专利名称：多功能生防菌剂及其制备方法
技术领域：
本发明是一种用于防治土传病害的生物农药及其制备方法。
背景技术：
随着保护地种植面积的快速发展，土壤中植物病原菌含量逐年增多，致使病害发生越来越重。以瓜类枯萎病为例，过去一般发病率仅在10％左右，现在已上升到15％-20％，严重的地块达50％以上，甚至毁种，给农民造成极大的经济损失。目前生产上对土传病害的防治还是以化学农药为主，如氯化苦、溴甲烷及其它化学杀菌剂等处理土壤。长期频繁、大剂量地使用化学农药，使植物病原菌的抗药性逐渐提高，迫使用药量不断加大，不仅增加了防治成本，也造成环境污染，降低了果菜的食用安全性。对此，国际上早已采取措施，逐渐限制某些剧毒、高毒农药的使用。我国近年已公布了几批禁止使用的化学农药，并大力提倡研制、开发对人、畜无毒对环境无污染的生物农药。现在，世界各国都在加大生物农药的研究开发力度。目前国际上已开发注册的产品有绿粘帚霉(Gliocladium virens)黄丝曲霉(Talaromycesfavus)、荧光假单孢菌(Pseudomonas fluorescense)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)及哈氏木霉Trichodex等。我国也有一些木霉菌生物农药的专利，但真正进入大规模工业化生产品种只有山东省民丰实业有限公司生产的特立克(Trichoderma sp)可湿性粉剂。由于各种技术原因，如产品性能不稳定，有效含量低，施入土壤后不能在作物根部很快定植形成有效群体，使整体防效不佳，这在很大程度上制约了生物农药的发展。
本发明的目的是提供一种用于防治植物土传病害的多功能生防菌剂及其制备方法，克服已有技术的不足，根据土传病害的发生特点，从作物根表分离出木霉菌，加入多种矿质营养元素作为增效剂和以轻质碳酸钙为吸附剂，可提高防治效果达75％以上，增产15％以上。
本发明的技术方案内容是本发明所采用的生防菌是取自于作物根际的木霉菌，将其纯化后转移至试管斜面内作母菌剂，并在三角瓶内振荡培养为液体菌种，再经生产罐发酵制成孢子悬浮液，所采用的液体发酵培养基成分为马铃薯150-200克，葡萄糖15-20克，磷酸二氢钾1-2克，硫酸镁0.5-1克，加水至1000毫升；上述液体培养基调pH值为6-7，灭菌时间121℃下30分钟，菌种发酵用250毫升三角瓶，发酵温度28-30℃，发酵时间为3-5天；生产罐发酵温度为25-30℃，发酵时间为5-9天，制得木霉菌孢子悬浮液。
多功能生防菌剂组成成分按重量百分比为木霉菌孢子悬浮液(厚垣孢子含量1×108个/ml)15-20，轻质碳酸钙20-30，硅藻土40-53，磷酸二氢钾3-5， 硫酸钙1-2，硫酸镁0.5-1，钼酸 0.5-1，硼酸 0.1-0.4， 硫酸锌0.1-0.4，硫酸锰0.1-0.4， 硫酸亚铁 0.1-0.4；先将载体轻质碳酸钙和硅藻土按组分重量百分比混合均匀，再将木霉菌孢子悬浮液用载体充分吸附，再先后加入矿质营养元素磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钙、钼酸、硼酸、硫酸锰、硫酸亚铁、硫酸锌，充分混合均匀，制成多功能生防菌剂。
多功能生防菌剂的生产加工工艺流程见说明书附图1。
本发明的优点是从作物根表分离的拮抗菌株木霉菌(Trichodermaharzianum)是土壤腐生菌，施用后，可在作物根表迅速定植，通过与病原菌竞争养分及重寄生作用在短时间内造成病原菌菌丝体崩解。其厚垣孢子具有抵抗高温、干燥及营养缺乏等不良环境的能力，通过人工培养后又放归于自然，并使之在自然微生物区系中进一步繁衍，形成有益微生物在土壤中的良性循环，有利于保持根际微生态的自然平衡，达到对病害的持续控制，对作物无残留，对环境无污染，对人畜安全。
