一种大黄鱼植物乳杆菌饲料配方及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种大黄鱼植物乳杆菌饲料配方及其制备方法，配方：植物乳杆菌1×106cfu/kg、菌体0.1g/kg、牛奶9.999g/kg、鱼粉540g/kg、淀粉183g/kg、鱼膏37g/kg、面筋20g/kg、鱼油20g/kg、虾壳粉64g/kg、脱脂豆粕94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg组成的喂养饲料和粗蛋白、粗脂、灰分和水分组成的基础饲料；按照质量百分比，喂养饲料为25.2％，粗蛋白47.3％、粗脂8.9％、灰分10.2％、水分8.4％。制备方法为：分离培养、收集植物乳杆菌、混合脱脂牛奶、添加基础饲料、混合配制。本发明促进了大黄鱼的体重增长率、摄食率、大黄鱼非特异性免疫性能的补体活性、溶菌酶活性、吞噬活性和头肾白细胞呼吸性，并增强对病菌抵抗力，有利于大黄鱼养殖业发展。
【专利说明】一种大黄鱼植物乳杆菌饲料配方及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于大黄鱼养殖【技术领域】，尤其涉及一种大黄鱼植物乳杆菌饲料配方及其制备方法。
【背景技术】
[0002]大黄鱼是我国独有的、经济价值很高的鱼类，是我国海水鱼类养殖中最为名贵的品种之一。近年来，大黄鱼的养殖规模由于人工育苗的成功而迅速扩大，由于过度捕捞，自然资源日益枯竭。人工育苗取得成功之后，大黄鱼的网箱规模迅速扩大。网箱养殖的不合理规划导致养殖面积和放养密度急剧加大，使得养殖水域的承载能力和水体交换自净能力遭到严重危害，鱼类病害的种类也随之增多，极大地制约着大黄鱼养殖业的健康发展。随着养殖面积和放养密度急剧加大，养殖环境遭到破坏，病害的种类也随之增多，发病次数日趋频繁，危害性迅速增大，面临着许多与营养饲料有关的问题，极大制约着大黄鱼养殖业的健康发展。例如，大黄鱼养殖常发生与病毒和细菌相关的疫情，造成严重的经济损失。同时由于当前使用的饵料系数不达标，转化为鱼类蛋白的概率低，导致饵料大量流失，对水质造成严重污染。尤其是部分养殖户违规使用禁用鱼药和劣质饲料，造成药物残留和水质大面积恶化，导致大黄鱼生长速度减缓、疾病频发，成活率下降，并且大黄鱼品质下降，食品安全没有保障，鱼的健康和其免疫力的提高对养殖业而言就尤为重要。益生菌是一类通过改善宿主动物肠道微生态而对其产生有益影响的微生物饲料添加成分，对宿主动物健康存在有益影响的微生物。益生菌类产品对动物大都具有提高动物生产性能，增进健康，改善肠道微生态，提闻免疫力等功效。
[0003]目前，传统的大黄鱼饲料存在生长速度缓慢，生病率高，免疫力和品质差，成活率低，食品安全没有保障的问题。
【发明内容】
[0004]本发明实施例的目的在于提供一种大黄鱼植物乳杆菌饲料配方及其制备方法，旨在解决目前，传统的大黄鱼饲料存在生长速度缓慢，生病率高，免疫力和品质差，成活率低，食品安全没有保障的问题。
[0005]本发明实施例是这样实现的，一种大黄鱼植物乳杆菌饲料配方，该大黄鱼植物乳杆菌饲料配方包括:植物乳杆菌I X 106cfu/kg、菌体0.lg/kg、牛奶9.999g/kg、鱼粉540g/kg、淀粉183g/kg、鱼膏37g/kg、面筋20g/kg、鱼油20g/kg、奸壳粉64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg组成的喂养饲料和粗蛋白、粗脂、灰分和水分组成的基础词料；
[0006]按照质量百分比，喂养饲料为25.2%，粗蛋白47.3 %、粗脂8.9%、灰分10.2 %、水分 8.4%。
[0007]进一步，该大黄鱼植物乳杆菌饲料配方为:植物乳杆菌I X 108cfu/kg、菌体0.1g/kg、牛奶 9.99g/kg、鱼粉 540g/kg、淀粉 183g/kg、鱼膏 37g/kg、面筋 20g/kg、鱼油 20g/kg、虫下壳粉64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3%、粗脂 8.9%、灰分 10.2%、水分 8.4%。
[0008]进一步，该大黄鱼植物乳杆菌饲料配方为:植物乳杆菌lX10lclcfu/kg、菌体IOg/kg、鱼粉 540g/kg、淀粉 183g/kg、鱼膏 37g/kg、面筋 20g/kg、鱼油 20g/kg、奸壳粉 64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3%、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分 8.4%。
