专利名称：罗非鱼选择育种个体标记方法
技术领域：
本发明属于在水产养殖领域中鱼类个体标记技术，是一种在罗非鱼育 种中实现识别大数量检测每一条鱼的技术方法。
背景技术：
目前，在罗非鱼的选择育种中，通过标记可以追踪每条鱼的群体来源、 父母本、系谱、生产表现以及鱼的出厂和销售去向等情况，同时在进行与 经济性状相关的检测时，需要将不同来源的、于同一环境直至养成的罗非 鱼幼体，实现在同一养殖环境下的4全测，以便提高遗传参数估计的准确性。 中国科学研究院水生生物研究所张堂林等在鱼类标志技术的研究进展(《中 国水产科学》，2003年，第3期第6巻，246-253)研究中，提出始于19世纪 20年代的切鳍标记，将罗非鱼的左胸鳍或右胸鳍剪掉，对鱼的伤害较小， 从而对鱼体本身生长的影响较小，可以较容易的对比试验前后标记鱼与未 标记鱼的性状差别；但本方法由于受到罗非鱼鳍条数的限制以及剪掉太多 鳍条直接影响鱼的正常活动等因素的影响，难以满足大规模罗非鱼的选育 育种标记的需要；中国水产科学研究院淡水渔业研究中心董在杰等申请的 专利"一种罗非鱼个体标记的方法"(申请号:200810018667.9 )，主要是 把PIT标记芯片注射入罗非鱼体内进行个体标记；但是受PIT标记芯片大小 的影响，这种标记方法要求鱼需长到一定的规格(一般应用于鱼成体的标 记)；并且PIT标记芯片目前市场价格较高(价格 一个PIT标记芯片，国产 IO元人民币左右；国外进口约合25元人民币)，再是芯片检测需有专门的 设备，其自动检测仪价格昂贵(约1000美元)，对于大规模罗非鱼的选育育 种无疑成本太高。
发明内容
本发明的目的是在罗非鱼的选择育种中，通过标记追踪每条鱼的群 体来源、父母本、系谱、生产表现以及鱼的出厂和销售去向等情况，同时 在进行与经济性状相关的检测时，对混养的不同个体和家系进行识别，提 高遗传参数估计的准确性，同时为鱼的留种亲本提供身份标记，实现罗非鱼交配可控性，避免近交衰退。
本发明所采用的技术方法包括1、标记前的准备；2、鱼的麻醉；3、 鱼体的才示i己。
1、 标记前的准备选取胶针(小的、平的呈"工"字型)、吊牌枪和 鱼类识别标记，同时准备瓢网、毛巾、装有清水的盆子和充气的气石，并 用酒精对吊牌枪、胶针、闭环塑料标签进行消毒；
2、 鱼的麻醉罗非鱼为活体幼鱼，体重在3-5克；麻醉前，罗非鱼 必须先池养1-2天，鱼苗不能进食；麻醉剂为'Tricaine methane sulphonate (MS222 )，也可用Tricaine methane sulphate;麻醉剂的浓 度为0. 25 - 0. 45g/L，麻醉时间2 - 3min;麻醉后》文入新鲜淡水中；
3、 鱼体的标记标记时要保持鱼游泳的姿势，面向左侧；在用吊牌枪 枪针插入鱼体前，插入点定位在鱼体背部前端，用百多邦或红霉素药膏涂 抹枪针；然后将标记(标识牌或闭环塑料标签)套入到枪针上；将吊牌枪 枪针插入鱼体，针要仔细地穿透肌肉组织，不要碰到任何骨头或静脉；直 接用枪推射胶针穿过鱼体来固定标记，体外胶针留有2 4cm长，然后用百 多邦或红霉素药膏涂抹到穿针后的伤口处；调整标记使其位于一端，将标 记完的鱼放在一定浓度的聚维酮碘溶液中进行浸泡消毒。
麻醉剂最佳浓度为0. 33g/L; 酒精浓度为75%; 聚维酮碘溶液浓度为10%。
标记为标识牌或闭环塑料标签标识牌，材料为贝迪牌白色聚酯复合纸， 双层覆膜，形状为长2厘米，宽O. 8厘米，套4j"孔径为3. 0毫米左右。在白 色聚酯复合纸上打印标识码第一个标识码为英文大写字母，第2-5个为阿 拉伯数字(如0000-9999 );闭环塑料标签，材料为复合PU胶形状为 外径5mm,内径3mm，内外径中间厚度lmm，高度为3mm;带五位标识码(第一 位为英文大写字母，其余四位为阿拉伯数字)。
本发明的特点是
1、 本发明操作简单，自动化高，对鱼体的损伤程度较小，标记的保留 率90%以上，有效识别率90%以上，不会影响罗非鱼的正常活动，能够满足 大规模罗非鱼的选育育种标记的需要；
