一种去除红细胞处理液及用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及细胞生物技术领域，尤其涉及一种去除红细胞处理液及用途。
【背景技术】
[0002]临床上皮组织取样时，取样不慎或者取样部位损伤导致出血，就形成血性样本，腹水细胞学检查时，在抽取腹水过程必然带有大量血液，也会形成血性样本。支气管等部位灌洗取样过程，也有可能出血，也会形成血性样本，血性样本在制片过程严重影响观察，主要表现在:血红细胞大量贴附在制片区，甚至覆盖病理细胞，影响病理细胞的判读、血红细胞碎片凝集的小团块通过过滤网，贴附在制片区，影响病理细胞的判读、被染液染色过的血红蛋白粘附于玻片上。造成背景复杂，影响病理细胞判读。因此能否处理血红细胞成了血性样本制片成功的关键。目前临床上普遍采用高浓度的冰醋酸来处理，主要方式有:1、直接向保存液中加入一定比例的冰醋酸，裂解后离心，再向沉渣中加入冰醋酸，重复离心，达到去除红细胞的效果；2、用酒精和冰醋酸混合物来裂解红细胞，处理方法同第一种方式；3、用溶血剂来裂解红细胞，采用带有氰化钾的裂解液，处理方法同第一种。
[0003]三种方法中，方法I和方法2主要特点都是靠加入大量的冰醋酸来达到裂解红细胞的效果，裂解完全，但是大量的高浓度冰醋酸会将一部分的正常细胞，以及病变细胞也一同裂解，因此在去除红细胞的同时可能会因为病变细胞也被裂解而造成漏检。同时不同取样部位的细胞可能因为高浓度的冰醋酸造成过酸而裂解。方法3采用溶血剂来裂解红细胞，目前市售的溶血剂有较强的溶血效果，但是含有氰化钾剧毒成分，对操作者和环境都是一种很大的威胁。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种高效、无毒、专一且成本低的去除红细胞处理液。
[0005]为实现上述目的，本发明提供一种去除红细胞处理液，其特征在于，由醇类、氯化钠、磷酸盐缓冲液、抗凝剂、表面活性剂、冰醋酸和双蒸水组成。
[0006]进一步，所述醇类占处理液总体积15%_30%，氯化钠含量为5-10g/L、磷酸盐缓冲液0.01-0.1M，抗凝剂含量为l_5g/L，表面活性剂含量为l_6g/L，冰醋酸l_5g/L，双蒸水补充不足的处理液体积。
[0007]进一步，所述醇类占处理液总体积20%_25%，氯化钠含量为8_9g/L、磷酸盐缓冲液0.05-0.1M，抗凝剂含量为2-4g/L，表面活性剂含量为3_5g/L，冰醋酸3_5g/L，双蒸水补充不足的处理液体积。
[0008]进一步，所述醇类为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中的一种或任意一种以上，质量浓度为 95%-100%。
[0009]进一步，所述磷酸盐缓冲液为2.2g磷酸氢二钠和0.1g磷酸二氢钠定容IL组成的
0.1MPB缓冲溶液，其以下使用浓度可用上述配制溶液稀释而成。
[0010]进一步，所述抗凝剂是乙二胺四乙酸二钠。
[0011]进一步，所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、十六烷三甲基氯化铵、十六烷二甲基苄基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵的一种或一种以上的组合物。
[0012]另一方面，本发明保护所述去除红细胞处理液用于去除细胞样品中的血红细胞成分的用途。
[0013]进一步，1ml细胞样品与去除红细胞处理液的体积比为10:6。
[0014]另一方面，本发明保护所述去除红细胞处理液来去除血性细胞中红细胞的方法，其特征在于，其步骤为:将血性样品1ml混匀，经过800g，5分钟离心浓缩后，去除上清，向沉淀加入6ml去除红细胞处理液，重新混勾lmin，再2000r/min离心5min，去除上清即可；若颜色未退去，重复以上步骤直至颜色褪去为止；优选的，血性样品中含有体积分数多10%的血量。
[0015]本发明所述醇类占处理液总体积为15%_30%，既可以固定细胞，又不会使血红蛋白迅速变性，有利于维持细胞形状和清除血红蛋白。低于本发明的浓度，细胞不能得到有效固定，变形。高于该浓度，容易使裂解释放出来的血红蛋白变性，难以复溶，很难排除干扰。
[0016]本发明所述冰醋酸含量为l_5g/L，合适的冰醋酸浓度，既可裂解红细胞，又对病变细胞和正常细胞无损害，最大程度保留病变细胞供医师判读。若高于上限浓度会使细胞膨胀，细胞长时间在高浓度情况下，会破裂，损失细胞。若低于下限，则无法有效裂解红细胞。
[0017]所述磷酸盐为缓冲体系，处理液整体呈弱酸性，缓冲范围广，能维持多个取材部位的细胞正常形状。
[0018]本发明所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、十六烷三甲基氯化铵、十六烷二甲基苄基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵的一种或者一种以上的组合物，表面活性剂能起到溶解红细胞的作用，又能清除污垢，增加溶液的溶解度，不易形成血红蛋白复合物，更容易清除血红细胞。本发明所用表面活性剂浓度优选地在l_6g/L，高于上限影响细胞形态结构。低于下限无法达到预期效果。
[0019]本发明所述去除红细胞处理液的有益效果是:
1、所用试剂成本低廉，均采用普通的化学药品；
2、无毒，不含氰化钾等剧毒化学药品，避免了对环境的污染，也给技术人员提供了一个安全的操作环境；
3、尽可能的降低对细胞的损害，能在去除红细胞的同时保证病理细胞的完整性；
4、采用本发明所述去除红细胞处理液处理细胞，只裂解红细胞和清除血红蛋白，对病变细胞和正常细胞无损害，最大程度保留病变细胞，维持细胞形状，制片效果好，背景简单，清晰，很容易判断结果。
【附图说明】
[0020]图1是未经过处理的血性宫颈细胞制片的10倍光镜图；
图2是经过本发明的去除红细胞处理液处理后的血性宫颈细胞制片的10倍光镜图； 图3是经过市售的溶血剂处理后的血性宫颈细胞制片的10倍光镜图；
图4是经过浓冰醋酸和乙醇混合物处理后的血性宫颈细胞制片的10倍光镜图。
【具体实施方式】
[0021]下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0022]实施例1:去除红细胞处理液的制备原料:
甲醇150ml ；
氯化钠5g ；
冰醋酸1.0 ml ；
乙二胺四乙酸二钠1.0g;
吐温-201.0ml ；
PB0.0lM ；
蒸馏水定容至1000 ml。
[0023]制备方法:
按上述成分称量和量取后，搅拌溶解即可。
[0024]用本实施例所制备得到的去除红细胞处理液处理宫颈细胞标本，制片效果比较好，背景比较简单，清晰，很容易判断结果。
[0025]实施例2:去除红细胞处理液的制备原料:
乙醇300ml ；
氯化钠1g ；
冰醋酸5.0ml ；
乙二胺四乙酸二钠5.0g;
吐温-206.0ml ；
PB0.1M ；
蒸馏水定容至1000 ml。
[0026]制备方法:同实施例1。
[0027]用本实施例所制备得到的去除红细胞处理液处理痰液细胞标本，制片效果比较好，背景比较简单，清晰，很