专利名称：一种提高芦笋生根的培养基及培养方法
技术领域：
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及提高芦笋生根的培养基及培养方法。
背景技术：
芦笑(Asparagus officinalis L.)又名石刁柏、龙须菜,是国际公认的“蔬菜之王”。常规栽培主要采用种子繁殖，生产上采用的优良Fl代种子一直依靠国外进口，但价格昂贵。通过对芦笋优良品种进行组织培养，不但能快速繁殖植株，较好地保持良种的优良性状，而且可以培育出全雄植株，从而大幅度提高效益。然而，芦笋的雌雄异株的生物学特征，决定了其有性杂交育种和良种繁殖周期长、效率低，且芦笋的试管苗生根十分困难，极大地限制了组培效果。本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种节约成本、可有效提高芦笋生根率的组织培养方法。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种提高芦笑生根的培养基。本发明的另一个目的在于提供一种提高芦笑生根的培养方法。本发明提供的一种用于提高芦笋生根的培养基，该培养基的原料在基本培养基原料的基础上，还包括:泛酸钙0.7 1.5mg/L、生物素0.01 0.05mg/L、嘧啶醇0.05 0.15mg/L、植物生长调节物质0.05mg/L 0.5mg/L、糖源15_35g/L ;所述体积指总的培养基的体积。所述的基本培养基选自现有技术`中的植物组织培养基，包括MS培养基、White培养基、B5培养基；优选MS培养基。其中，在该发明中，MS、White、B5基本培养基为市售培养基干粉；MS培养基干粉用量为2 5g/L、B5培养基干粉用量为I 5g/L、White培养基干粉15 30g/L ;优选，MS培养基干粉用量为4.74g/L、B5培养基干粉用量为3.21g/L、White培养基干粉21.26g/L。该发明中的“g/L”为单位“克/升”的简写，解释为:配制完毕的一升培养基含有的MS干粉的重量为4.74g或者B5培养基干粉重量为3.21g或White培养基干粉21.26g ;“mg/L”为单位“毫克/升”的简写，解释为:配制完毕的一升培养基中含有嘧啶醇等物质的重量；“升”以体积为I升的量筒为标准容量。所述植物生长调节物质包括促进植物组织细胞生成类生长素或促进植物细胞分裂的细胞分裂素；所述生长素包括:NAA、ΙΑΑ、IBA，其中优选NAA或IBA，且NAA的浓度为0.05mg/L 至 0.lmg/L,优选为 0.lmg/L, IBA 浓度为 0.05mg/L 至 0.lmg/L,优选为 0.lmg/L。所述促进植物细胞分裂的细胞分裂素选自KT、6-BA。本发明中所提及的NAA、IAA、6-BA、KT、IBA均为植物组织培养技术中常用的植物生长调节物质的简称，其中，NAA全称为α-萘乙酸，IAA全称为吲哚乙酸，IBA全称为吲哚丁酸，6-ΒΑ全称为6-苄氨基腺嘌呤，KT全称为激动素。所述培养基还可添加活性炭或珍珠岩，具有更突出的促进生根率的效果，在添加活性炭时，培养基中需添加琼脂制备成固体培养基；在添加珍珠岩时，培养基中无需添加琼脂而制备成液体培养基。所述培养基中糖源优选蔗糖25g/L，也可以由其他糖类代替，例如白砂糖等。本发明的另一个目的在于提供一种提高芦笋生根的方法，该方法包括如下步骤:步骤1:将芦笋苗转入培养基I中光照培养，诱导根原基形成；步骤2:将步骤I培养的芦笋苗再转入培养基II中继续培养直至生根；所述步骤I中的培养基I的原料主要为:基本培养基、泛酸钙0.7 1.5mg/L、生物素0.01 0.05mg/L、卩密P定醇0.05 0.15mg/L、生长素0.05mg/L 0.5mg/L、糖源15-35g/L ;所述生长素包括:NAA、IAA、IBA，其中优选NAA，且NAA的浓度为0.05mg/L至0.lmg/L,优选为 0.lmg/Lo所述步骤2中的培养基II的原料主要为:基本培养基、泛酸钙0.7 1.5mg/L、生物素0.01 0.05mg/L、卩密唳醇0.05 0.15mg/L、生长素或细胞分裂素0.05mg/L 0.5mg/L、糖源15-35g/L ;其中，生长素选自NAA、IAA、IBA，细胞分裂素选自KT、6_BA，优选IBA，且IBA 浓度为 0.05mg/L 至 0.lmg/L,优选为 0.lmg/L。所述的基本培养基选自现有技术中的植物组织培养基，包括MS培养基、White培养基、B5培养基；优选MS培养基。培养基的配方参考《植物组织培养原理与技术》李胜编著。MS、White、B5基本培养基为市售培养基干粉；MS培养基干粉用量为2 5g/L、B5培养基干粉用量为I 5g/L、White培养基干粉15 30g/L ;本发明培养基1、II中所涉及“g/L”为单位“克/升”的简写，解释为:配制完毕的一升培养基含有的MS干粉的重量为4.74g或者B5培养基干粉重量为3.21g或White培养基干粉21.26g ;“mg/L”为单位“毫克/升”的简写，解释为:配制完毕的一升培养基中含有嘧啶醇等物质的重量；“升”以体积为I升的量筒为标准容量。