[0009]本发明实施例的另一目的在于提供一种大黄鱼植物乳杆菌饲料的制备方法，该大黄鱼植物乳杆菌饲料的制备方法包括以下步骤:
[0010]从韩国腌白菜分离得到植物乳杆菌，37°C培养于含MRS肉汤的无菌烧瓶中，24小时后，15400Xg离心5分钟，收集植物乳杆菌混合物；
[0011]按1:4比例与脱脂牛奶混合，冷冻干燥，通过MRS琼脂平板记数测定植物乳杆菌混合物的生活力；
[0012]按照植物乳杆菌I X 106cfu/kg、菌体 0.001g/kg、牛奶 9.999g/kg、鱼粉 540g/kg、淀粉183g/kg、鱼膏37g/kg、面筋20g/kg、鱼油20g/kg、奸壳粉64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg配置大黄鱼喂养饲料；
[0013]加入成分为47.3%粗蛋白、8.9%粗脂、10.2%灰分和8.4%水分的基础饲料，混合制成大黄鱼植物乳杆菌饲料。
[0014]进一步，该大黄鱼植物乳杆菌饲料一天喂养大黄鱼两次。
[0015]本发明提供的大黄鱼植物乳杆菌饲料配方及其制备方法，采用含量为Kf-KTcfu/kg植物乳杆菌的配方饲料，促进了大黄鱼的体重增长率和摄食率，并增强对病菌Streptococcussp的抵抗力,促进了大黄鱼非特异性免疫性能的补体活性、溶菌酶活性、吞噬活性和头肾白细胞呼吸性。本发明有利于大黄鱼的养殖业发展。大黄鱼的植物乳杆菌饲料的制备方法简单，大黄鱼生长速度快，免疫力强，生病和死亡率低，食用安全性好。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1是本发明实施例提供的大黄鱼植物乳杆菌饲料的制备方法流程图；
[0017]图2是本发明实施例提供的大黄鱼喂食含O、I X 104、I X IO6,1 X IO8和I X IO10Cfu/kg植物乳杆菌饲料1-4周的体重增长率示意图；
[0018]图3是本发明实施例提供的大黄鱼喂食含O、I X 104、I X 106、I X IO8和I X IO10Cfu/kg植物乳杆菌饲料1-4周的喂食效率示意图；
[0019]图4是本发明实施例提供的大黄鱼喂食表一中词料四周后PCR鉴定不意图；
[0020]图5是本发明实施例提供的大黄鱼喂食含植物乳杆菌饲料1-4周的补体活性(ACH50)示意图；
[0021]图6是本发明实施例提供的大黄鱼喂食含植物乳杆菌、饲料1-4周的头肾白细胞爆发呼吸力示意图；
[0022]图7是本发明实施例提供的大黄鱼喂食含植物乳杆菌饲料1-4周的头肾白细胞吞噬活性示意图；
[0023]图8是本发明实施例提供的黄鱼喂食含植物乳杆菌饲料1-4周的血清溶菌酶活性(ACH50)示意图。【具体实施方式】
[0024]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0025]下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0026]本发明实施例的大黄鱼植物乳杆菌饲料配方:植物乳杆菌lX106cfu/kg、菌体
0.lg/kg、牛奶 9.999g/kg、鱼粉 540g/kg、淀粉 183g/kg、鱼膏 37g/kg、面筋 20g/kg、鱼油20g/kg、奸壳粉64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg组成的喂养词料和粗蛋白、粗脂、灰分和水分组成的基础词料；
[0027]按照质量百分比，喂养饲料为25.2%，粗蛋白47.3 %、粗脂8.9%、灰分10.2 %、水分 8.4%。
[0028]本发明的配方还可以为:植物乳杆菌I X 108cfu/kg、菌体0.lg/kg、牛奶9.999g/kg、鱼粉 540g/kg、淀粉 183g/kg、鱼膏 37g/kg、面筋 20g/kg、鱼油 20g/kg、奸壳粉 64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3%、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分 8.4% ；
[0029]本发明的配方还可以为:植物乳杆菌I X 101Qcfu/kg、菌体10g/kg、鱼粉540g/kg、淀粉183g/kg、鱼膏37g/kg、面筋20g/kg、鱼油20g/kg、奸壳粉64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3 %、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分
