解的是，前面针对检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量 的预处理方法的特征和优点同样适用于该检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的方法， 在此不再赘述。
[0046] 另外，本发明提出另一种检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量的方法。根据本 发明的实施例，该方法包括：⑴称取调制乳样品l〇g于50mL离心管中，加入25毫升提取液 (乙腈和甲醇按体积比8:2)，得到混合液，将混合液高速振荡2min，并将得到的液体在5000 转/分钟下离心5分钟，收集上清液；（2)将上清液在45-48摄氏度下旋转蒸发到体积5升， 再用磷酸二氢钠缓冲液（pH值为7. 4~8. 5)定容到50毫升并混匀，得到待净化溶液，然后 将待净化溶液以2mL/min~3mL/min的流速通过黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，弃流出液，然 后用10毫升水以2mL/min~3mL/min的速度淋洗黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，弃流出液， 再用6毫升乙腈以2mL/min~3mL/min的速度洗脱黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，得到洗脱 液；（3)将洗脱液在氮吹仪下吹干，用乙腈-水溶液（乙腈和水的体积比1:9)定容到lmL。 涡旋混匀，过0. 22 μ m的有机滤膜，用液相色谱-质谱测定，其中（3-1)质谱条件：电离方式 为电喷雾电离，正离子；毛细管电压为3. 5kV ;锥孔电压为40V ;离子源温度为120°C;锥孔反 吹气流量为50L/h ;脱溶剂气温度为350°C;脱溶剂气流量为500L/h ;电子倍增电压为650V ; 扫描方式为多离子反应监测；针对黄曲霉毒素M1，离子选择参数包括：母离子312. 9,子离 子240. 7和284. 6,碰撞能量是38和22,驻留时间是0. 05min ;针对黄曲霉毒素B1，离子选 择参数包括：母离子329. 1，子离子259和273,碰撞能量是25和25,驻留时间是0. lmin。 (3-2)液相色谱条件：流动相流动速度：0. 3mL/min ;色谱柱柱温：40°C ;试液温度：20°C ;进 样体积：10 μ L ;流动相：A相，0. 1 %甲酸溶液；B相，乙腈溶液。
[0047] 下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的 实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条 件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪 器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0048] 在下面的实施例中，如果没有明确说明，则采用的试验仪器和试剂为：
[0049] 1、试剂：
[0050] 黄曲霉毒素Ml和黄曲霉毒素B1 :纯度均大于99. 0% ;
[0051] 色谱纯乙腈、甲醇；
[0052] 黄曲霉毒素Ml标准储备液（0. 01mg/mL):分别称取标准品黄曲霉毒素M10.0 lmg， 用乙腈溶解定容到10mL ;
[0053] 黄曲霉毒素B1标准储备液（0. lmg/mL):称取黄曲霉毒素B1标准品lmg，用乙腈溶 解并定容至10mL ;
[0054] 黄曲霉毒素Ml和黄曲霉毒素B1标准工作液：取黄曲霉毒素Ml和B1标准储备液 用乙腈-水溶液（体积比为1 :9)梯度稀释至所需浓度的标准工作液。
[0055] 2、仪器
[0056] 液相色谱-质谱/质谱联用仪；
[0057] 色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18(50mmX2. 1mm, 1. 8 μπι) 〇
[0058] 固相萃取装置；
[0059] 高速离心机；
[0060] 涡流混合器；
[0061] 氮吹仪；
[0062] 过滤器：0· 2 μ m有机滤膜及针管。
[0063] 免疫亲和柱：黄曲霉毒素总量免疫亲和柱3CC，购自中检维康公司。
[0064] 实施例1
