mL上清液和冬凌草甲素脂质体悬浊液按体积1:20混合并置于梨形瓶中，向瓶中加入总体积I倍的乙酸乙酯，在35°C下减压蒸发得到透明脂;量取150mLpH7.5磷酸盐缓冲液加入梨形瓶中，放入37°C恒温空气浴摇床中，在1800r/min转速下振荡2h，振荡后再在120W下超声处理15min，得到铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体溶液，将其分装于西林瓶中，冷冻干燥得到粉末，并置于0°C冰箱中保存即可。
[0010]本发明制得的产品能增强免疫，抗氧化、抗菌、抗炎、抗突变等多种作用，临床主要用于治疗肝癌、食道癌、白血病等，现代药理学、毒理学研究表明，对多种肿瘤细胞有明显抑制或杀伤作用。
[0011]实例2
首先称取150g冬凌草茎和150g冬凌草叶，将其斩碎，按固液比1:10加入无水乙醇进行回流提取2.5h，提取2次后将提取液合并，在0.085MPa压力下将提取液减压蒸馏至原体积的6%，得浓缩液;将制备得到的浓缩液中分别加入4g卵磷脂、0.7g胆固醇和175mL无水乙醇，再加入550mLpH为7.3磷酸盐缓冲溶液，混合均匀后，在55 °C下进行减压浓缩至原体积1/10，浓缩后用高速剪切机在9000r/min转速下预分散处理17min，处理后再用高压均质机分别在200bar和400bar压力下均质4次，在I OOObar压力下均质13次，得到冬凌草甲素脂质体混悬液，并加入混悬液质量3.5%葡萄糖作为冻干保护剂，摇晃溶解后得冬凌草甲素脂质体悬浊液;量取550mL新鲜的猪血，向猪血中加入总质量0.6%梓檬酸钠抗凝剂，离心分离后取上清液，将上清液与浓度为0.lmol/L碳酸铵溶液混合至混合液pH为7.2，混合后边搅拌边滴加15mL浓度为0.lmol/L氯化铁溶液，在2°C下继续搅拌2.5h，将搅拌后得到的血清样品置于冰箱中在2°C下冰箱保存Ilh;向保存后的血清样品在搅拌的条件下缓慢加入硫酸铵固体，混合至pH为6.7，搅拌20min后离心分离得上清液;量取15mL上清液和冬凌草甲素脂质体悬浊液按体积I: 20混合并置于梨形瓶中，向瓶中加入总体积1.5倍的乙酸乙酯，在40°C下减压蒸发得到透明脂;量取175mLpH7.5磷酸盐缓冲液加入梨形瓶中，放入37°C恒温空气浴摇床中，在2000r/min转速下振荡2.5h，振荡后再在135W下超声处理17min，得到铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体溶液，将其分装于西林瓶中，冷冻干燥得到粉末，并置于2°C冰箱中保存即可。
[0012]本发明制得的产品能增强免疫，抗氧化、抗菌、抗炎、抗突变等多种作用，临床主要用于治疗肝癌、食道癌、白血病等，现代药理学、毒理学研究表明，对多种肿瘤细胞有明显抑制或杀伤作用。
[0013]实例3
首先称取200g冬凌草茎和200g冬凌草叶，将其斩碎，按固液比1:10加入无水乙醇进行回流提取3h，提取3次后将提取液合并，在0.09MPa压力下将提取液减压蒸馏至原体积的8%，得浓缩液;将制备得到的浓缩液中分别加入5g卵磷脂、0.9g胆固醇和200mL无水乙醇，再加入600mLpH为7.3磷酸盐缓冲溶液，混合均匀后，在60 °C下进行减压浓缩至原体积1/10，浓缩后用高速剪切机在10000r/min转速下预分散处理20min，处理后再用高压均质机分别在200bar和400bar压力下均质5次，在I OOObar压力下均质15次，得到冬凌草甲素脂质体混悬液，并加入混悬液质量4%葡萄糖作为冻干保护剂，摇晃溶解后得冬凌草甲素脂质体悬浊液；量取600mL新鲜的猪血，向猪血中加入总质量0.8%梓檬酸钠抗凝剂，离心分离后取上清液，将上清液与浓度为0.lmol/L碳酸铵溶液混合至混合液pH为7.4，混合后边搅拌边滴加20mL浓度为0.lmol/L氯化铁溶液，在4°C下继续搅拌3h，将搅拌后得到的血清样品置于冰箱中在4°C下冰箱保存12h;向保存后的血清样品在搅拌的条件下缓慢加入硫酸铵固体，混合至pH为7.0，搅拌20min后离心分离得上清液;量取20mL上清液和冬凌草甲素脂质体悬浊液按体积1:20混合并置于梨形瓶中，向瓶中加入总体积2倍的乙酸乙酯，在45°C下减压蒸发得到透明脂;量取200mLpH7.5磷酸盐缓冲液加入梨形瓶中，放入37 °C恒温空气浴摇床中，在2200r/min转速下振荡3h，振荡后再在150W下超声处理20min，得到铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体溶液，将其分装于西林瓶中，冷冻干燥得到粉末，并置于4°C冰箱中保存即可。