2、 本发明对鱼幼体和成体都可以标记，而且通过对标记与不标记鱼的 生长对比发现，标记对罗非鱼的生长无影响；3、所用的罗非鱼个体标记成本非常低(包括呈"工"字型的胶针、吊
牌枪和闭环塑料标签)，标记每条鱼的成本为O. 25元人民币，而且检测的鱼 只需在幼体期标记一次将终身携带，既节约了成本，也减少了多次标记对 鱼体的伤害。
图1:各类识别标记:
A:鱼类标识牌示意B:鱼类闭环塑料标签示意图； 图2:鱼类标记方法和过程
A:选取胶针、吊牌枪和闭环塑料标签；
B:将吊牌枪枪针穿透肌肉组织；
C:直接用枪推射胶针穿过鱼体来固定标记；
D:调整闭环塑料标签使其位于一端，并且立刻将标记的鱼苗安 置在有充气设备的淡水盆中。
具体实施例方式
下面通过实例结合附图对本发明4支术进4亍详细叙述
本实验是在河北省沧州临港中捷罗非鱼良种场进行的，本发明其技术 方法包4舌1、标记前的准备；2、鱼的麻醉；3、苗体的标记。
1、才示i己前的准备
1 )、标记工具的准备和消毒
选取一种小的、平的呈"工"字型适宜长度的胶针(本实验选取50腿， 型号SAGA,材料为聚乙烯)、带适宜规格枪针的吊牌枪(本实验选择型号 SAGA70L)，见附图2的A图)和闭环塑料标签(材料为复合PU胶)。同时 准备瓢网、毛巾、装有清水的盆子和充气的气石，并用浓度为75%的酒精对 吊牌枪、胶针、闭环塑料标签进行消毒。
闭环塑料标签为圓柱状，外径5mm,内径3mm，高度为3mm，外侧面带 五位标识码(第一位为英文大写字母，其余四位为阿拉伯数字(如 0001-9999 ))，见附图1的B图。
本标记也可使用标识牌(如图1的A图)材料为贝迪牌白色聚酯复合 纸，双层覆膜，形状为长2厘米，宽O. 8厘米，套针孔径为3. 0毫米左 右。在白色聚酯复合纸上打印标识码第一个标识码为英文大写字母，第2-5个为阿拉伯数字(如0001-9999 )。
2) 、罗非鱼幼鱼的选择
取活体幼鱼240条，规格为相差不大的一个罗非鱼家系，体重在5克 左右，以消除初始规格相差太大造成的影响，其中120条准备标记。在培 育水池先暂养几天， <吏试-睑鱼适应标记后生长环境。标记前对水池中暂养 的鱼停食两天。
2、 鱼的麻醉
为了减少和消除在标记过程中鱼体所受的胁迫以及由于胁迫致卩吏鱼体 过于剧烈运动造成的损伤，罗非鱼必须在标记前进行麻醉。麻醉前，罗非 鱼必须先放在池中先通气1-2天，在此过程中鱼苗不能进食。鱼的麻醉， 通常以麻醉液Tricaine methane sulphonate ( MS222 )或者Tricaine methane sulphate来麻醉罗非鱼，麻醉液0. 33g/ L为最佳浓度。麻醉后， 当鱼苗开始翻身时，鱼必须马上移出麻醉液至充气的新鲜淡水中。加长在 麻醉液中的浸泡时间可能对鱼体会产生不可恢复性的损伤，通常鱼苗在麻 醉后2-3min放入充气的新鲜淡水中，便可很快的恢复其原来的灵活性。 将麻醉好将要做标记的鱼和不做标记对比的鱼各测其体重、体长，之后对
幼鱼进ff一示i己。
3、 苗体的标记
在同一养殖环境下对鱼类准确的检测，需要鱼体本身具有一种特有的 识别。鱼体识别标记较多，包括附加物、插入物，或外部注射进鱼体(如 上述提到的PIT标记芯片等)。本方法在罗非鱼类育种技术中采用了背部穿 胶针带标记的标记法，独特地识别大数量检测鱼中的每一尾。
具体标记程序是
1)、使鱼苗保持游泳的姿势，并且面向左侧；
2 )、插入点被定位在鱼体背部前端肌肉多的地方；
3) 、在用吊牌枪枪针插入鱼体前，将百多邦(或红霉素药膏)涂^l未消 毒枪针，然后将闭环塑料标记圈套到枪针上；
4) 、将吊牌枪枪针插入鱼体，针要仔细地通过肌肉组织，不要碰到任 何骨头或静脉，见附图2的B5) 、直接将胶针穿过鱼体来固定标记，见附图2的C图，用百多邦(或 红霉素药膏)涂_|未消毒穿针后的伤口处；
6 )、体外胶针应该留有2 ~ 4cm长，以供鱼体生长。根据被期望的最大生长(即依照收获的年龄或重量确定)决定预留体外胶针的长度；
7)、调整闭环塑料标签使其位于一端，并且立刻将标记的鱼苗安置在
