种炎症检测试剂盒，包括：
[0049] (1) 1个检测板1 (32孔）；检测板1上设置由4列8行连排检测孔2组成的矩阵 孔，矩阵孔的上方自左至右分别标记；PCT、IL6、IL8、IFN-Y，矩阵孔的下方自左至右分别标 记；1、2、3、4，矩阵孔的左边自上而下分别标记：阳性对照、阴性对照、试样1、试样2、试样3、 试样4、试样5、空白，每一竖列按照标记所示分别包被PCT抗体（列l)、IL-6抗体（列2)、 比-18抗体（列3)、IFN- Y抗体（列4);
[0050] (2) 1 管组合反应液 3 (2mU :为 HRP-PCT 抗体、HRP-IL6 抗体、HRP-IL18 抗体、 HRP-IFN-y抗体的混合液，各标记抗体的终浓度为；HRP-PCT抗体0. 2y g/ml，HRP-IL6抗体 0. 5 y g/ml，HRP-IL18 抗体 0. 3 y g/ml，HRP-IFN- Y 抗体 0. 3 y g/ml ;
[0051] (3) 1管组合阳性对照液4 (0. 5mU :各蛋白浓度；PCT: lOOOpg/ml，比-6:60pg/ ml,比-18:300pg/ml, IFN-y :260pg/ml ;
[0052] (4) 1管组合阴性对照液5 (0. 5mU :各蛋白浓度；PCT: 500pg/ml，比-6:30pg/ ml,比-18:150pg/ml, IFN-y :130pg/ml ;
[0053] 巧）1瓶样品稀释液6 (20ml) ;0. 4%巧樣酸H轴的PBS缓冲液；
[0054] 化）1管显色液7 (4ml) ;TMB溶液；
[005引 （7) 1瓶洗涂液8 (100ml) ;0. 1 %吐温20的PBS溶液。
[0056] 实施例2
[0057] -种实施例1中检测板的制备方法，包括如下步骤：
[005引 （1)按图2所示制模，用透明聚丙帰塑料压模制得，检测板1含有32个检测孔2， 由4组连排的8孔条组成，矩阵孔的上方自左至右分别标记；PCT、IL6、IL8、IFN-Y，矩阵孔 的下方自左至右分别标记；1、2、3、4,矩阵孔的左边自上而下分别标记；阳性对照、阴性对 照、试样1、试样2、试样3、试样4、试样5、空白；
[005引 似制备抗PCT、比-6、比-18及IFN-y4蛋白的抗体，用0. 1M，抑=8的Tris缓 冲液分别将4个蛋白的特异抗体配制成浓度为1 y g/ml抗体包被液；
[0060] 做在步骤（1)制得的检测板1中标记有PCT、IL6、IL8、IFN- Y的各列检测孔2 内分别添加100 y 1上述抗体包被液：PCT抗体（列1)、IL-6抗体（列2)、比-18抗体（列 3)、IFN- Y抗体（列4)，在室温下赔育化后，倒空板，用PBS冲洗所有板孔3次，然后， 在各孔内添加200 y 1的2% BSA-PBS封闭液，在室温下赔育4h，用PBS冲洗各孔3次，然 后，在45C下干燥，将该检测板抽真空密封于铅袋内，储存在低温干燥冰箱备用。
[00川 实施例3
[0062] 一种实施例1中组合反应液的制备方法，包括如下步骤：
[0063] (1)将邸C、HRP、PCT单克隆抗体按摩尔数20 ; 1 ; 1溶解于PBS缓冲液，并在室温反 应化；
[0064] (2)通过透析去除游离的邸C，进一步通过HPLC纯化获得高纯度的HRP-PCT抗体 偶联物；
[0065] (3)同法，分别制备 HRP-IL6 抗体、HRP-IL18 抗体、HRP-IFN- y 抗体；
[0066] (4)取10ml含有1 % BSA的PBS溶液，逐个加入HRP-PCT抗体2 y g，HRP-IL6抗体 5 y g，HRP-IL18抗体3 y g，HRP-IFN- Y抗体3 y g，充分混匀便得组合反应液，其中各标记抗 体的终浓度为；HRP-PCT 抗体 0. 2 y g/ml，HRP-IL6 抗体 0. 5 y g/ml，HRP-IL18 抗体 0. 3 y g/ ml, HRP-IFN- y 抗体 0. 3 y g/ml ;
[0067] (5)将组合反应液按2ml/管，分装后低温储存备用。
[0068] 实施例4
[0069] 一种实施例1中组合阳性对照液的制备方法，包括如下步骤：
[0070] 选用纯化的并经准确定量的4个蛋白；PCT、比-6、IL-18、IFN-Y，按下述各蛋白 浓度用含有1 % BSA的PBS溶液溶解配制而成，各蛋白浓度；PCT lOOOpg/ml，比-660pg/ ml,比-18300pg/ml，IFN- Y 26化g/ml，将组合阳性对照液按0. 5ml/管，分装后低温储存备 用。
[00川 实施例5
[0072] -种实施例1中组合阴性对照液的制备方法，包括如下步骤：
