一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法_2

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chloroethyl phosphate,TCEP)的Tris-HCl (pH = 7.4)缓冲溶液混合,振荡反应,反应完毕后,离心后得到即时活化的aptamerl溶液A,将所述活化的aptamerl溶液A与步骤1得到的金纳米粒子包覆的Fe304微球的水分散液混合,得到混合液B,向混合液B中加入6-巯基己醇溶液得到混合液C,将混合液C进行振荡反应,反应完毕后,对产物进行磁性分离并洗涤,最后将产物重新分散到水中,备用^#aptamer2的Tris-HCl缓冲溶液与含有磷酸三氯乙酯(Trichloroethylphosphate, TCEP)的Tris-HCl (pH = 7.4)缓冲溶液混合,振荡反应,反应完毕后,离心后得到即时活化的aptamer2溶液D,将所述即时活化的aptamer2溶液D与步骤1得到的金纳米粒子包覆的Fe304微球的水分散液混合,得到混合液E,向混合液E中加入6-巯基己醇溶液得到混合液F,将混合液F进行振荡反应,反应完毕后,对产物进行磁性分离并洗涤,最后将产物重新分散到水中,备用;
[0016]步骤6、适配体1的互补链(简称为cDNAl)与Si02@PbS偶联得到cDNAl_Si02@PbS以及适配体2的互补链(简称为cDNA2)与Si02@CdTe偶联得到cDNA2_Si02@CdTe纳米生物探针的制备:取步骤4制备的CdTe QDs包覆的Si02纳米球的水分散液与含有1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的Tris-HCl缓冲溶液混合,得到混合液G,将混合液G在室温下搅拌反应a,加入溶有适配体1的互补链的Tris-HCl缓冲溶液,得到混合液H,室温下进行搅拌反应b,反应完毕后离心得到产物,并将产物重新用Tris-HCl缓冲溶液分散,备用;取步骤4制备的PbS QDs包覆的Si02纳米球的水分散液与含有1- (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的Tris-HCl缓冲溶液混合,得到混合液I,将混合液I在室温下搅拌反应c,加入溶有适配体2的互补链的Tris-HCl缓冲溶液,得到混合液J,对混合液J进行室温下搅拌反应d,反应完毕后离心得到产物,并将产物重新用Tris-HCl缓冲溶液分散,备用;
[0017]步骤7、MB-aptamerl/DNAl-Si02@PbS 和 MB-aptamer2/DNA2-Si02@CdTe 纳米生物复合材料的制备:取步骤6制得的cDNAl-Si02@PbS分散液与步骤5制得的MB-aptamerl分散液混合,得到混合液K,室温下振荡反应,反应完毕后磁性分离产物并洗涤,最后将产物重新分散于Tris-HCl缓冲液中,备用;取步骤6制得的cDNA2-Si02@CdTe分散液与步骤5制得的MB-aptamerf分散液混合,得到混合液L,室温下振荡反应,反应完毕后磁性分离产物并洗涤,最后将产物重新分散于Tris-HCl缓冲液中,备用;
[0018]步骤8、传感器的构建及样品的检测,包括:
[0019]铋膜修饰的丝网印刷电极的制备:将与电化学工作站连接的丝网印刷电极浸入硝酸铋溶液中,通过外加电压e沉积Bi3+,沉积完毕后,洗涤并干燥,铋膜修饰的丝网印刷电极;
[0020]对0ΤΑ和FB 1标准品进行检测,建立标准曲线:将FB 1和0ΤΑ标准品溶液分别与含有 MB-aptamerl/DNAl_Si02@PbS 和 MB-aptamer2/DNA2_Si02@CdTe 的混合液反应,室温下温育,反应完毕后用磁铁收集反应后的磁性复合材料,用PBS冲洗后用含有PBS和!1勵3的混合溶液稀释得到底液;将工作站相联的铋膜修饰的丝网印刷电极浸入含底液和HAc-NaAc缓冲溶液的混合溶液中,在外加电压f下沉积Cd和Pb金属单质,然后利用方波伏安法检测Cd2+和Pb 2+的溶出峰,通过Cd 2+和Pb 2+的溶出峰高与对应0ΤΑ和FBI标准品浓度建立标准曲线。
[0021]步骤1中,金纳米粒子包覆的Fe304微球(MB)分散液的浓度为5mg mL \步骤2中,水溶性碲化镉量子点(CdTe QDs)溶液和水溶性硫化铅量子点(PbS QDs)溶液的浓度均为 10mg mL \
[0022]步骤2中,水溶性碲化镉量子点(CdTe QDs)的制备方法为:将0.065g的Te粉和
0.05g的NaBH4加入到10mL水中,通氮气在冰水浴中反应至Te粉溶解完全,得到NaHTe溶液,保存;将0.1142g CdCl2.2.5H20和210 μ L的巯基丙酸(MPA)与50mL水混合,用lmolL ^aOH调节pH值为8?9,得到混合液M,通氮气除氧30min ;在强磁力搅拌条件下,移取2mL的NaHTe溶液快速注入混合液Μ中,然后移到水热釜中保持80°C反应70min。停止反应恢复至室温后加入过量乙醇搅拌然后静置15min,将所得溶液以离心,取沉淀重新分散得到10mg mL 1水溶性CdTe QDs溶液,4°C避光保存。