有充气设备的淡水盆中，见附图2的D8 )、将标记完的鱼放在浓度l(W的聚维酮碘溶液中进行浸泡消毒。
在标记后对标记和未标记各120条鱼测量其体重、体长等生长指标， 已标记与未标记鱼放置到同一池中进行培育，30天后统计标记后的各项参 数，并测量所有鱼生长性状指标。
在整个标记鱼与未标记鱼培育期间，标记鱼死亡4条，死亡率3. 33%, 标记鱼感染8条，感染率6. 67%,标记物丟失的鱼2条，丢失率1.67%。也 就说在标记120条鱼后，鱼的成活率为96. 67%,未感染所占比例为93. 33%, 标记的保持率为98.33%,有效识别率100%。标记前后平均体重、平均体长 的变化情况见表1。未标记鱼前后变化情况见表2。
表1标记鱼标记前后生长指标变化情况
平均体重(g)平均体长(cm)
标记前 5. 3363. 532
才示^己后 12.4206. 103
增加量 7. 0842. 571
表2未标记鱼前后生长指标变化情况
平均体重(g)平均体长(cm)
标记前 5. 3863. 579
标记后 12.4746. 172
增加量 7. 0882. 593
从上述两表可看出，标记鱼与未标记鱼在平均体重、平均体长等生长 性状的变化几乎无差别，从而通过对标记与不标记鱼的生长对比发现，标 记对罗非鱼的生长无影响。
权利要求
1、一种罗非鱼选择育种个体标记方法，包括1)、标记前的准备，2)、鱼的麻醉，3)、鱼体的标记；其特征在于1)、标记前的准备选取“工”字型胶针、吊牌枪和鱼类识别标记，同时准备瓢网、毛巾、盆和气石，并用浓度为75％的酒精对吊牌枪、胶针、闭环塑料标签进行消毒；2)、鱼的麻醉罗非鱼为活体幼鱼，体重在3-5克；麻醉前，罗非鱼必须先池养1-2天，鱼苗不能进食；麻醉剂为Tricaine methanesulphonate，也可用Tricaine methane sulphate；麻醉剂的浓度为0.33g/L，麻醉时间2-3min；麻醉后放入新鲜淡水中；3)、鱼体的标记标记时要保持鱼游泳的姿势，面向左侧；在用吊牌枪枪针插入鱼体前，插入点定位在鱼体背部前端，用百多邦或红霉素药膏涂抹枪针；然后将标识牌或闭环塑料标签套入到枪针上；将吊牌枪枪针插入鱼体，针要仔细地穿透肌肉组织，不要碰到任何骨头或静脉；直接用枪推射胶针穿过鱼体来固定标记，体外胶针留有2～4cm长，然后用百多邦或红霉素药膏涂抹到穿针后的伤口处；调整标记使其位于一端，将标记完的鱼放在10％的聚维酮碘溶液中进行浸泡消毒。
2、 根据权利要求1所述的一种罗非鱼选择育种个体标记方法，其特征 在于所述的标记，标记为标识牌或闭环塑料标签标识牌材料为贝迪牌白色聚酯复合纸，双层覆膜，形状为长2厘米， 宽0. 8厘米，套针孔径为3. 0毫米左右；在白色聚酯复合纸上打印标识码 第一个标识码为英文大写字母，第2-5个为阿拉伯数字；闭环塑料标签，材料为复合PU胶形状为外径5mm，内径3mm,内外 径中间厚度l醒，高度为3薩；带五位标识码第一位为英文大写字母，其 余四位为阿4立伯凄t字。
全文摘要
一种罗非鱼选择育种个体标记方法，首先选取合适的胶针、吊牌枪和闭环塑料标签等；其次以浓度为0.33g/L的Tricaine methane sulphonate来麻醉罗非鱼；然后对鱼体进行标记。标记时要保持鱼游泳的姿势，面向左侧；插入点定位在鱼体背部前端；将闭环塑料标签套入到枪针上；直接将胶针穿过鱼体来固定标记，体外胶针应该留有2～4cm长；最后将标记鱼放在10％聚维酮碘溶液中进行浸泡消毒。本发明操作简单，成本低，自动化高，对鱼体的损伤程度较小，标记的保留率90％以上，有效识别率90％以上，不会影响罗非鱼的正常活动，能够满足大规模罗非鱼的选育育种标记的需要。
文档编号A01K61/00GK101433188SQ200810238410
公开日2009年5月20日 申请日期2008年12月10日 优先权日2008年12月10日
发明者杰 孔, 张天时, 张庆文, 生 栾, 王伟继, 坤 罗 申请人:中国水产科学研究院黄海水产研究所