一种火力楠的组织培养快繁方法
【专利摘要】一种火力楠的组织培养快繁方法，涉及火力楠（MicheliamacclureiDandy）通过无性快繁技术获得株性稳定种苗的育苗方法。本发明以火力楠带节茎段或顶芽为外植体，通过不定芽的诱导培养、丛生芽继代培养、生根培养以及炼苗移栽等阶段实现了火力楠种苗的组织培养快速繁殖。解决了这一珍贵乡土树种种苗供应的问题。
【专利说明】一种火力楠的组织培养快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种火力楠的 组织培养快繁方法。
【背景技术】
[0002] 火力捕(#icAe^/ia ?acc/arei Dandy)又名醉香含笑，为木兰科(ifegflo/iaceae1)含 笑属常绿阔叶乔木，属于极速生类珍贵树种，是桂东南地区主要造林树种之一。火力楠木材 结构细致，纹理通直、切面光滑、强度和硬度较高，耐腐蚀，加工性能好，是建筑、家具、车船 厢板、玩具等方面的优良用材。火力楠林分燃烧性差，是优良的防火树种。
[0003] 火力楠作为南方珍贵乡土树种，其用途广泛，经济价值高，发展火力楠是解决我国 珍贵树种木材供需矛盾的重要途径。目前广西桂东南地区正掀起火力楠种植热潮，优质火 力楠种苗供不应求。然而，目前火力楠种苗主要依靠种子繁殖，但火力楠种子容易发霉，发 芽率低，而且实生苗造林林分分化明显，个体之间差异大。因此，非常有必要建立一套完整 的火力楠组织培养快繁体系。目前，火力楠组织培养技术有少量报道，但研究还不够成熟， 即完整的火力楠组织培养的研究报道尚未见报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供出一种火力楠的组织培养快繁方法，通过不定芽的诱导、 丛生芽继代、生根培养、炼苗移栽等阶段，使火力楠实现快速繁殖，从而实现了本发明的目 的。
[0005] 本发明的一种火力楠的组织培养快繁方法，包括以下的步骤： (1) 不定芽的诱导培养：选取火力楠的嫩茎或顶芽作为外植体，经消毒后接种到诱导 培养基上，先在25?28°C条件下全暗培养15?20天，然后置于每天光照10?12小时， 光照强度为1000?15001x，培养温度为25?28°C条件下培养，直至诱导形成不定芽。所述 的诱导培养基以1/2MS为基本培养基，配加2. 0%?3. 5%蔗糖、0. 35%?0. 5%琼脂、0. 05%? 〇· 1%活性炭、〇· 03%?0· 1%蛋白胨、50?100ml/L椰子汁以及0· 8?1. 2mg/L 6-BA和0· 3? 0· 5mg/L NAA，pH 值为 5. 4 ?5. 8; (2) 丛生芽继代培养：将不定芽转入继代培养基上进行增殖培养，接种后先在25? 28 °C条件下全暗培养5?7天，然后置于每天光照10?12小时，光照强度为1000? 15001x，培养温度为25?28°C的条件下培养，35?45天转接一次。所述的继代培养基以 MS为基本培养基，配加1. 5%?2. 5%蔗糖、0. 35%?0. 5%琼脂、0. 05%?0. 1%活性炭以及 0· 4 ?0· 8mg/L 6-ΒΑ、0· 1 ?0· 3mg/L IBA 和 0· 1 ?0· 4mg/L NAA，pH 值为 5. 4 ?5. 8 ; (3) 生根培养：将高度约为3?5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养， 接种后先在25?28°C条件下全暗培养5?7天，然后置于每天光照10?12小时，光照强 度为2000?25001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根，所述的生根培养基以SH 为基本培养基，配加1. 0%?1. 5%蔗糖、0. 35%?0. 45%琼脂、0. 05%?0. 1%活性炭、30? 50ml/L 椰子汁以及 0· 3 ?0· 6mg/L IBA 和 0· 1 ?0· 3mg/L NAA，pH 值为 5· 4 ?5· 8 ; (4)炼苗移栽：试管苗生根后将培养瓶转至温室培养30?45天以壮苗，将具有根、茎、 叶和芽的完整火力楠试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管 苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙混合成的基质中并定植于大田 中。
[0006] 在上述（1)步骤中，所述的外植体为火力楠种子的月龄苗和1?2年生苗的带节 嫩茎或顶芽。
[0007] 在上述步骤（1)所述的外植体消毒方法是将火力楠种子的月龄苗和1?2年生苗 的带节嫩茎或顶芽浸泡于75%?80%的酒精溶液中10?30秒钟，用无菌水冲洗2?5次 后置于添加有0. 1%?0. 15%吐温的0. 1%升汞溶液中8?15分钟，经无菌水冲洗2?5次 后备用。
[0008] 本发明具有的特点，目前国内关于火力楠组织培养技术有少量报道，但技术还不 够成熟，而本发明具有简单、易行、经济的特点。通过本发明育成的火力楠试管苗移栽成活 率达到90%以上，可以有效解决火力楠种植中的优质火力楠种苗供应问题。