[0014]本发明制得的产品能增强免疫，抗氧化、抗菌、抗炎、抗突变等多种作用，临床主要用于治疗肝癌、食道癌、白血病等，现代药理学、毒理学研究表明，对多种肿瘤细胞有明显抑制或杀伤作用。
【主权项】
1.一种铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体的制备方法，其特征在于具体制备步骤为: (1)称取100?200g冬凌草茎和100?200g冬凌草叶，将其斩碎，按固液比1:10加入无水乙醇进行回流提取2?3h，提取2?3次后将提取液合并，在0.08?0.09MPa压力下将提取液减压蒸馏至原体积的5?8%，得浓缩液； (2)将上述制备得到的浓缩液中分别加入3?5g卵磷脂、0.5?0.9g胆固醇和150?200mL无水乙醇，再加入500?600mLpH为7.3磷酸盐缓冲溶液，混合均匀后，在50?60°(:下进行减压浓缩至原体积1/10，浓缩后用高速剪切机在8000?10000r/min转速下预分散处理15?20min，处理后再用高压均质机分别在200bar和400bar压力下均质3?5次，在100bar压力下均质10?15次，得到冬凌草甲素脂质体混悬液，并加入混悬液质量3?4%葡萄糖作为冻干保护剂，摇晃溶解后得冬凌草甲素脂质体悬浊液； (3)量取500?600mL新鲜的猪血，向猪血中加入总质量0.5?0.8%柠檬酸钠抗凝剂，离心分离后取上清液，将上清液与浓度为0.lmol/L碳酸铵溶液混合至混合液pH为7.0?7.4，混合后边搅拌边滴加10?20mL浓度为0.lmol/L氯化铁溶液，在O?4°C下继续搅拌2?3h，将搅拌后得到的血清样品置于冰箱中在O?4°C下冰箱保存10?12h; (4)向上述保存后的血清样品在搅拌的条件下缓慢加入硫酸铵固体，混合至pH为6.5?.7.0，搅拌20min后离心分离得上清液； (5)量取10?20mL上述上清液和步骤(2)的冬凌草甲素脂质体悬浊液按体积1:20混合并置于梨形瓶中，向瓶中加入总体积I?2倍的乙酸乙酯，在35?45°C下减压蒸发得到透明月旨; (6)量取150?200mLpH7.5磷酸盐缓冲液加入梨形瓶中，放入37°C恒温空气浴摇床中，在1800?2200r/min转速下振荡2?3h，振荡后再在120?150W下超声处理15?20min，得到铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体溶液，将其分装于西林瓶中，冷冻干燥得到粉末，并置于O?4°C冰箱中保存即可。
【专利摘要】本发明公开了一种铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体的制备方法，属于药剂领域。本发明先制备出冬凌草甲素脂质体悬浊液，再从猪血中提取铁蛋白，混合后加入有机溶剂，减压蒸发得透明脂，加入磷酸盐缓冲液后经过摇床振荡、超声处理、冷冻干燥即可，本发明制得的产品粒径小，在水中的溶解度和溶解速度得到提高，吸收率高，具有生物膜黏附性，可延长药物在体内的作用时间，而且药物分布均匀，防止局部浓度过高而造成的局部刺激，临床主要用于治疗肝癌、食道癌、白血病等。
【IPC分类】A61K9/127, A61P35/00, A61K36/53, A61K31/352, A61P35/02, A61K47/42
【公开号】CN105581980
【申请号】CN201610155465
【发明人】张静, 王志慧
【申请人】张静
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2016年3月18日