专利名称：粗状女贞培养基及组培成苗快繁方法
技术领域：
本发明属于植物离休繁殖成苗技术领域，特别涉及一种粗状女贞培养基及组培成苗快繁方法。
背景技术：
粗状女贞即贵州小叶苦丁茶，其芽叶经加工后是一种药茶两用饮品，具有保健、生津止渴和消炎杀菌等功效。它市场前景广阔，因此其种植区域和面积逐年不断增加。粗状女贞的育苗以往主要采用传统的扦插方式，其苗成活率一般在35％，最高为60％，且出苗时间长达1年之久，成本高。
“野生苦丁茶扦插方法”(CN1141115A，1997年1月29日公开)是取野生苦丁茶枝条作插条进行无性有土扦插繁殖，它成苗时间需1年，占地面积大，且严重地破坏生态资源。《实用植物组织培养技术教程》(刘国民著，甘肃科学技术出版社1996年11月出版)所述，将大叶冬青(苦丁茶)枝条切成3～4CM茎段，经无菌处理后切成带有一个腋芽的茎段进行初代培养，其组培继代时间需40日。它系无根苗繁殖，因此需在特定的培养基内诱根25日才能成苗，故需大量设备和占用大量的实验室面积，工作量大，时间长，成本高，其苗成活率低，较难推广。
实施上述方法需大量枝条材料，故严重地破坏生态资源。因此，有限的野生资源和常规的无性枝条扦插方法已严重地制约了苦丁茶的规模性生产，事实足以说明传统的苦丁茶扦插育苗方法已经不能满足现有生产发展的需求。
发明内容
本发明针对综上所述的苦丁茶成苗繁殖方法所存在的问题，提供一种能大量节省自然资源，确保生态环境，缩短育苗周期，出苗成活率高，成本低，适宜工厂化生产的粗状女贞培养基及组培成苗快繁方法。
本发明的粗状女贞培养基包括粗状女贞基本培养基(简称CBM基本培养基)、粗状女贞胚发芽培养基、粗状女贞芽增值培养基、粗状女贞生根培养基。在LMC基本培养基内掺入15％蔗糖和0.8％琼脂配制成CBM粗状女贞基本培养基。再分别以CBM粗状女贞基本培养基为原料分别掺入BA 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、GA 0.1mg/L配制成粗状女贞胚发芽培养基。掺入BA 0.4mg/L、NAA 0.02mg/L、GA 0.1mg/L配制成粗状女贞芽增值培养基。掺入NAA 0.1mg/L配制成粗状女贞生根培养基。
本发明的粗状女贞组培成苗快繁方法，是将粗状女贞种子经无菌处理后剥离出种子的胚芽置于粗状女贞胚发芽培养基内进行繁殖培养，经38～42日形成初代繁殖源的种子苗。将种子苗顶端部分转接于粗状女贞芽增值培养基内繁殖培养18～22日，再将剪切的茎切段和顶芽段转接于新鲜粗状女贞芽增值培养基内，经28～32日即完成初代繁殖培养获取母本苗。将母本苗的嫩茎段剪切转接于粗状女贞生根培养基内进行28～32日继代繁殖培养，再经炼苗3～5日即可进入大棚移栽，其出苗成活率达85％以上。
本发明采用粗状女贞种子胚芽离体繁殖，诱导胚芽成苗，既长苗又生根，其繁殖成苗周期短，成活率高，成本低。若增大种子胚芽繁殖培养，一次性获得种子苗，增大母本苗基数，适宜工厂化生产，达到既能缓解现有粗状女贞苗木紧缺状况，又能使野生苦丁茶资源得到有效保护的目的，其经济、社会效益明显，有利于推广。
具体实施例方式
本发明的粗状女贞培养基包括粗状女贞基本培养基、粗状女贞胚发芽培养基，粗状女贞芽增值培养基、粗状女贞生根培养基。粗状女贞基本培养基(简称CBM)，采用国际通用的LMC基本培养基的化学成分为原料，经掺入15％的蔗糖、0.8％的琼脂配制而成。再分别以CBM粗状女贞基本培养基为原料分别掺入BA 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、GA 0.1mg/L配制成粗状女贞胚发芽培养基。掺入BA 0.4mg/L、NAA 0.02mg/L、GA 0.1mg/L配制成粗状女贞芽增值培养基。掺入NAA 0.1mg/L配制成粗状女贞生根培养基。