[0065] 在该实施例中，按照下列步骤检测市售发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量：
[0066] (1)准确称取调制乳样品10g于50mL离心管中，加入25毫升提取液（乙腈和甲醇 按体积比8:2)，得到混合液，将混合液高速振荡提取2min，在5000转/分钟下离心5分钟， 并将所得到的上清液转移至鸡心瓶中。
[0067] (2)将上清液在45-48摄氏度下旋转蒸发到体积5升，再用磷酸二氢钠缓冲液（pH 值为7. 91)定容到50毫升并混匀，得到待净化溶液，然后将待净化溶液以2mL/min的流速 通过黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，弃流出液，然后用10毫升水以2mL/min的速度淋洗黄曲 霉毒素总量免疫亲和柱，弃流出液，再用6毫升乙腈以2mL/min的速度洗脱黄曲霉毒素总量 免疫亲和柱，得到洗脱液。
[0068] (3)将洗脱液在氮吹仪下吹干，用乙腈-水溶液（乙腈和水的体积比1:9)定容到 lmL。涡旋混匀，过0. 22 μ m的有机滤膜，用液相色谱-质谱测定。
[0069] ㈧质谱条件：
[0070] 电离方式为电喷雾电离，正离子；
[0071] 毛细管电压为3.5kV;
[0072] 锥孔电压为40V;
[0073] 离子源温度为120°C ;
[0074] 锥孔反吹气流量为50L/h ;
[0075] 脱溶剂气温度为350 °C ;
[0076] 脱溶剂气流量为500L/h ;
[0077] 电子倍增电压为650V ;
[0078] 扫描方式为多离子反应监测；
[0079] 针对黄曲霉毒素Ml，尚子选择参数包括：母尚子312. 9,子尚子240. 7和284. 6,碰 撞能量是38和22,驻留时间是0. 05min ;
[0080] 针对黄曲霉毒素B1，离子选择参数包括：母离子329. 1，子离子259和273,碰撞能 量是25和25,驻留时间是0. lmin。
[0081] (B)液相色谱条件：
[0082] 液相色谱条件流动相流动速度：0· 3mL/min。
[0083] 色谱柱柱温：40 °C。
[0084] 试液温度：20°C。
[0085] 进样体积：10 μ L。
[0086] 流动相：Α相，0. 1 %甲酸溶液；Β相，乙腈溶液。
[0087] 对比例1
[0088] 按照GB5413. 37-2010《乳与乳制品中黄曲霉毒素毒素Ml的检测方法》中"第一 法-免疫亲和层析净化-液相色谱一串联质谱法"对发酵乳进行检测。
[0089] 实施例2
[0090] 在该实施例中，按照下列步骤确定发酵乳中黄曲霉毒素Ml和B1含量的回收率：
[0091] (1)配置含有10克发酵乳、2. 5ng/mL黄曲霉毒素Ml标准工作液及7. 5ng/mL黄曲 霉毒素B1标准工作液；
[0092] (2)按照实施例1的方法，分别确定待测液和发酵乳中黄曲霉毒素Ml和B1含量， 并进一步分别计算发酵乳中黄曲霉毒素Ml和B1含量的回收率，
[0093] 其中，黄曲霉毒素Ml的回收率（％) = (待测液中黄曲霉毒素Ml含量-发酵乳中 黄曲霉毒素Ml含量）/黄曲霉毒素Ml标准工作液中黄曲霉毒素Ml含量，黄曲霉毒素B1的 回收率（％ )=(待测液中黄曲霉毒素B1含量-发酵乳中黄曲霉毒素B1含量）/黄曲霉毒 素B1标准工作液中黄曲霉毒素B1含量。
[0094] 对比例2
[0095] 按照实施例2的方法确定发酵乳中黄曲霉毒素Ml和B1含量的回收率，区别在于， 按照对比例1的方法分别确定待测液和发酵乳中黄曲霉毒素Ml和B1含量。
[0096] 实施例2和对比例2的检测结果如表1所示，可以看出，样品的pH值均为4. 12,按 照对比例2的方法进行操作，用氢氧化钠调节后pH值达到7. 41，而用实施例2方法旋转蒸 发后的pH值为4. 64,但是用磷酸二氢钠缓冲溶液定容后，结果pH值为7. 46,但是回收率分 别是36. 7%和78. 5%，过程中使用对比例2调节pH值后经过离心没有完全沉淀，混合液较 浑浊、粘稠，因此通过免疫亲和柱时需使用两根亲和柱，提高了成本。
[0097] 表1实施例2和对比例2的回收率测定
[0099] 对比例3
[0100] 按照实施例1和2的方法检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和Ml含量及其回收率，区 别在于，提取液为乙腈，体积为25毫升。
[0101] 对比