专利名称：一种具有诱导抗性的木霉菌株及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及ー种具有诱导抗性的木霉菌株及其应用。
背景技术：
化学农药的大量使用在保障粮食增产增收的同时，也引起了严重的环境污染。随着人们对化学农药危害认识的逐渐加强，对环境相容性好的生物农药的筛选和使用日益受到重视。木霉菌属于半知菌亚门、丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科，广泛存在于土壤、根围、叶 围、种子等生态环境中，由于木霉菌的广泛适应性、抑菌广谱性以及多机制性，本霉被普遍认为能够代替多种化学农药的生防因子。早在1932年，Weidling就发现木素木霉对立枯丝核菌等病原菌有拮抗作用，之后经多年的研究，发现该菌对18个属30多种植物病原菌具有拮抗作用，如立枯丝核菌、铼刀菌、齐整小核菌、核盘菌、疫霉菌、腐霉菌、链格孢菌、灰霉菌、毛盘菌、轮枝孢菌、黒星菌等，能有效防治由这些病原真菌引起的立枯病、黄萎病、青枯病、苹果轮纹病、灰霉病等植物病害。目前成功开发出多种木霉制剂，其中Topshield、Rootshield等土壤处理剂,可以有效地防治作物土传病害。黄瓜灰霉病是由灰葡萄孢cinerea / /^)引起的一种常见黄瓜病害，该病的发生严重影响黄瓜的产量与品质。目前，灰霉病防治主要依赖多菌灵、速克灵等化学药剂，但由于病菌抗药性迅速产生，导致农药用量不断加大，从而引起农产品和环境的严重污染。利用木霉防治黄瓜灰霉病是一种比较有效的生物防治方法，对降低化学农药的污染具有良好的作用。然而，由于木霉制剂是使用的木霉活体，用于防治灰霉病时在叶面喷施后其存活受多种环境因素的影响，致使其对防治叶面病害的效果不理想。因此，有针对性的筛选具有诱导抗性的木霉菌株，使木霉在土壌中施用达到防治叶面病害的效果，是解决目前木霉制剂存在的技术瓶颈的ー种方案。
发明内容
本发明的目的之ー在于提供ー种能够诱导黄瓜产生对灰霉病系统抗性作用的木霉菌株，本发明的目的之ニ在于提供该木霉菌株在防治黄瓜灰霉病中的应用。为达到上述目的，本发明采取的技术方案
技术方案一
一种具有诱导抗性的木霉菌株(Trichoderma amazonicum)Tr-92,于2012年5月9日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址北京市朝阳区北辰路I号2院)，保藏号为CGMCC No. 6087。技术方案ニ
所述的木霉菌株在防治黄瓜灰霉病中的应用，其是用灭菌草炭吸附所述木霉菌株的分生孢子，使其在灭菌草炭中的含量为O. IXIO9-IXiO9 cfu/g，制成木霉菌剂，将所述木霉菌剂沟施入黄瓜根部土壌，使用剂量为Ikg/亩。
本发明的木霉菌株是通过大量筛选工作筛选得到的，该菌株对黄瓜灰霉病菌具有较强的诱导抗病性；该木霉菌株的微生物菌剂原料易得，使用简单方便，可减轻黄瓜灰霉病的发病率，降低病情指数，防病效果在50%以上。
具体实施例方式以下结合优选实施例对本发明的技术方案进行详细地阐述。以下实施例仅仅用于说明和解释本发明，而不构成对本发明技术方案的限制。实施例I木霉菌株的分离
从植物病害严重的土壤中采集土壤样品，在实验室内从该土壤样品中分离出木霉菌，在PDA培养基上进行多次分离纯化，得到木霉纯培养菌落后，分别在PDA试管斜面中保存。