[0073] 选用纯化的并经准确定量的4个蛋白；PCT、比-6、比-18、IFN-Y，按下述各蛋 白浓度用含有1% BSA的PBS溶液溶解配制而成，各蛋白浓度；PCT 500pg/ml，比-630pg/ ml,比-18150pg/ml，IFN- Y 130pg/ml，将组合阴性对照液按0. 5ml/管，分装后低温储存备 用。
[0074] 实施例6
[00巧]一种实施例1中样品稀释液的制备方法，包括如下步骤：
[0076] 将0. 4g巧樣酸H轴溶解于100ml的PBS缓冲液，调抑值至7. 4,将样品稀释液按 20ml/瓶，分装后低温储存备用。
[0077] 实施例7
[0078] -种实施例1中显色液的制备方法，包括如下步骤：
[0079] 取TMB(3,3'，5,5'-四甲基联苯胺）20mg，与100ml的10mM(pH = 4)巧樣酸缓冲 液混合，再加入3 %过氧化氨溶液1ml，充分混匀后，按4ml/管分装后避光低温储存备用。
[0080] 实施例8
[0081] 一种实施例1中洗涂液的制备方法，包括如下步骤：
[0082] 取PBS溶液1L，加入1ml吐温20 (Tween20)，充分混匀后按100ml/瓶分装后低温 储存备用。
[0083] 实施例9
[0084] -种炎症检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
[0085] 取上述实施例2制备的1个检测板1 (32孔）、实施例3制备的1管组合反应液 3 (2ml)、实施例4制备的1管组合阳性对照液4 (0. 5ml)、实施例5制备的1管组合阴性对照 液5 (0. 5ml)、实施例6制备的1瓶样品稀释液6 (20ml)、实施例7制备的1管显色液7 (4ml) 及实施例8制备的1瓶洗涂液8 (100ml)，合装于一个盒子内，便得炎症检测试剂盒。
[0086] 实施例10
[0087] -种炎症检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
[008引 （1)取实施例9所述的炎症检测试剂盒一套，取出检测板1及各试剂；
[0089] (2)试样稀释：取6个试验管，每管分别加样品稀释液0. 5ml，标注SI，S2, S3, S4， S5, So,分别在 Sl，S2, S3, S4, S5 中加入 0. 5ml 的试样血液（或血清）#1、#2、#3、#4、#5, So 管不加试样（仅稀释液），混匀备用；
[0090] (3)加样反应：在检测板的各检测孔中，按表1所示，在标有试样1至试样5的各行 中分别加入50y 1稀释的试样81、52、53、54、55，在标有空白的行中分别加入5〇1118〇(仅 稀释液），在标有阳性对照行中，分别加入50 y 1组合阳性对照液，在标有阴性对照行中，分 别加入50 y 1组合阴性对照液，再在所有检测孔中加入组合反应液，每孔50 y 1，轻晃混匀， 在室温下赔育30min ;
[0091] 表1，检测板的各检测孔加样情况
[0092]
[0093]
【主权项】
1. 一种炎症指标检测板，其特征在于：检测板上设置由4列8行连排检测孔组成的矩 阵孔，矩阵孔的上方自左至右分别标记有；PCT、IL6、IL8、IFN-Y，矩阵孔的左边自上而下分 别标记有：阳性对照、阴性对照、试样1、试样2、试样3、试样4、试样5、空白，矩阵孔自左至 右纵列是分别经过PCT、IL6、IL18、IFN- Y 4种指标蛋白或其抗体包被过的。
2. -种炎症检测试剂盒，其特征在于；包括权利要求1所述的检测板、装有组合反应液 的试剂管、装有组合阳性对照液的试剂管、装有组合阴性对照液的试剂管。
3. 根据权利要求2所述的一种炎症检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括装 有样品稀释液的试剂瓶、装有显色液的试剂管及装有洗涂液的试剂瓶。
【专利摘要】本实用新型提供一种炎症指标检测板及炎症检测试剂盒，包括检测板、装有组合反应液的试剂管、装有组合蛋白的标准品的试剂管，所述检测板设有矩阵分布的检测孔，检测孔分别经过PCT、IL6、IL18、IFN-γ中的2-4种不同的检测指标蛋白或蛋白的抗体包被，每一纵列孔内包被一种相同的蛋白或抗体，不同纵列孔内包被的蛋白或抗体不同，所述组合反应液是含有2-4种能与上述检测指标蛋白结合的预标记蛋白的混合液，所述组合蛋白的标准品为已知浓度的或经梯度稀释的上述2-4种检测指标蛋白的混合液。本实用新型的一种炎症检测试剂盒，不仅适合于检测是否有炎症，还能帮助分析炎症类型，有助于疾病的早期发现和诊断。
【IPC分类】G01N33-68
【公开号】CN204287197
【申请号】CN201420577186
【发明人】邹潮
【申请人】哈德逊（天津）生物技术有限责任公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年10月8日