8.4% ；
[0030]如图1所示，本发明实施例的大黄鱼植物乳杆菌饲料的制备方法包括以下步骤:
[0031]SlOl:从韩国腌白菜分离得到植物乳杆菌，37°C培养于含MRS肉汤的无菌烧瓶中，24小时后，15400Xg离心5分钟，收集植物乳杆菌混合物；
[0032]S102:按1:4比例与脱脂牛奶混合，冷冻干燥，通过MRS琼脂平板记数测定植物乳杆菌混合物的生活力；
[0033]S103:按照植物乳杆菌 IX 106cfu/kg、菌体 0.001g/kg、牛奶 9.999g/kg、鱼粉540g/kg、淀粉183g/kg、鱼膏37g/kg、面筋20g/kg、鱼油20g/kg、奸壳粉64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg配置大黄鱼喂养饲料；
[0034]S104:加入成分为47.3%粗蛋白、8.9%粗脂、10.2%灰分和8.4%水分的基础饲料，混合制成大黄鱼植物乳杆菌饲料。
[0035]结合以下具体的实施例对本发明的使用效果做进一步的说明:
[0036]实施例1:
[0037]I材料与方法:
[0038]1.1植物乳杆菌混合物饲料的制备:
[0039]植物乳杆菌SaccharomycescerevisiaeP13从韩国脆白菜分离得到[2]，37°C培养于含MRS肉汤的无菌烧瓶中，24小时后，15，400 Xg离心5分钟，收集植物乳杆菌混合物，按1:4比例与脱脂牛奶混合，冷冻干燥，通过MRS琼脂平板记数测定植物乳杆菌混合物的生活力，如表I所示，依据植物乳杆菌含量配置5种大黄鱼喂养饲料，其中基础饲料成分为47.3 %粗蛋白、8.9 %粗脂、10.2 %灰分和8.4 %水分，1.0 X 109cfu/g的植物乳杆菌混合物按表I所示的比例加入到基础饲料中，使大黄鱼喂养饲料中SaccharomycescerevisiaeP13 植物乳杆菌的含量分别达到 O、ΙΟ4、ΙΟ6、108、1010cfu/kg ；
[0040]1.2大黄鱼饲养:
[0041]大黄鱼幼鱼购自当地一人工养殖场，采用水缸流水(海水)饲养方式在室内进行饲养实验，实验过程中，每天更换25-35%的海水以保证水的质量，水温保持在27.0±0.5°C，水的pH值为7.4-8.5，水的盐度保持在3.0±0.2%，所有实验鱼每天用含植物乳杆菌SaccharomycescerevisiaeP13配方饲料(表I)喂养两次，每一配方饲料平行喂养三组实验鱼，共15组，每组5条大黄鱼幼鱼；
[0042]1.3大黄鱼生长的测定:
[0043]将大黄鱼幼苗随机分成15组，每组于40-60升体积玻璃水族箱中用含有植物乳杆菌SaccharomycescerevisiaeP13的饲料或对照饲料喂养,所有水族箱配备空气过滤器，在生长测定过程中，大黄鱼每日喂食含植物乳杆菌0，IO4, IO6, IO8和101(lCfU/kg饲料，每星期称重一次直到测定实验结束，体重增加百分率(PWG)和饲料转化效率(FE)的计算公式如下:PWG = [100% X (最后体重-初始体重)/ (初始体重)]和FE =(最后重量-初始体重)/(摄食量)；
[0044]1.4大黄鱼抵抗病菌体分析:
[0045]大黄鱼喂食含O、ΙΟ4、106、IO8 和 1010cfu/kg 植物乳杆菌 SaccharomycescerevisiaeP13的饲料四周后，分别肌肉注射相应量的Streptococcussp.菌体储存夜(5.0X 1010cfu/ml),以使每一实验鱼体内初始Streptococcussp.的浓度为
5.0X IO5Cfu/克鱼体重，所有实验鱼均继续喂食含O、104、IO6,IO8和101Qcfu/kg植物乳杆菌SaccharomycescerevisiaeP13的饲料，每天统计死鱼数；
[0046]1.5 大黄鱼肠道内 SaccharomycescerevisiaePl3 的存活分析:
[0047]大黄鱼喂食实验用配方饲料四周后，剪取小段新鲜肠子，立即用20ml肉汤粉碎，37°C过夜培养，4°C，10，000 X g离心20分钟，收集沉淀，用购自碧云天的基因组抽提试剂盒分离纯化SaccharomycescerevisiaeP13 基因组DNA,用 SaccharomycescerevisiaeP13特异的弓 I 物对 5，-TCTGTATATTCTGTATCTATGTTCCTGC-3 ’和 5 ’ -AAATGGCCTATTGTATTGTCAGGTC-3 ’ ABI公司的Perkin-Elmer9700核酸扩增仪上进行聚合酶链式反应(PCR)扩增，先94°C加热变性10分钟，接着95 °C变性30秒，55 °C退火30秒，72 V延伸45秒，35个循环，最后72 °C延伸10分钟，PCR产物用2.0 %琼脂糖电泳分离鉴定；
