分泌因子grem2在制备肥胖疾病筛选试剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种疾病筛选的试剂的制备，特别涉及分泌因子GREM2在制备肥胖疾 病筛选试剂中的应用。
【背景技术】
[0002] 超重和肥胖的广泛流行及其作为多种慢病如2型糖尿病、心血管疾病、肿瘤的危 险因素，使得肥胖已经成为首要的公共卫生问题。中国正处于社会经济快速发展时期，肥胖 及其相关慢性疾病并发症问题也日益突出。根据上海交通大学医学院附属瑞金医院、上海 市内分泌代谢病研究所与中国疾病预防控制中心慢性非传染性疾病预防治中心合作开展 的2010年中国慢病监测暨糖尿病专题调查报告显示，按照中国人群超重（BMI彡24.0kg/ m2)及肥胖（BMI彡28. 0kg/m2)的标准，中国2010年18岁以上成人的超重患病率为 30. 6%，肥胖的患病率为12%。因此，我国的肥胖形势也非常严峻，肥胖的防治工作任重道 远。
[0003] 大量证据表明，脂肪组织的功能异常可导致肥胖。脂肪组织具有显著的代谢调节 作用及细胞可塑性。改变脂肪组织细胞的形态结构为肥胖干预提供了潜在的治疗靶点，而 影响脂肪组织结构的因素可能是肥胖的重要原因之一。
[0004] 棕色脂肪通过非震颤的形式产热。部分白色脂肪组织在冷冻刺激或肾上腺素刺激 下可以转变为棕色脂肪样组织，高表达解偶联蛋白UCP1，这一过程即白色脂肪棕色化。目前 已经发现一系列的因子可以作用于脂肪细胞促进白色脂肪棕色化过程如BMP4、BMP7、BMP8B 等。BMP4促进白色脂肪前体细胞棕色化；BMP7明显促进棕色脂肪细胞形成并增加能量消 耗；BMP8B增加棕色脂肪组织能量消耗。这些结果表明BMP家族在脂肪细胞分化，尤其是棕 色脂肪细胞分化过程中发挥着重要作用。由于其可分泌入血，因此有可能成为理想的生物 标志物或干预手段。有意思的是，BMP家族在体内存在天然的拮抗剂，其中同样为分泌因子 的拮抗剂GREM2引起了我们的关注。迄今为止，并无研究报道GREM2在代谢中的作用。
[0005] GREM2是一种分泌的糖基化蛋白，属于BMP诘抗剂家族中的CAN(cerberus and dan)亚家族，其C端含有8个胱氨酸环。该家族包含GREM1、GREM2两个成员，其中GREM2在 代谢相关组织表达远高于其他组织。GREM2基因位于人1号染色体lq43区段，包含2个外 显子，全长4, 170bps，编码168个氨基酸。GREM2能够与相应的BMP结合，最终抑制BMP信 号通路的激活。既往报道GREM2与骨形成相关，而目前对于GREM2生物学功能所知甚少，尤 其在能量代谢方面尚无涉及。GREM2是否与肥胖发生存在关联，是否在米色脂肪组织中发挥 作用，其通过拮抗何种BMP发挥作用？最为重要的是，在其他研究中尚无GREM2与能量代谢 相关研究，未见任何有关GREM2血清水平检测报道，未能对其临床意义开展相关研究。基于 上述原因，需进一步对GREM2的生物学功能和临床意义进行研究。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供分泌因子GREM2在制备肥胖疾病筛选试剂中的应用，尤其是 分泌因子GREM2在制备肥胖症筛选试剂中的应用及肥胖症相关慢性并发症筛选试剂中的 应用，为临床上评估肥胖及代谢相关并发症风险，并对其进行及时治疗提供了可靠的依据。
[0007] 所述分泌因子GREM2与肥胖症呈显著正相关。
[0008] 本发明首先从正常人和肥胖患者血清检测中发现随着BMI水平上升、胰岛素抵抗 指数增加、代谢综合征组分的增加，血清GREM2水平也越高。进一步多元线性回归结果显 示，血清GREM2水平与BMI、腰围呈正相关，校正了一系列混杂因数后，该相关性仍然显著独 立存在。体外研究结果显示，GREM2可以明显抑制白色脂肪棕色化过程。所以，脂肪分泌因 子GREM2可以作为肥胖的血清学标志物，应用于预测肥胖及代谢相关综合征，为临床上评 估肥胖及其代谢并发症风险提供了理论依据。
