专利名称：一种保护动物细胞活性的离心分离方法
技术领域：
本发明涉及一种保持动物细胞活性的离心法，属于细胞生物学技术领域。
细胞生物学发展至今，大量国内外相关生物技术书籍和参考相关学术期刊，“活性细胞分离沉淀方法”使用最多的常规方法是离心转速3000-6000转/分钟，离心10-15分钟，弃上清，沉淀物即为细胞。采用此方法分离的细胞，经细胞活性检测(染色法)，结果显示每操作离心一次，细胞活性损失10-20％。细胞活性的损失，极不利益生物学研究实验，按一些研究实验要求，对活性细胞悬液需要分离二次、三次……时，细胞活性将受到严重损坏，甚至完全丧失活性，导致生物学实验不能顺利进行。多年来，在生物细胞学实际操作中，经常为了减少或避免因离心造成的细胞活性损伤，在实验设计方案时刻意地减少细胞离心的操作次数，使用这样的设计，难免会影响到研究实验的准确性与可靠性。
活性细胞离心沉淀法是细胞生物学实验中最常用而最重要的方法之一，如何在实践中摸索出一种好的方法，是细胞生物学技术人员十分关注的问题。
发明技术内容针对上述问题，为了保护或减少活性细胞离心时对其活性的影响。本发明对活性细胞分离沉淀的常规方法进行了技术改进，调整了离心转速和离心时间，离心转速800-1000转/分，离心3-5分钟，弃上清，沉淀物即为细胞。采用改进后离心法，经一次离心的细胞，细胞活性检测(染色法)结果显示，细胞活性为98-100％，较好地保护了细胞的活性。采用此技术连续3-5次的离心，细胞活性检测结果显示活性不低于90％，对细胞活性的保护，极有利于生物学实验的顺利进行。本发明的原理是降低了离心转速和离心时间，使细胞间压强减小，同时也减小细胞间的机械挤压力，细胞损伤减少(否则反之)，从而实现保护和减少细胞损伤的作用。
将离心后的细胞分别进行细胞活性(染色法)检测，结果显示BHK-21细胞活性94％；FK-81细胞活性92％。
比较例1
10％小牛血清RPMI-1640培养液10毫升、2管，分别加入活性地鼠肾传代细胞(BHK-21)、猫肾细胞(FK-81)分别配制细胞浓度为1×109/cm3的细胞悬液→4000转/分，10分钟→弃上清→加入10毫升培养液，吹打沉淀物，混匀→4000转/分，5分钟……连续4次。
将离心后的细胞分别进行细胞活性(染色法)检测，结果显示BHK-21细胞活性52％，FK-81细胞活性45％。
实施例2取10％小牛血清RPMI-1640培养液10毫升/管、2管，分别加入活性人鼻咽癌组织细胞(Hep-2)、猪肾细胞(IBRS)，分别配制细胞浓度为1×107/cm3的细胞悬液→1000转/分，3分钟→弃上清→加入10毫升培养液，吹打沉淀物，混匀→1000转/分，3分钟→弃上清→加入1毫升培养液。
将离心后的细胞分别进行细胞活性(染色法)检测，结果显示Hep-2细胞活性98％，IBRS细胞活性97％。
比较例2取10％小牛血清RPMI-1640培养液10毫升/管、2管，分别加入活性人鼻咽癌组织细胞(Hep-2)、猪肾细胞(IBRS)，分别配制细胞浓度为1×107/cm3的细胞悬液→5000转/分，10分钟→弃上清→加入10毫升培养液，吹打沉淀物，混匀→5000转/分，10分钟→弃上清→加入1毫升培养液。
将离心后的细胞分别进行细胞活性(染色法)检测，结果显示Hep-2细胞活性79％，IBRS细胞活性77％。
权利要求
1.一种保护动物细胞活性的离心分离方法，即将活性细胞悬液离心分离，弃上清，沉淀物即为细胞，其特征在于离心转速800-1000转/分，离心时间3-5分钟。
全文摘要
本发明对活性细胞分离沉淀的常规方法进行了技术改进，调整了离心转速和离心时间，离心转速800－1000转/分，离心3－5分钟，弃上清，沉淀物即为细胞。采用改进后离心法，经一次离心的细胞，细胞活性检测(染色法)结果显示，细胞活性为98－100％，较好地保护了细胞的活性。采用此技术连续3－5次的离心，细胞活性检测结果显示活性不低于90％，对细胞活性的保护，极有利于生物学实验的顺利进行。
文档编号C12N5/06GK1415746SQ0214470
公开日2003年5月7日 申请日期2002年12月6日 优先权日2002年12月6日
发明者李天宪, 范兆军, 陈绳亮, 熊克娟, 张忠 申请人:中国科学院武汉病毒研究所