【具体实施方式】
[0009] 以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0010] 实施例一 1、 外植体 从玉林市林业科学研究所火力楠育苗基地采集火力楠种子的月龄苗带节嫩茎； 2、 培养过程 (1) 不定芽的诱导培养：火力楠带节嫩茎外植体经75%的酒精消毒20秒钟后，用无 菌水冲洗3次后转入添加有0. 1%吐温的0. 1%升汞溶液中消毒9分钟，再经无菌水冲洗3 次后转接到诱导培养基上，先在25°C条件下全暗培养15天，然后置于每天光照10小时， 光照强度为12001x，培养温度为25°C条件下培养，直至诱导形成不定芽。诱导培养基为： l/2MS+0.8mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA +2.0% 蔗糖+0.4% 琼脂+0.06% 活性炭+0.07% 蛋白胨 +70ml/L椰子汁，pH值为5.6; (2) 丛生芽继代培养：将不定芽转入继代培养基上进行增殖培养，接种后先在26°C条 件下全暗培养6天，然后置于每天光照12小时，光照强度为12001x，培养温度为26°C的条 件下培养，35天继代一次，繁殖系数达6?8。继代培养基为：MS+0. 5mg/L 6-BA+O. lmg/L IBA+0. 2mg/L NAA +1. 8% 蔗糖 +0· 35% 琼脂 +0· 1% 活性炭，pH 值为 5· 8 ; (3) 生根培养：将高度约为3?5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养， 接种后先在28°C条件下全暗培养7天，然后置于每天光照12小时，光照强度为：25001x，培 养温度为28°C的条件下培养45天内可以保证生根。生根培养基为：SH+0. 3mg/L IBA+0. 1 mg/L NAA +L 5% 蔗糖 +0· 45% 琼脂 +0· 05% 活性炭 +30ml/L 椰子汁，pH 值为 5. 8 ; (4) 炼苗移栽：试管苗生根后将培养瓶转至温室培养30天后，当试管苗生至6?8cm时 将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培 养基，栽入由泥炭土和河沙（1 :1)混合成的基质中并定植于大田中，成活率达到93%。
[0011] 实施例二 1、 外植体 从玉林市林业科学研究所火力楠优树种子园中1年生苗的顶芽； 2、 培养过程 (1) 不定芽的诱导培养：火力楠带节嫩茎外植体经75%的酒精消毒10秒钟后，用无菌 水冲洗5次后转入添加有0. 15%吐温的0. 1%升汞溶液中消毒8分钟，再经无菌水冲洗5 次后转接到诱导培养基上，先在28°C条件下全暗培养20天，然后置于每天光照12小时， 光照强度为lOOOlx，培养温度为28°C条件下培养，直至诱导形成不定芽。诱导培养基为： 1/2MS+1. Omg/L 6-BA+0. 5mg/L NAA +3. 5% 蔗糖 +0· 5% 琼脂 +0· 1% 活性炭 +0· 03% 蛋白胨 +100ml/L椰子汁，pH值为5. 8; (2) 丛生芽继代培养：将不定芽转入继代培养基上进行增殖培养，接种后先在28°C条 件下全暗培养7天，然后置于每天光照10小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，培养温度为28°C的条 件下培养，40天继代一次，繁殖系数达4?6。继代培养基为：MS+0. 8mg/L 6-BA+O. 2mg/L IBA+0. 2mg/L NAA +2. 5% 蔗糖 +0· 5% 琼脂 +0· 1% 活性炭，pH 值为 5· 8 ; (3) 生根培养：将高度约为3?5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养， 接种后先在28°C条件下全暗培养5天，然后置于每天光照10小时，光照强度为20001x，培 养温度为28°C的条件下培养30天内可以保证生根。生根培养基为：SH+0. 6mg/L ΙΒΑ+0. 3 mg/L NAA +L 5%蔗糖+0· 4%琼脂+0· 1%活性炭+40ml/L椰子汁，pH值为5. 8 ; (4) 炼苗移栽：试管苗生根后将培养瓶转至温室培养35天后，当试管苗生至6?8cm时 将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培 养基，栽入由泥炭土和河沙（1 :1)混合成的基质中并定植于大田中，成活率达到96%。