[0048]2结果与分析:
[0049]2.1SaccharomycescerevisiaeP13对大黄鱼体重增长率的影响:
[0050]喂食含植物乳杆菌SaccharomycescerevisiaeP13的配方饲料(表I)后的大黄鱼从第一周起，体重增长率便明显高于喂食基础饲料(对照饲料)的大黄鱼体重增长率，四周后，喂食对照饲料和含I X 104、1X 106、1X IO8和lX101Qcfu/kg植物乳杆菌SaccharomycescerevisiaeP13 的大黄鱼体重增长率分别为 88.9±3.I %> 101.1±5.8%、132.4±11 %、140.8±6.7% 和 138.9±6.4% (图 2);图 2 中大黄鱼喂食含 O、I X 104、I X 106、I X IO8 和 IX 1010cfu/kg 植物乳杆菌 SaccharomycescerevisiaeP13 饲料 1-4 周的体重增长率。每个数值等于每组3次测定值的平均值加上标准误差，P <0.05;
[0051]表I大黄鱼喂养饲料成分
【权利要求】
1.一种大黄鱼植物乳杆菌饲料配方，其特征在于，该大黄鱼植物乳杆菌饲料配方包括:植物乳杆菌 IX 106cfu/kg、菌体 0.lg/kg、牛奶 9.999g/kg、鱼粉 540g/kg、淀粉 183g/kg、鱼膏37g/kg、面筋20g/kg、鱼油20g/kg、奸壳粉64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg组成的喂养饲料和粗蛋白、粗脂、灰分和水分组成的基础饲料； 按照质量百分比，喂养饲料为25.2%，粗蛋白47.3%、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分8.4%。
2.如权利要求1所述的大黄鱼植物乳杆菌饲料配方，其特征在于，该大黄鱼植物乳杆菌饲料配方为:植物乳杆菌IX 108cfu/kg、菌体0.lg/kg、牛奶9.99g/kg、鱼粉540g/kg、淀粉183g/kg、鱼膏37g/kg、面筋20g/kg、鱼油20g/kg、奸壳粉64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3%、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分8.4%。
3.如权利要求1所述的大黄鱼植物乳杆菌饲料配方，其特征在于，该大黄鱼植物乳杆菌饲料配方为:植物乳杆菌I X 101Qcfu/kg、菌体10g/kg、鱼粉540g/kg、淀粉183g/kg、鱼膏37g/kg、面筋20g/kg、鱼油20g/kg、奸壳粉64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3%、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分8.4%。
4.一种大黄鱼植物乳杆菌饲料的制备方法，其特征在于，该大黄鱼植物乳杆菌饲料的制备方法包括以下步骤: 从韩国腌白菜分离得到植物乳杆菌，37°C培养于含MRS肉汤的无菌烧瓶中，24小时后，15400 X g离心5分钟，收集植物乳杆菌混合物； 按1:4比例与脱脂牛奶混合，冷冻干燥，通过MRS琼脂平板记数测定植物乳杆菌混合物的生活力； 按照植物乳杆菌I X 106cfu/kg、菌体0.001g/kg、牛奶9.999g/kg、鱼粉540g/kg、淀粉183g/kg、鱼膏37g/kg、面筋20g/kg、鱼油20g/kg、奸壳粉64g/kg、脱脂豆柏94g/kg、矿物混合物35g/kg、维生素混合物7g/kg配置大黄鱼喂养饲料； 加入成分为47.3%粗蛋白、8.9%粗脂、10.2%灰分和8.4%水分的基础饲料，混合制成大黄鱼植物乳杆菌饲料。
5.如权利要求4所述的大黄鱼植物乳杆菌饲料的制备方法，其特征在于，该大黄鱼植物乳杆菌饲料一天喂养大黄鱼两次。
【文档编号】A23K1/175GK103947886SQ201410188158
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年5月5日 优先权日:2014年5月5日
【发明者】廖志勇, 缪雄伟, 林利, 李小花 申请人:温州大学