所述培养基II还可添加活性炭或珍珠岩，具有更突出的促进生根率的效果，在添加活性炭时，培养基中需添加琼脂制备成固体培养基；在添加珍珠岩时，培养基中无需添加琼脂而制备成液体培养基，所述珍珠岩为600-950g/L，优选700-850g/L ;所述活性炭为0.2-3g/L，优选 lg/L。所述培养基1、II中糖源优选蔗糖，也可以由其他糖类代替，例如白砂糖等。进一步，所述步骤I中在培养基培养的时间不少于20天。进一步，所述步骤I中培养条件为:培养温度为26±2°C，相对湿度为70±5%，光照强度1500 20001x,光照9-12小时/天；进一步，所述步骤I中培养基PH4-6，优选5.7。进一步,所述步骤I中培养基I的组成优选:MS+泛酸I丐lmg/L+生物素0.0 lmg/L+喃唳醇 0.lmg/L+NAA0.05 0.lmg/L+ 琼脂 7g/L+ 鹿糖 25g/L。所述，步骤2培养基II的配方为:MS+泛酸钙lmg/L+生物素0.0 lmg/L+嘧啶醇0.lmg/L+IBA0.05 0.lmg/L+ 活性炭 lg/L+ 琼脂 7g/L+ 鹿糖 25g/L 或者 MS+ 泛酸|丐 Img/L+ 生物素 0.0 lmg/L+ 嘧啶醇 0.lmg/L+IBA0.05 0.lmg/L+ 珍珠岩 600_950g/L。本发明培养基，可以显著的促进根原基的形成及促进根的发育。本发明采用两步生根法，可以显著的促进根的发育。下述实验例 用于进一步证明本发明的效果，但不能理解为对本发明保护范围缩小性理解。本发明实验例、实施例中所用的MS、White、B5基础培养基干粉购于上海宇涵生物科技有限公司，植物生长调节物质NAA、IAA、KT、6-BA、IBA、泛酸钙、生物素、嘧啶醇均为美国Sigma生产，活性炭和珍珠岩购于国内公司。另外，基础培养基可以选择市售培养基干粉，也可以自行按照下述配方自行配制使用:MS培养基配方:
权利要求
1.一种用于提高芦笋生根的培养基，该培养基的原料在基本培养基原料的基础上，还包括:泛酸钙、生物素、嘧啶醇、植物生长调节物质和糖源； 所述的基本培养基选自现有技术中的植物组织培养基； 所述植物生长调节物质包括促进植物组织细胞生成类生长素或促进植物细胞分裂的细胞分裂素。
2.如权利要求1所述的培养基，其中，泛酸钙0.7 1.5mg/L、生物素0.0l 0.05mg/L、嘧啶醇0.05 0.15mg/L、植物生长调节物质0.05 0.5mg/L、糖源15 35g/L ;基本培养基选自MS培养基、White培养基或B5培养基。
3.如权利要求2所述的培养基，所述生长素选自NAA、IAA或IBA。
4.如权利要求3所述的培养基，所述促进植物细胞分裂的细胞分裂素选自KT或6-BA。
5.如权利要求2所述的培养基，所述培养基还可添加活性炭或珍珠岩。
6.如权利要求2所述的培养基，所述糖源为蔗糖，优选25g/L。
7.一种提高芦笋生根的方法，该方法包括如下步骤: 步骤1:将芦笋苗转入培养基I中光照培养，诱导根原基形成； 步骤2:将步骤I培养的芦笋苗再转入培养基II中继续培养直至生根； 所述步骤I中的培养基I的原料主要为:基本培养基、泛酸钙0.7 1.5mg/L、生物素0.01 0.05mg/L、嘧啶醇 0.05 0.15mg/L、生长素 0.05 0.5mg/L、糖源 15_35g/L ;所述生长素包括:NAA、IAA、IBA ； 所述步骤2中的培养基II的原料主要为:基本培养基、泛酸钙0.7 1.5mg/L、生物素0.01 0.05mg/L、卩密唳醇0.05 0.15mg/L、生长素或细胞分裂素0.05mg/L 0.5mg/L、糖源15-35g/L ;其中，生长素选自NAA、IAA、IBA，细胞分裂素选自KT或6-BA ; 基本培养基选自MS培养基、White培养基或B5培养基；MS培养基干粉用量为2 5g/L、B5培养基干粉用量为I 5g/L、White培养基干粉15 30g/L。
8.如权利要求7所述的方法，其中步骤2中培养基选用的生长素与步骤I中培养基选用的生长素不同。
9.如权利要求7所述的方法，所述培养基II还可添加活性炭或珍珠岩。
10.如权利要求7所述的方法，所述步骤I中培养条件为:培养温度为26±2°C，相对湿度为70±5%，光照强度1500 20001x，光照9_12小时/天。
全文摘要
本发明提供一种用于提高芦笋生根的培养方法及培养基，该培养基的原料在基本培养基原料的基础上，还包括泛酸钙、生物素、嘧啶醇、植物生长调节物质和糖源；所述的基本培养基选自现有技术中的植物组织培养基；所述植物生长调节物质包括促进植物组织细胞生成类生长素或促进植物细胞分裂的细胞分裂素。所述方法包括步骤1，将芦笋苗转入培养基Ⅰ中光照培养，诱导根原基形成；步骤2，将步骤1培养的芦笋苗再转入培养基Ⅱ中继续培养直至生根；本发明培养基可以显著的促进根原基的形成及促进根的发育，本发明采用两步生根法，可以显著的促进根的发育。
文档编号A01H4/00GK103238521SQ20131019414
公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月23日 优先权日2013年5月23日
发明者任建武, 姜英淑, 沙海峰, 米康拉·科纳福莱温斯基, 陈文静 申请人:北京林业大学