取沙藏后的果实，剥去果皮，其种子采用300mg/kg GA浸泡24小时后用75％酒精浸泡1分钟，再用0.1％HgCl2表面灭菌10分钟，持无菌水冲洗4～6次，在无菌条件下除去胚乳，将胚芽置入粗状女贞胚发芽基内，10日后胚芽的子叶变绿长大，其胚轴伸长，20日后胚芽明显生长，40日后小苗生长至1.5CM左右，展1～2对真叶，即形成初代繁殖源的种子苗。
将粗状女贞胚发芽培养基上获取的初代繁殖源种子苗的顶端部分转接于粗状女贞芽增值培养基内培养20日，种子苗继续生长，长至展3～4对真叶，同时胚轴长根1～2根，再将种子苗剪切成含1对真叶的茎切段和顶芽段转接于新鲜的粗状女贞芽增值培养基内繁殖培养30日，茎切段腋芽生长2～3对真叶，同时长根1～2根，顶芽段继续生长至3～4对真叶，同时长根1～2根，即形成初代繁殖源的母本苗。
将从粗状女贞芽增值培养基内获取的初代繁殖源的母本苗剪切成含1对真叶的茎切段和顶芽段转接于粗状女贞生根培养基内进行继代繁殖培养30日，其茎切段腋芽萌发，展2～3对真叶，茎部生根2～3根，再经炼苗3日，即进入大棚移栽，其成活率高达85％以上。
权利要求
1.一种含LMC基本培养基的粗状女贞培养基，其特征在于LMC基本培养基内掺入15％的蔗糖、0.8％的琼脂配制成CBM粗状女贞基本培养基，再分别以CBM粗状女贞基本培养基为原料分别掺入BA 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、GA 0.1mg/L配制成粗状女贞胚发芽培养基，掺入BA 0.4mg/L、NAA 0.02mg/L、GA 0.1mg/L配制成粗状女贞芽增值培养基，掺入NAA 0.1mg/L配制成粗状女贞生根培养基。
2.一种粗状女贞组培成苗快繁方法，其特征在于将粗状女贞种子经无菌处理剥离出种子的胚芽置于粗状女贞胚发芽培养基内进行繁殖培养，经38～42日形成初代繁殖源的种子苗，将种子苗顶端部分转接于粗状女贞芽增值培养基内繁殖培养18～22日，再将剪切的茎切段和顶芽段转接于新鲜粗状女贞芽增值培养基内，经28～32日即完成初代繁殖培养获取母本苗，将母本苗的嫩茎段剪切转接于粗状女贞生根培养基内进行28～32日继代繁殖培养，再经炼苗3～5日即可进入大棚移栽。
全文摘要
本发明提供一种粗状女贞培养基及组培成苗快繁方法。在LMC培养基内掺入15％蔗糖、0.8％琼脂配成粗状女贞基本培养基。分别以该培养基为原料掺入BA 0.5mg、NAA 0.1mg、GA 0.1mg配成胚发芽培养基。掺入BA 0.4mg、NAA 0.02mg、GA 0.1mg配成芽增值培养基。掺入NAA 0.1mg配成生根培养基。将粗状女贞种子无菌处理后剥离出的胚芽置于胚发芽培养基，经38～42日形成种子苗。再将种子苗转接芽增值培养基，经18～22日将剪切茎段转接新鲜芽增值培养基，经28～32日完成初代繁殖。将获取苗嫩茎段剪切转接生根培养基进行31～35日继代培养。本发明诱导胚芽成苗，繁殖成苗周期短，成本低，宜工厂化生产。缓解粗状女贞苗木紧缺状况，有利于生态资源保护，适宜推广。
文档编号A01H4/00GK1448048SQ0211566
公开日2003年10月15日 申请日期2002年4月1日 优先权日2002年4月1日
发明者张华 , 张华明 申请人:张华 , 张华明