照组包含V4体积的供试品溶液及V5体积的指定溶 齐IJ;所述DPPH对照组包括V4体积的指定溶剂及V5体积CDPPH浓度的DPPH溶液； 记录每个组分样品溶液的吸光度值、空白对照组的吸光度值0DS自及DPPH对照组 的吸光度值〇Ddpph，并根据公式： DPPH自由基清除活性=1-(0D样品-0D空白）/0D_ 确定各组分在浓度为C#s的情况下的自由基清除活性。
6. 如权利要求5所示的方法，其特征在于，采用多功能读板机在预设条件下记录每个 组分样品溶液的吸光度值、空白对照组的吸光度值0DS自及DPPH对照组的吸光度值 〇Ddpph;K述预设条件包括：试验温度：20?50°C，优选的30?40°C，更优选37°C;读板速 度：45s/次；采集时间：45min;检测波长：517nm。
7. 如权利要求1所示的方法，其特征在于，所述目标中药复方为丹红注射液。
【专利摘要】本发明实施例公开了中药复方中组分的抗氧化活性贡献程度的确定方法，包括：通过制备液相色谱获得目标中药复方的各组分，并将各组分制备成干粉；确定各组分的自由基清除活性RSA的值a、各组分自由基清除活性-浓度曲线下面积的归一化结果b及各组分固含物重量的归一化结果c，进而得到各组分的三元网络回归面积A；并根据所述三元网络回归面积A的大小来确定各组分在目标中药复方中的抗氧化活性贡献程度。
【IPC分类】G01N30-88, G01N5-00
【公开号】CN104614481
【申请号】CN201510079136
【发明人】杨静, 江振作, 朱彦, 王琰, 王跃飞, 张蕾, 柴欣
【申请人】天津中医药大学
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月13日