[0023]步骤3中,单分散硅烷化Si02纳米粒子水分散液的浓度为10mg mL 1。
[0024]步骤4中,制备CdTe QDs包覆的S1jfi米球时,所用的CdTe QDs溶液、1_ (3_ 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺溶液、S1jfi米粒子水分散液的体积比为10:1:20 ;制备PbSQDs包覆的Si02纳米球时,PbS QDs溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液、Si02纳米粒子水分散液的体积比均为10:1:20 ;所用的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液的浓度为20mg mL ^
[0025]步骤5中,制备活化的aptamerl溶液A时,所用的aptamerl的Tris-HCl缓冲溶液与含有磷酸三氯乙酯的Tris-HCl缓冲溶液的体积比为1:1,aptamerl的浓度为0.lmmolL S制备混合液B时,所用的活化的aptamerl与MB分散液的体积比为1:30 ;制备混合液C时,所用的混合液B与6-巯基己醇溶液的体积比为31:30 ;制备活化的aptamer2溶液D时,所用的aptamer2的Tris-HCl缓冲溶液与含有磷酸三氯乙酯的Tris-HCl缓冲溶液的体积比为1: 1,aptamer2的浓度为0.lmmol L S制备混合液E时,所用的活化的aptamer2与MB分散液的体积比为1:30 ;制备混合液F时,所用的混合液E与6-巯基己醇溶液的体积比为31:30 ;步骤5中,所用的磷酸三氯乙酯的浓度均为0.lmol L \6-巯基己醇溶液的浓度均为2 μπιο? L1,所有的振荡反应均在37°C下进行,反应时间均为12h。
[0026]步骤5中,在得到混合液B或混合液E后,向混合液B或混合液E中分四次加入2mol L 'NaCl溶液,所加入的NaCl溶液体积依次为0.8mL、0.8mL、1.8mL、7mL。
[0027]步骤6中,制备混合液G时,CdTe QDs包覆的Si02纳米球的水分散液与含有1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的Tris-HCl缓冲溶液的体积比为15:8 ;制备混合液Η时,所用的溶有aptamerl的互补链的Tris-HCl缓冲溶液与混合液G的体积比为1:46 ;制备混合液I时,PbS QDs包覆的Si02纳米球的水分散液与含有1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的Tris-HCl缓冲溶液的体积比为15:8 ;制备混合液Η时,所用的溶有aptamer2的互补链的Tris-HCl缓冲溶液与混合液G的体积比为1:46 ;所述的搅拌反应a、b、c、d均在室温下进行,所述搅拌反应a、c反应时间均为lh,所述搅拌反应b、d反应时间均为12h ;步骤6中,所用的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的浓度均为lmmol L ^
[0028]步骤7中,制备混合液Κ时,所用的cDNAl-Si02@PbS分散液与MB-aptamerl分散液的体积比为2:3,cDNAl-Si02@PbS分散液的浓度为10mg mL \MB-aptamerl分散液的浓度为5mg mL S制备混合液L时,所用的cDNA2_Si0 2iCdTe分散液与MB_aptamer2分散液的体积比为2:3,cDNA2-Si02iCdTe分散液的浓度为10mg mL \ MB-aptamer2分散液的浓度为5mgmL、
[0029]步骤8中,所述的硝酸祕溶液浓度为1.25mg mL \所述外加电压e为-1.2V,外加电压e的沉积时间为120秒;所述FBI标准品的浓度为0?10ng mL \所述0ΤΑ标准品的浓度为 0 ?50ng mL \ 所用的 MB-aptamerl/DNAl_Si02@PbS 和 MB-aptamer2/DNA2_Si02@CdTe 的混合液体积为 lmL,MB-ap tamer 1 /DNA 1 -S i 02iPb S 和 MB-aptamer2/DNA2-Si02@CdTe 的浓度均为15mg mL1,所述温育时间为60分钟;含有PBS和200 μ L 0.1Μ順03的混合溶液中,所用的PBS溶液与ΗΝ03溶液的体积比为5:1,ΗΝ0 3溶液的浓度为0.lmol L 1;在含底液和HAc-NaAc缓冲溶液的混合溶液中,底液与HAc-NaAc缓冲溶液的体积比为1:3,所用的HAc-NaAc缓冲溶液浓度为lOmmol L S所述外加电压f为-1.0V,外加电压f沉积时间为300秒;所述方波伏安法(SWV)
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