具体步骤上述土壤样品来自多年重茬种植、病害严重的大棚土壌，将该土壤经梯度稀释后涂布于木霉选择性培养基中，培养基的成分如下=MgSO4 ·7Η20 O. 2g/L ；Κ2ΗΡ04 0.9g/L ；KC1 0. 15 g/L ；NH4NO3 I. 0 g/L ;葡萄糖 3. 0 g/L ;氯霉素 0. 25 g/L ;敌磺钠 0. 3 g/L ；五氯硝基苯0.2 g/L;玫瑰红0.15 g/L;琼脂15 g/L，余量为水；
将分离出的木霉经多次纯化得到木霉纯培养菌株后，分别在PDA试管斜面保存。实施例2具有诱导抗性木霉菌株的筛选
具体步骤木霉菌株的培养，将筛选出的木霉菌株分别接种到PDA平板中，30°C恒温培养5天，用无菌水冲洗木霉平板得到木霉孢子悬液，用血球计数板计数并调整其浓度为106cfu/ml ;将保存的灰霉病菌接种到PDA平板，24°C恒温培养7_10天使用，用无菌水冲洗灰霉菌平板得到灰霉菌孢子悬液，用血球计数板计数并调整其浓度为106cfu/ml。挑选籽粒饱满的黄瓜种子用无菌水冲洗3次，经55°C恒温水浴浸泡15min后用湿润纱布包好放在培养皿中30°C催芽，待大部分种子出芽后挑取出芽情况一致的种子播种于装有灭菌蛭石的直径IOcm的塑料花盆中，每盆2粒种子，于20-24°C培养室(光照黑暗周期为16h :8h)进行培养，黄瓜幼苗长出5片真叶后，进行诱导处理。用无菌注射器将木霉孢子悬浮液5ml注入黄瓜植株根部土壌中，以加入5ml灭菌水的为对照。木霉诱导接种48h后，向黄瓜叶片上喷洒灰霉病菌孢子液，接种后保湿培养24h (湿度>90%)。待对照组叶面普遍发病后记录并统计病情指数，计算防病效果。计算公式如下
病情指数％ = Σ (各级病叶数X病级数)バ调查总叶数X最高病级数)X 100防病效果％ =(对照病情指数一处理病情指数)/对照病情指数X 100。比较各菌株的防病效果，效果最好的木霉菌株(标记为TR-92)为具有诱导抗性能力的木霉菌株(其防病效果见表I )，表I中木霉TR-92对灰霉病菌的防病效果为56.0%。这一结果说明，木霉TR-92施入黄瓜根部，能够诱导黄瓜幼苗叶部产生抗灰霉病的能力，从而降低了叶部灰霉病的发生。表I木霉诱导对黄瓜幼苗病情指数的影响
权利要求
1.一种具有诱导抗性的木霉菌株(7>icAoofe/maTr_92,其特征在于其保藏号为 CGMCC No. 6087。
2.权利要求I所述的木霉圃株在防治黄瓜灰霉病中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于用灭菌草炭吸附所述木霉菌株的分生孢子，使其在灭菌草炭中的含量为0. IXIO9-IXiO9 cfu/g，制成木霉菌剂，将所述木霉菌剂沟施入黄瓜根部土壤，使用剂量为Ikg/亩。
全文摘要
本发明提供了一种保藏号为CGMCCNo.6087的木霉菌株(Trichodermaamazonicum)，还提供了该木霉菌株在黄瓜灰霉病防治中的应用。本发明提供的保藏号为CGMCCNo.6087的木霉菌株对黄瓜灰霉病具有较好的诱导抗性，将该菌株制成的微生物菌剂应用在蔬菜种植环境中后，通过该木霉在土壤中的定植和繁殖，特别是在黄瓜根部中的定植，能够诱导黄瓜对灰霉病的抗病性，降低黄瓜生产过程中化学农药的施用。
文档编号A01P3/00GK102676403SQ20121017075
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月29日 优先权日2012年5月29日
发明者尹淑丽, 崔冠慧, 张丽萍, 张根伟, 李书生, 杜晓哲, 段普凡, 王淑霞, 程辉彩, 黄亚丽 申请人:河北省科学院生物研究所