一种利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法与流程

文档序号:12294683阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法,其特征在于,所述步骤包括:

1)大豆籽粒经消毒、培养后获取大豆地上部分外植体;

2)对地上部分外植体进行根系的诱导培养,获得组合苗;

3)对完整的组合苗进行盐胁迫筛选,鉴定耐盐基因。

2.如权利要求1所述的利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法,其特征在于,挑取当年产成熟饱满表皮无病变的大豆籽粒进行表面消毒后,种植于珍珠岩中并浇灌Hoagland营养液,使其生长至第一对三出复叶完全展开。

3.如权利要求1所述的利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法,其特征在于,在步骤1中,所述大豆籽粒使用氯气静置消毒16-20小时;消毒后的大豆籽粒在无菌条件下通风10-20分钟。

4.如权利要求1所述的利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法,其特征在于,在步骤1中,在大豆植株子叶节下方2-3cm处沿斜下30度角度将大豆植株切断,获得大豆地上部分外植体。

5.如权利要求1所述的利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法,其特征在于,在步骤2中,将4-7ml利用1/4MS基础盐液体培养基重悬的含有待鉴定基因的发根农杆菌k599菌液滴加至岩棉块中,之后将步骤1)中获得的外植体下部垂直插入该岩棉中部,使植株下部没入岩棉2-2.5cm。

6.如权利要求5所述的利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法,其特征在于,在步骤2)中,岩棉块大小为3cm×3cm×3cm,在岩棉快的一面戳一个直径2mm,1.5-2cm深的小孔。

7.如权利要求5所述的利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法,其特征在于,在步骤2)中,将插有大豆植株地上部分的岩棉块放入洁净保湿盒中过夜保湿,第二天拿下保湿盒上盖,直到豆苗全部出现萎蔫后,加入无菌1/4MS基础盐液体培养基,盖上保湿盒,直到豆苗恢复正常状态。

8.如权利要求1所述的利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法,其特征在于,在步骤2)中,适当添加无菌的去离子水保持岩棉块湿润,2周后撕下岩棉块,除去非切口处的根,获得大豆组合苗。

9.如权利要求1所述的利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法,其特征在于,在步骤3)中,对大豆组合苗进行盐胁迫处理,若生长良好说明之前用于转化的农杆菌携带的是耐盐基因;若生长萎蔫则农杆菌携带的不是耐盐基因。

10.如权利要求10所述的利用大豆组合苗筛选耐盐基因的方法,其特征在于,在步骤3)中,所述盐胁迫为:每天用50ml 100mmol/L的NaCl溶液浇灌1周。

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