[0009] 有益效果：本发明为研究了分泌因子GREM2与肥胖患者的关系，通过研究表明，分 泌因子GREM2可用于预测肥胖及代谢相关综合征，为临床上分泌因子GREM2对肥胖症的筛 选提供了理论依据和实验数据。
【附图说明】
[0010] 图1为正常对照和肥胖患者血清GREM2水平的对比图。
[0011] 图2为血清GREM2水平与肥胖指标显著相关对比图。
[0012] 图3为血清GREM2在内脏脂肪中表达对比图。
[0013] 图4为冷冻模型和给予促进棕色化的药物模型中GREM2的表达变化图。
[0014] 图5为GREM2对于前体脂肪细胞棕色化的抑制对比图。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实施例，对本发明作进一步说明：
[0016] 实施例
[0017] 1.肥胖患者血清GREM2水平较正常对照明显升高
[0018] 本研究从2013年6月至2014年8月间在瑞金医院内分泌科肥胖专病门诊接诊肥 胖患者中，纳入符合指征并在本院治疗的肥胖患者167例，同时招募正常志愿者147例。肥 胖患者纳入标准为：BMI彡30. 0kg/m2,年龄在14-34岁之间。排除标准：1)继发性肥胖；2) 应用内分泌激素类药物（包括口服避孕药，糖皮质激素）；3)服用降糖药或降低血脂药物； 4)妊娠或哺乳期患者；5)严重的肝肾功能异常患者；6)神经或精神疾病患者。
[0019] 另外，我们从上海交通大学医学院在校学生中招募了 147例正常志愿者。正常人 招募纳入标准为：BMI彡23. 0kg/m2,年龄14-34岁之间。排除标准为：1)高血压，心脏病； 2)血脂异常，糖调节异常；3)肝肾功能异常；4)有糖尿病、肥胖及心血管疾病家族史。
[0020] 研究方法：
[0021] 1)、问卷调查和体格检查
[0022] 所有问卷调查员进行统一的技术培训，使用统一设计的调查表。调查内容包括：一 般情况（性别、年龄、身高、体重、臀围、腰围、颈围、体脂含量、血压、生活习惯、饮食习惯、锻 炼情况、是否足月顺产、是否母乳喂养、出生体重、代谢性疾病家族史等，针对女性进一步询 问月经及生育情况），并在后期进行临床检测指标的登记。
[0023] 2)、采用空腹静脉血浆标本检测空腹血糖（FPG)、空腹胰岛素（insulinO)和 HbAlc，采用0GTT-2h静脉血浆标本检测餐后血糖（PPG)。使用葡萄糖激酶法经自动生 化仪（ADVIA_1650Chemistry System, Erlangen, Germany)检测 FPG 和 PPG，米用电化学 发光法（Roche-Diagnostics, Basel, Switzerland)检测 insulin，采用高效液相色谱法 (Bio-Rad, Hercules, CA)检测 HbAlc0
[0024] 表1、正常人和肥胖病人临床资料
[0025]
[0026] 从表1结果表明，与正常对照相比，肥胖患者除了性别年龄外，其它指标BMI、 Waist (^1'(：1111^^611〇6、41/1、431'、1'(]、？136和？136等都明显升高，!101^-(3则明显降低。肥胖患 者GREM2水平明显高于正常对照（图1A)。
[0027] 进一步按肥胖严重程度将研究对象分为四组：体重正常组（BMI〈23.0kg/m2)、 轻度肥胖组（BMK35. 0kg/m2)、中度肥胖组（35. 0彡BMK40. 0kg/m2)、重度肥胖组 (BMI彡40. 0kg/m2)，如图IB所示，随着BMI水平上升，血清GREM2水平也越高，GREM2与肥 胖严重程度密切相关。另外，HOM-IR代表胰岛素抵抗程度，我们按HOM-IR水平四分位， 将研究对象分为四组，如图IC所示，胰岛素抵抗指数越高，血清GREM2水平也越高。肥胖的 严重后果是导致代谢综合征进而引起心脑血管风险。我们将研究人群按代谢综合征的组分 进行分组，如图ID所示，随着代谢综合征组分的增加，血清GREM2也呈现上升趋势。
[0028]