一种铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明公开了一种铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体的制备方法，属于药剂领域。
【背景技术】
[0002]冬凌草是一种唇型科香茶菜属的草本植物，其茎和叶可以作为药用。该植物广泛分布在黄河流域以南省区，其中河南济源是该植物主要产地。冬凌草具有清热解毒、消炎止痛，健胃活血及其抗肿瘤的功效。
[0003]冬凌草甲素，别名冬凌草素、延命草宁，是冬凌草的主要有效成分。冬凌草甲素属7，20-环氧型对映-贝壳杉烷类二萜化合物，为淡黄色针状结晶，味道极苦，微溶于水，可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂，现代药理学、毒理学研究表明，冬凌草甲素对多种肿瘤细胞有明显抑制或杀伤作用，能增强免疫，抗氧化、抗菌、抗炎、抗突变且毒副作用较小。由于冬凌草甲素不溶于水，吸收率低，体内生物半衰期短，限制了冬凌草甲素的临床应用。制备冬凌草甲素合适的制剂，提高其生物利用度是药剂学工作者亟待解决的问题。
【发明内容】
[0004]本发明主要解决的技术问题:针对目前冬凌草甲素不溶于水，吸收率低，体内生物半衰期短，限制了冬凌草甲素的临床应用的问题，提供了一种铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体的制备方法，本发明先制备出冬凌草甲素脂质体悬浊液，再从猪血中提取铁蛋白，混合后加入有机溶剂，减压蒸发得透明脂，加入磷酸盐缓冲液后经过摇床振荡、超声处理、冷冻干燥即可，本发明制得的产品粒径小，在水中的溶解度和溶解速度得到提高，吸收率高，具有生物膜黏附性，可延长药物在体内的作用时间，而且药物分布均匀，防止局部浓度过高而造成的局部刺激，临床主要用于治疗肝癌、食道癌、白血病等。
[0005]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:
(1)称取100?200g冬凌草茎和100?200g冬凌草叶，将其斩碎，按固液比1:10 加入无水乙醇进行回流提取2?3h，提取2?3次后将提取液合并，在0.08?0.09MPa压力下将提取液减压蒸馏至原体积的5?8%，得浓缩液；
(2)将上述制备得到的浓缩液中分别加入3?5g卵磷脂、0.5?0.9g胆固醇和 150?20011^无水乙醇，再加入500?6001111^!1为7.3磷酸盐缓冲溶液，混合均匀后，在50
?60 °C下进行减压浓缩至原体积1/10，浓缩后用高速剪切机在8000?10000r/min转速下预分散处理15?20min，处理后再用高压均质机分别在200bar和400bar压力下均质3?5次，在100bar压力下均质10?15次，得到冬凌草甲素脂质体混悬液，并加入混悬液质量3?4%葡萄糖作为冻干保护剂，摇晃溶解后得冬凌草甲素脂质体悬浊液；
(3)量取500?600mL新鲜的猪血，向猪血中加入总质量0.5?0.8%梓檬酸钠抗
凝剂，离心分离后取上清液，将上清液与浓度为0.lmol/L碳酸铵溶液混合至混合液pH为7.0?7.4，混合后边搅拌边滴加10?20mL浓度为0.lmol/L氯化铁溶液，在O?4°C下继续搅拌2?3h，将搅拌后得到的血清样品置于冰箱中在O?4°C下冰箱保存10?12h; (4)向上述保存后的血清样品在搅拌的条件下缓慢加入硫酸铵固体，混合至pH 为6.5?7.0，搅拌20min后离心分离得上清液；
(5)量取10?20mL上述上清液和步骤(2)的冬凌草甲素脂质体悬浊液按体积
1: 20混合并置于梨形瓶中，向瓶中加入总体积I?2倍的乙酸乙酯，在35?45°C下减压蒸发得到透明脂；
(6)量取150?200mLpH7.5磷酸盐缓冲液加入梨形瓶中，放入37°C恒温空气