[0012] 实施例三 1、 外植体 从玉林市林业科学研究所火力楠优树种子园中2年生苗的带节茎段； 2、 培养过程 (1) 不定芽的诱导培养：火力楠带节嫩茎外植体经80%的酒精消毒30秒钟后，用无菌 水冲洗2次后转入添加有0. 1%吐温的0. 1%升汞溶液中消毒15分钟，再经无菌水冲洗3 次后转接到诱导培养基上，先在27°C条件下全暗培养18天，然后置于每天光照11小时， 光照强度为15001x，培养温度为27°C条件下培养，直至诱导形成不定芽。诱导培养基为： l/2MS+1.2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA +3.0% 蔗糖+0.4% 琼脂+0.08% 活性炭+0.08% 蛋白胨 +60ml/L椰子汁，pH值为5. 8; (2) 丛生芽继代培养：将不定芽转入继代培养基上进行增殖培养，接种后先在27°C条 件下全暗培养6天，然后置于每天光照11小时，光照强度为13001x，培养温度为27°C的条 件下培养，38天继代一次，繁殖系数达5?7。继代培养基为：MS+0. 4mg/L 6-BA+O. lmg/L IBA+0. lmg/L NAA +2. 0% 蔗糖 +0· 5% 琼脂 +0· 06% 活性炭，pH 值为 5· 8 ; (3) 生根培养：将高度约为3?5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养， 接种后先在27°C条件下全暗培养7天，然后置于每天光照11小时，光照强度为25001x，培 养温度为27°C的条件下培养30天内可以保证生根。生根培养基为：SH+0. 4mg/L IBA+0. 1 mg/L NAA +L 0%蔗糖+0· 4%琼脂+0· 05%活性炭+50ml/L椰子汁，pH值为5. 8 ; (4) 炼苗移栽：试管苗生根后将培养瓶转至温室培养30天后，当试管苗生至6?8cm时
【权利要求】
1. 一种火力楠的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 不定芽的诱导培养：选取火力楠的嫩茎或顶芽作为外植体，经消毒后接种到诱导 培养基上，先在25?28°C条件下全暗培养15?20天，然后置于每天光照10?12小时， 光照强度为1000?15001x，培养温度为25?28°C条件下培养，直至诱导形成不定芽；所述 的诱导培养基以1/2MS为基本培养基，配加2. 0%?3. 5%蔗糖、0. 35%?0. 5%琼脂、0. 05%? 〇· 1%活性炭、〇· 03%?0· 1%蛋白胨、50?100ml/L椰子汁以及0· 8?1. 2mg/L 6-BA和0· 3? 0· 5mg/L NAA，pH 值为 5. 4 ?5. 8; (2) 丛生芽继代培养：将不定芽转入继代培养基上进行增殖培养，接种后先在25? 28 °C条件下全暗培养5?7天，然后置于每天光照10?12小时，光照强度为1000? 15001x，培养温度为25?28°C的条件下培养，35?45天转接一次；所述的继代培养基以 MS为基本培养基，配加1. 5%?2. 5%蔗糖、0. 35%?0. 5%琼脂、0. 05%?0. 1%活性炭以及 0· 4 ?0· 8mg/L 6-ΒΑ、0· 1 ?0· 3mg/L IBA 和 0· 1 ?0· 4mg/L NAA，pH 值为 5. 4 ?5. 8 ; (3) 生根培养：将高度约为3?5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养， 接种后先在25?28°C条件下全暗培养5?7天，然后置于每天光照10?12小时，光照强 度为2000?25001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根，所述的生根培养基以SH 为基本培养基，配加1. 0%?1. 5%蔗糖、0. 35%?0. 45%琼脂、0. 05%?0. 1%活性炭、30? 50ml/L 椰子汁以及 0· 3 ?0· 6mg/L IBA 和 0· 1 ?0· 3mg/L NAA，pH 值为 5. 4 ?5. 8 ; (4) 炼苗移栽：试管苗生根后将培养瓶转至温室培养30?45天以壮苗，将具有根、茎、 叶和芽的完整火力楠试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管 苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙混合成的基质中并定植于大田 中。
2. 根据权利要求1所述的一种火力楠的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（1)所述 的外植体为火力楠种子的月龄苗和1?2年生苗的带节嫩茎或顶芽。
3. 根据权利要求1所述的一种火力楠的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（1)所 述的外植体消毒方法是将火力楠种子的月龄苗和1?2年生苗的带节嫩茎或顶芽浸泡于 75%?80%的酒精溶液中10?30秒钟，用无菌水冲洗2?5次后置于添加有0. 1%?0. 15% 吐温的0. 1%升汞溶液中8?15分钟，经无菌水冲洗2?5次后备用。
【文档编号】A01H4/00GK104082139SQ201410297285
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年6月28日 优先权日:2014年6月28日
【发明者】梁钧淞, 甘耀坤, 莫昭展, 吴凤娟, 梁林英, 梁晓菊, 潘洁明, 严翠琼, 张燕飞 申请人:玉林师范学院