重悬于超纯水中。取10yL浓缩后的金纳米棒，为了避免金纳米棒与羧基化量子点的非特异性吸附，向溶液中加入SH-PEG-C00H，使得SH-PEG-C00H与金棒的摩尔比为20:1，充分混合后，加入5yL 50μΜ巯基化的PSA适配体，和终浓度为50mM的NaCl溶液，37°C孵育过夜。得到偶联了 PSA适配体的金纳米棒溶液，待用。
[0017]PSA-aptamer:5’-SH-ATTAAAGCTC GCCATCAAAT AGC-3’；
C、量子点偶联PSA适配体部分互补序列PSA CSCcomplementary sequences):购买于武汉伽园的羧基化的CdSeOZnS量子点用超纯水稀释200倍使终浓度为40mM。按EDC、NHS和CdSeOZnS量子点的摩尔比1000:1000:1，加入EDC和NHS，在避光的情况下反应2h。之后，用截留量30kD的超滤管过滤，1mM PB(pH=7.5)缓冲液重悬。向其中加入终浓度2μΜ的PSA CS，反应3h，得到量子点-PSA CS溶液，待用。
[0018]PSA-complementary sequence:5’-NH2- TTTTTTGCTA TTTGATGG-3'；
d、金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构的组装
10yL金纳米棒偶联PSA适配体溶液7500rpm离心1min，除去上清，10yL量子点-PSACS溶液用截留分子量30kD的超滤管过滤，最后两种溶液混合于10yL含有50mM NaCU50mMMg(NO3)2和0.01% SDS的I XTBE缓冲液中，杂交WhJOOOrpm离心15min，除去上清，用超纯水重悬，得到高产率的金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构组装体(如图1所示)。
[0019](2)荧光光谱检测，建立金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构组装体的荧光信号与PSA浓度之间的标准曲线，根据PSA浓度与荧光信号强度的关系建立两者之间的标准曲线，从而应用荧光信号对PSA进行检测。
[0020]荧光光谱检测具体如下:在金纳米棒偶联PSA适配体和量子点-PSA CS混合于100μL含有50mM NaCU50mM Mg(NO3)2和0.01% SDS的I XTBE缓冲液时，分别加入不同浓度的目标物PSA，室温孵育12h，由于PSA会与PSA aptamer反应，随着PSA浓度的增加，金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构组装体会有不同程度的解离，因此得到不同的荧光信号强度。荧光光谱图的变化如图2所示。
[0021]在600nm的激发波长下，根据PSA浓度与荧光信号强度的关系建立两者之间的标准曲线，从而应用荧光信号对PSA进行检测。荧光光谱检测PSA的标准曲线图如图3所示。
【主权项】
1.一种基于金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构组装体荧光信号超灵敏检测PSA的方法，其特征在于:将偶联有PSA适配体的金纳米棒和偶联有与PSA适配体部分互补序列的羧基化的量子点，组装得到金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构组装体，当存在待测物PSA时，组装体的结构发生改变，量子点从组装体上解离，进而引起荧光信号的改变实现对PSA的检测;具体步骤如下: (1)检测传感器的构建: a、金纳米棒上修饰PSA适配体:采用晶种生长法合成的金纳米棒，将其离心浓缩2.5倍后，重悬于超纯水中；取10yL浓缩后的金纳米棒，向溶液中加入SH-PEG-COOH，使得SH-PEG-COOH与金纳米棒的摩尔比为20:1，充分混合后，加入5yL 50μΜ巯基化的PSA适配体，和终浓度为50mM的NaCl溶液，37°C孵育过夜，得到偶联了PSA适配体的金纳米棒溶液，待用； PSA适配体序列如下: PSA-aptamer:5’-SH-ATTAAAGCTC GCCATCAAAT AGC-3’； b、量子点偶联PSA适配体部分互补序列PSACS:取CdSeOZnS量子点用超纯水稀释200倍使终浓度为40mM;按EDC、NHS和CdSeOZnS量子点的摩尔比为1000:1000:1，加入EDC和NHS，在避光的情况下反应2h;之后，用截留量30kD的超滤管过滤，pH为7.5、1mM的PB缓冲液重悬；向其中加入终浓度2μΜ的PSA CS，反应3h，得到量子点-PSA CS溶液，待用； PSA CS序列如下: PSA-complementary sequence:5’-NH2-TTTTTTGCTA TTTGATGG-3’； c、金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构的组装:100yL金纳米棒偶联PSA适配体溶液7500rpm离心1min，除去上清，10yL量子点-PSA CS溶液用截留分子量为30kD的超滤管过滤，最后两种溶液混合于10yL含有50mM NaCU50mM Mg(NO3)2和0.01% SDS的I XTBE缓冲液中，杂交12h; 3000rpm离心15min，除去上清，用超纯水重悬，得到高产率的金纳米棒核_量子点卫星状纳米结构组装体； (2)荧光光谱检测:建立金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构组装体荧光信号与PSA浓度的标准曲线，根据PSA浓度与荧光信号强度的关系建立两者之间的标准曲线，从而应用荧光信号对PSA进行检测。2.根据权利要求1所述基于金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构组装体荧光信号超灵敏检测PSA的方法，其特征在于步骤(2)具体如下:在金纳米棒偶联PSA适配体和量子点-PSACS混合于10yL含有50mM NaCU50mM Mg(NO3)2和0.01% SDS的I XTBE缓冲液时，分别加入不同浓度的目标物PSA，室温孵育12h，由于PSA会与PSA aptamer反应，随着PSA浓度的增加，金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构组装体会有不同程度的解离，因此得到不同的荧光信号强度;在600nm的发射波长下，根据PSA浓度与荧光信号强度的关系建立两者之间的标准曲线，从而应用荧光信号对PSA进行检测。
【专利摘要】一种基于金纳米棒核-量子点卫星状纳米结构组装体荧光信号超灵敏检测PSA的方法，属于分析化学技术领域。本发明包括金纳米棒的合成，金纳米棒与PSA适配体的偶联，量子点与PSA适配体部分互补序列的偶联，以及金纳米棒-量子点卫星状纳米结构的组装和之后的TEM和荧光信号的表征和测定。基于不同PSA浓度对组装体的解离程度不一样从而影响其荧光信号的强弱来建立PSA浓度与组装体荧光信号的关系曲线，来实现PSA定量检测。本发明通过PSA适配体与其部分互补序列进行金纳米棒和量子点的卫星状组装，利用其荧光信号从而实现对PSA浓度的超灵敏检测。
【IPC分类】G01N21/64
【公开号】CN105548108
【申请号】CN201510949033
【发明人】匡华, 高凤丽, 胥传来, 徐丽广, 马伟, 刘丽强, 吴晓玲, 宋珊珊, 胡拥明
【申请人】江南大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年12月18日