浴摇床中，在1800?2200r/min转速下振荡2?3h，振荡后再在120?150W下超声处理15?20min，得到铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体溶液，将其分装于西林瓶中，冷冻干燥得到粉末，并置于O?4°C冰箱中保存即可。
[0006]本发明的应用的方法:本发明制得的产品能增强免疫，抗氧化、抗菌、抗炎、抗突变等多种作用，临床主要用于治疗肝癌、食道癌、白血病等，现代药理学、毒理学研究表明，对多种肿瘤细胞有明显抑制或杀伤作用。
[0007]本发明的有益效果是:
(1)本发明制得的产品粒径小，在水中的溶解度和溶解速度得到提高，吸收率高；
(2)本发明制得的产品具有生物膜黏附性，可延长药物在体内的作用时间，而且药物分布均匀，防止局部浓度过高而造成的局部刺激。
【具体实施方式】
[0008]首先称取100?200g冬凌草茎和100?200g冬凌草叶，将其斩碎，按固液比1:10 加入无水乙醇进行回流提取2?3h，提取2?3次后将提取液合并，在0.08?0.09MPa压力下将提取液减压蒸馏至原体积的5?8%，得浓缩液;将制备得到的浓缩液中分别加入3?5g卵磷脂、0.5?0.9g胆固醇和150?200mL无水乙醇，再加入500?600mLpH为7.3磷酸盐缓冲溶液，混合均匀后，在50?600C下进行减压浓缩至原体积1/10，浓缩后用高速剪切机在8000?10000r/min转速下预分散处理15?20min，处理后再用高压均质机分别在200bar和400bar压力下均质3?5次，在100bar压力下均质10?15次，得到冬凌草甲素脂质体混悬液，并加入混悬液质量3?4%葡萄糖作为冻干保护剂，摇晃溶解后得冬凌草甲素脂质体悬浊液;量取500?600mL新鲜的猪血，向猪血中加入总质量0.5?0.8%柠檬酸钠抗凝剂，离心分离后取上清液，将上清液与浓度为0.lmol/L碳酸铵溶液混合至混合液pH为7.0?7.4，混合后边搅拌边滴加10?20mL浓度为0.lmol/L氯化铁溶液，在O?4°C下继续搅拌2?3h，将搅拌后得到的血清样品置于冰箱中在O?4°C下冰箱保存10?12h;向保存后的血清样品在搅拌的条件下缓慢加入硫酸铵固体，混合至pH为6.5?7.0，搅拌20min后离心分离得上清液;量取10?20mL上清液和冬凌草甲素脂质体悬浊液按体积1:20混合并置于梨形瓶中，向瓶中加入总体积I?2倍的乙酸乙酯，在35?45°C下减压蒸发得到透明脂;量取150?200mLpH7.5磷酸盐缓冲液加入梨形瓶中，放入37°C恒温空气浴摇床中，在1800?2200r/min转速下振荡2?3h，振荡后再在120?150W下超声处理15?20min，得到铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体溶液，将其分装于西林瓶中，冷冻干燥得到粉末，并置于O?4°C冰箱中保存即可。
[0009]实例I
首先称取10g冬凌草茎和10g冬凌草叶，将其斩碎，按固液比1:10加入无水乙醇进行回流提取2h，提取2次后将提取液合并，在0.0SMPa压力下将提取液减压蒸馏至原体积的5%，得浓缩液;将制备得到的浓缩液中分别加入3g卵磷脂、0.5g胆固醇和150mL无水乙醇，再加入500mLpH为7.3磷酸盐缓冲溶液，混合均匀后，在50 °C下进行减压浓缩至原体积1/10，浓缩后用高速剪切机在8000r/min转速下预分散处理15min，处理后再用高压均质机分别在200bar和400bar压力下均质3次，在I OOObar压力下均质1次，得到冬凌草甲素脂质体混悬液，并加入混悬液质量3%葡萄糖作为冻干保护剂，摇晃溶解后得冬凌草甲素脂质体悬浊液；量取500mL新鲜的猪血，向猪血中加入总质量0.5%梓檬酸钠抗凝剂，离心分离后取上清液，将上清液与浓度为0.lmol/L碳酸铵溶液混合至混合液pH为7.0，混合后边搅拌边滴加1mL浓度为0.lmol/L氯化铁溶液，在(TC下继续搅拌2h，将搅拌后得到的血清样品置于冰箱中在(TC下冰箱保存1h;向保存后的血清样品在搅拌的条件下缓慢加入硫酸铵固体，混合至pH为6.5，搅拌20min后离心分离得上清液;量取1