本发明利用作物、病源菌和木霉菌对不同营养元素的生理反应差异，加入适量的营养元素作为增效因子，这些矿质营养元素都是植物生长所必须的，一方面可提高植物抗性，强化生防效果，另一方面可促进植物生长，提高产品的产量和质量，具有防病增产的双重功能。成本低，效益高，施用方便，利用本发明的制剂防治土传病害，可得到高于化学农药的防治效果。
图1是本发明的生产工艺流程示意图。
具体实施例方式
实施例1取作物根表土壤10克，加无菌水100毫升，经振荡后稀释至10000倍液，取1毫升稀释液与9毫升加入硫酸链霉素的PDA培养基(马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、水1000毫升)一起制成平板，在26℃下培养48小时，经分离获得木霉菌(Trichoderma harzianum)，经纯化后转移至试管斜面内作母菌剂。
二级菌种发酵所采用的液体发酵培养基配方为马铃薯200克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁1克、加水至000毫升。
制作方法是将马铃薯去皮后切成1厘米见方的小块，加1000毫升水煮沸30分钟，用纱布滤去马铃薯，再加水补到1000毫升，然后加入葡萄糖20克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁1克并使之完全溶化，该液体培养基调pH值为6.5，灭菌时间121℃下30分钟，菌种发酵用250毫升三角瓶，发酵温度28℃，发酵时间为5天。生产罐发酵所采用的培养基及其灭菌方法与二级菌种发酵方法相同，接菌量为5％，发酵温度为26℃，发酵时间9天。制得木霉菌孢子悬浮液。
按组分重量百分比将载体硅藻土42克和轻质碳酸钙30克混合均匀，然后将制得的木霉菌孢子悬浮液(厚垣孢子含量1×108个/ml)20毫升与载体硅藻土和轻质碳酸钙充分吸附，再与矿质营养元素磷酸二氢钾5克、硫酸钙1克、硫酸镁0.5克、钼酸1克、硼酸0.2克、硫酸锰0.1克、硫酸亚铁0.1克、硫酸锌0.1克，充分混合均匀，制成多功能生防菌剂。
将多功能生防菌剂与500-600倍营养土混合均匀，装营养钵育苗，防治蔬菜土传病害，防治效果达75％以上。
实施例2取作物根表土壤10克，加无菌水100毫升，经振荡后稀释至10000倍液，取1毫升稀释液与9毫升加入硫酸链霉素的PDA培养基(马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、水1000毫升)一起制成平板，在26℃下培养48小时，经分离获得木霉菌(Trichoderma harzianum)，经纯化后转移至试管斜面内作母菌剂。
二级菌种发酵所采用的液体发酵培养基配方为马铃薯200克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、加水至1000毫升。
制作方法是将马铃薯去皮后切成1厘米见方的小块，加1000毫升水煮沸30分钟，用纱布滤去马铃薯，加水补到1000毫升，然后加入葡萄糖20克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克并使之完全溶化，该液体培养基调pH值为7，灭菌时间121℃下30分钟，菌种发酵用250毫升三角瓶，发酵温度28℃，发酵时间为5天。生产罐发酵所采用的培养基及其灭菌方法与二级菌种发酵方法相同，接菌量为5％，发酵温度为28℃，发酵时间为7天。制得木霉菌孢子悬浮液按组分重量百分比将载体硅藻土48克和轻质碳酸钙25克混合均匀，然后将制得的木霉菌孢子悬浮液(厚垣孢子含量1×108个/ml)20克与载体硅藻土和轻质碳酸钙充分吸附，再与矿质营养元素磷酸二氢钾3.5克、硫酸镁1克、硫酸钙1克、钼酸0.6克、硼酸0.3克、硫酸锰0.2克、硫酸亚铁0.2克、硫酸锌0.2克，充分混合均匀，制成多功能生防菌剂。
