0020] 此外，根据本发明的实施例，本发明检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的预处 理方法以及检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的方法具有下列优点的至少之一：
[0021] 1、根据本发明的实施例，利用乙腈-甲醇溶液作为提取液，能够有效地从发酵乳 中提取出黄曲霉毒素，减少其他杂质对检测造成干扰。
[0022] 2、根据本发明的实施例，缓冲液的pH值为7. 4~8. 5。缓冲液能够中和发酵乳的 酸，使其能够通过亲和柱，而不影响亲和柱的亲和性，使亲和柱特异性地吸附黄曲霉毒素， 并通过洗脱得到洗脱液。
[0023] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【具体实施方式】
[0024] 下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发 明，而不能理解为对本发明的限制。
[0025] 本发明提出了检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的预处理方法以及检测发酵 乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的方法，下面将分别对其进行详细描述。
[0026] 检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的预处理方法
[0027] 在本发明的第一方面，本发明提出检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的预处 理方法。根据本发明的实施例，该方法包括下列步骤，由此，根据本发明实施例的检测发酵 乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的预处理方法可以进一步具有较简便、快速的操作简便、较高 的回收率或者较高的灵敏度。
[0028] (1)将发酵乳与提取液进行混合。
[0029] 在该步骤中，根据本发明的具体示例，提取液包括乙腈和甲醇，乙腈体积大于甲醇 体积，根据本发明的优选实施例，乙腈和甲醇的体积比为8: 2,基于1克发酵乳，提取液的添 加量为2~3毫升。由于发酵乳的粘度较大，发酵乳中含有的成分较为复杂，若直接将其通 过亲和柱，会影响亲和柱的亲和性，进而影响检测结果，所以需要利用提取液对发酵乳中的 黄曲霉毒素进行提取。发明人经过大量实验在有机物中筛选得到利用乙腈-甲醇溶液提取 发酵乳中的黄曲霉毒素，并发现，当乙腈体积小于甲醇，提取得到的混合物经离心处理后， 呈浑浊态，无法收集上清，同时沉淀效果欠佳，进而影响后续对黄曲霉毒素含量的确定。根 据优化得到最优乙腈和甲醇的体积比为8:2。在此最优条件下，黄曲霉毒素能够充分地溶于 上清液中。由此，根据本发明实施例的检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的预处理方 法可以进一步具有较简便、快速的操作简便、较高的回收率或者较高的灵敏度。
[0030] (2)将步骤⑴所得到的混合物进行离心处理，并收集上清液。
[0031] 在该步骤中，通过离心处理能够使黄曲霉毒素充分溶解于乙腈-甲醇相中，而与 其他杂质有效地分开。由此，根据本发明实施例的检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量 的预处理方法可以进一步具有较简便、快速的操作简便、较高的回收率或者较高的灵敏度。
[0032] (3)将上清液进行浓缩处理，并利用缓冲液将浓缩处理的产物进行定容，以便得到 待净化溶液。
[0033] 在该步骤中，根据本发明的具体示例，缓冲液的pH值为7. 4~8. 5。根据本发明 的另一具体示例，基于10克发酵乳，上清液在40~48摄氏度下旋转蒸发到上清液体积为 1~5毫升，再用缓冲液定容至45~50毫升并混匀。发明人发现，由于发酵乳的酸性较强， 直接用水定容后通过亲和柱，会超过亲和柱承受的最大酸浓度，导致亲和柱的亲和性下降， 无法有效地特异性吸附黄曲霉毒素，影响检测结果。酸性过大甚至造成亲和柱的损坏。发 明人经过大量实验优化得到最优缓冲液pH值。由于经过浓缩处理产物的体积相对于混合 物的体积而言较少，所以定容得到的待净化溶液的pH值接近于缓冲液的pH值，能够通过亲 和柱，而不影响亲和柱的亲和性，使亲和柱特异性地吸附黄曲霉毒素，并通过洗脱得到洗脱 液。若缓冲液的pH值大于8. 5，则缓冲液偏碱性，会使浓缩产物中黄曲霉毒素分解，若缓冲 液pH值小于7. 4,则缓冲液偏酸，与酸性浓缩处理产物混合后，得到的待净化溶液的酸性较 强，导致亲和柱的亲和性下降，无法有效吸附黄曲霉毒素，影响检测结果。由此，根据本发明 实施例的检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的预处理方法可以进一步具有较简便、快 速的操作简便、较高的回收率或者较高的灵敏度。