将多功能生防菌剂与500-600倍营养土混合均匀，装营养钵育苗，防治瓜类土传病害，防治效果达70％以上。
实施例3取作物根表土壤10克，加无菌水100毫升，经振荡后稀释至10000倍液，取1毫升稀释液与9毫升加入硫酸链霉素的PDA培养基(马铃薯200克、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000毫升)一起制成平板，在26℃下培养48小时，经分离获得木霉菌(Trichoderma harzianum)，经纯化后转移至试管斜面内作母菌剂。
二级菌种发酵所采用的液体发酵培养基配方为马铃薯150克、葡萄糖15克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、加水至1000毫升制作方法是将马铃薯去皮后切成1厘米见方的小块，加1000毫升水煮沸30分钟，用纱布滤去马铃薯，加水补到1000毫升，然后加入葡萄糖20克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克并使之完全溶化，该液体培养基调pH值为6，灭菌时间121℃下30分钟，菌种发酵用250毫升三角瓶，发酵温度28℃，发酵时间为5天。生产罐发酵所采用的培养基及其灭菌方法与二级菌种发酵方法相同，接菌量为5％，发酵温度为30℃，发酵时间5天。
按组分重量百分比将载体硅藻土51克和轻质碳酸钙20克混合均匀，然后将制得的木霉菌孢子悬浮液(厚垣孢子含量1×108个/ml)20毫升与载体硅藻土和轻质碳酸钙充分吸附，再与矿质营养元素磷酸二氢钾4克、硫酸镁0.5克、硫酸钙2克、钼酸0.5克、硼酸0.3克、硫酸锰0.2克、硫酸亚铁0.2克、硫酸锌0.3克，充分混合均匀，制成多功能生防菌剂。
将多功能生防菌剂与500-600倍营养土混合均匀，穴施50克，防治玉米土传病害，防治效果达80％以上。
权利要求
1.一种多功能生防菌剂，其特征是所含各种成分及重量百分比如下木霉菌孢子悬浮液(厚垣孢子含量1×108个/ml)15-20，轻质碳酸钙20-30， 硅藻土40-53，磷酸二氢钾3-5， 硫酸钙1-2，硫酸镁0.5-1， 钼酸0.5-1，硼酸0.1-0.4， 硫酸锌0.1-0.4，硫酸锰0.1-0.4， 硫酸亚铁0.1-0.4；
2.一种多功能生防菌剂的制备方法，其特征是利用从作物根表分离到的木霉菌，采用液体发酵方法制得孢子悬浮液为主要成分，先将载体轻质碳酸钙和硅藻土按组分重量百分比混合均匀，再将木霉菌孢子悬浮液用载体充分吸附，再先后加入矿质营养元素磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钙、钼酸、硼酸、硫酸锰、硫酸亚铁、硫酸锌，充分混合均匀，制成；其中液体发酵所用的培养基成分为马铃薯150-200克，葡萄糖15-20克，磷酸二氢钾1-2克，硫酸镁0.5-1克，加水成1000毫升溶液。培养液的pH值为6-7，灭菌时间121℃下30分钟，发酵温度25-30℃，发酵时间为5-9天，以检测90％以上的菌丝形成厚垣孢子即可。
全文摘要
本发明是一种以作物根际土壤中分离出的木霉菌(Trichodermaharzianum)厚垣孢子为主要成分，以少量矿质营养元素为增效剂，以轻质碳酸钙及硅藻土为载体的多功能生防菌剂及其制备方法。该菌剂主要用于防治由镰孢菌、腐霉菌、轮枝菌、丝核菌等病原真菌引起的多种作物土传病害，同时具有提高植物自身抗性、增加产量的多重功能。生产周期短，防治效果稳定持久，对作物无残留，对环境无污染，对人畜安全。
文档编号A01N59/26GK1557164SQ200410021080
公开日2004年12月29日 申请日期2004年1月18日 优先权日2004年1月18日
发明者庄敬华, 陈捷, 高增贵 申请人:沈阳农业大学