[0034] 需要说明的是，本发明对免疫亲和柱的种类不作严格限定，只要能够有效地吸附 黄曲霉毒素，并能够将其洗脱即可。根据本发明的具体示例，免疫亲和柱为黄曲霉毒素总量 免疫亲和柱3CC，购自中检维康公司。
[0035] (4)利用黄曲霉毒素总量免疫亲和柱对待净化溶液进行净化处理，得到洗脱液。
[0036] 在该步骤中，根据本发明的具体实施例，净化处理包括：将待净化溶液通过黄曲霉 毒素总量免疫亲和柱，弃流出液，然后用水淋洗黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，弃流出液，再 用乙腈洗脱黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，得到洗脱液。利用提取液对发酵乳中黄曲霉毒素 进行提取，会有部分能够溶于乙腈-甲醇溶液的杂质溶于待净化溶液，会对后期检测造成 干扰，所以需要进一步利用免疫亲和柱以净化得到含有高纯度黄曲霉毒素的洗脱液。首先， 利用水对免疫亲和柱进行洗脱，以除去水溶性物质，然后利用乙腈进行洗脱，以得到能够溶 于乙腈的黄曲霉毒素B1和Ml。由此，根据本发明实施例的检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和 Ml含量的预处理方法可以进一步具有较简便、快速的操作简便、较高的回收率或者较高的 灵敏度。
[0037] (5)将所述洗脱液进行浓缩处理，并用乙腈-水溶液进行定容，以便得到待测液
[0038] 在该步骤中，根据本发明的具体示例，在乙腈溶液中，乙腈和水的体积比为9:1。由 此，根据本发明实施例的检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的预处理方法可以进一步 具有较简便、快速的操作简便、较高的回收率或者较高的灵敏度。
[0039] 需要说明的是，本发明对过滤的方式不作严格限定，只要能够将定容得到的混合 物中的大分子物质过滤，以防止其对液相色谱或者质谱的检测造成干扰即可。根据本发明 的具体示例，采用〇. 22微米的有机滤膜进行过滤处理。
[0040] 检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的方法
[0041] 在本发明的第二方面，本发明提出一种检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的 方法。根据本发明的实施例，该方法包括：（1)利用前面描述的预处理方法对发酵乳进行预 处理；以及（2)采用液相色谱-质谱联用法对步骤（1)所得到的混合物进行检测，并基于检 测结果确定发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml的含量。由此，根据本发明实施例的检测发酵乳 中黄曲霉毒素B1和Ml含量的方法具有下列优点的至少之一：操作简便、快速、回收率高和 灵敏度高。
[0042] 根据本发明的实施例，质谱的检测条件包括：电离方式为电喷雾电离，正离子；毛 细管电压为3. 5kV ;锥孔电压为40V ;离子源温度为120°C ;锥孔反吹气流量为50L/h ;脱溶 剂气温度为350°C ;脱溶剂气流量为500L/h ;电子倍增电压为650V ;扫描方式为多离子反 应监测；针对黄曲霉毒素Ml，离子选择参数包括：母离子312. 9,子离子240. 7和284. 6,碰 撞能量是38和22,驻留时间是0. 05min ;针对黄曲霉毒素B1，离子选择参数包括：母离子 329. 1，子离子259和273,碰撞能量是25和25,驻留时间是0. lmin。发明人经过大量实验 优化得到该最优检测条件。由此，根据本发明实施例的检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml 含量的方法可以进一步具有较简便、快速的操作简便、较高的回收率或者较高的灵敏度。
[0043] 根据本发明的实施例，液相色谱的检测条件包括：流动相流动速度：0. 3mL/min ; 色谱柱柱温：40°C ;试液温度：20°C ;进样体积：10 yL ;流动相：A相，0. 1%甲酸溶液；B相， 乙腈溶液。发明人经过大量实验优化得到该最优检测条件。由此，根据本发明实施例的检 测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的方法可以进一步具有较简便、快速的操作简便、较高 的回收率或者较高的灵敏度。
[0044] 需要说明的是，本发明对色谱柱的种类和型号不作严格限定，只要能够有效地 分离以确定黄曲霉毒素Ml和B1浓度即可。根据本发明的实施例，色谱柱型号为Waters ACQUITY UPLC BEH C18,规格为 50mmX2. lmm，L8ym〇
[0045] 本领域技术人员能够理