专利名称：利用类直线核酸链标本定位基因的方法
技术领域：
本发明涉及一种定位基因的方法，特别是一种利用类直线核酸链标本定位基因的方法，属于基因工程技术领域。
背景技术：
在现有的定位基因的场合，往往采用基因芯片核酸杂交的方法。这样的方法在实践的过程中存在两大局限。一是受已知序列的局限，例如，将一组不明序列的核酸片段点印在基本芯片上，无法进行基因定位；二是受核酸片段大小的限制，例如，将一组碱基数量超过万以上的含有大量内含子的核酸片段点印在基因芯片上，无法进行准确的基因定位。为了扩大基因定位的范围，提高基因定位的效率，需要有一种利用类直线核酸链标本定位基因的方法。目前，国际上尚无此种利用类直线核酸链标本定位基因的方法。本发明是要提供一种利用类直线核酸链标本定位基因的方法，它可以弥补上述的不足。利用类直线核酸标本定位基因的方法，主要是利用呈类直线构象的大分子核酸链与标记总RNA进行杂交，达到精准定位基因的效果。其特点是可以利用已知基因序列的核酸链进行基因定位，可以利用未知基因序列的核酸链进行基因定位，可以对碱基数量超亿的核酸链进行基因定位。这样，比现有的基因芯片的限制用已知序列的、小片段序列的核酸链定位基因的方法应用范围大，效率高。
发明内容
本发明的目的是这样实现的，一种利用类直线核酸链标本定位基因的方法，它包括以下步骤1、提取相应的总RNA。
2、对所提取的总RNA进行纯化处理。
3、对纯化的总RNA进行标记处理。
4、将标记的总RNA加滴在固载类直线核酸链标本(DNA)上。
5、在滴有标记RNA的固载类直线核酸链标本上加盖压条。
6、用塑料膜将滴有标记RNA的加盖压条的固载类直接核酸标本包放入热水中，使RNA与DNA发生杂交。
7、将杂交后的固载类直线核酸标本从热水中取出，去掉塑料膜，取下压条，进行清洗，除去没有杂交的标记RNA。
8、用高分辨率显微镜或激光聚焦扫描等仪器对类直线核酸链标本进行基因定位。
9、重复步骤1-8，满足大批量基因定位的需求。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明进一步描述首先制备固载类直线核酸链标本。其类直线核酸链的不受来源、长度(碱基数量)、体标特征和组合形式的限制。它，可以是自然生成的核酸链，也可以是人工合成的核酸链；可以是一个细胞体内的一段核酸链，也可以是一条染色体的全部核酸链。
在实施例中，本发明可以将标记cDNA加滴在固载类直线核酸链标本上进行基因定位。
在实施例中，本发明所述的使RNA与DNA发生杂交的热水的温度可以据情调节。
在实施例中，本发明所述的用塑料膜将滴有标记RNA的加盖压条的固载类直线核酸链标本包放入热水浸泡的时间一般在10个小时左右。
在实施例中，本发明所述的清洗固载类直线核酸链标本上未发生杂交的标记RNA可以选择不同的方法、实温、时间进行。
在实施例中，本发明所述的基因定位可以借助计算机程序来完成。
本发明与现有技术相比具有下列优点
1、能够直接对上千万碱基的核酸链全面进行基因定位。
2、一次性系统化处理的基因信息量大，现有技术做不到。
3、高效、准确，现有技术做不到。
4、填补了国际上一项利用类直线核酸链标本定位基因的方法的技术空白。
权利要求
1.一种利用类直线核酸链标本定位基因的方法，它包括以下步骤①提取相应的总RNA。②对所提取的总RNA进行纯化处理。③对纯化的总RNA进行标记处理。④将标记的总RNA加滴在固载类直线核酸链标本(DNA)上。⑤在滴有标记RNA的固载类直线核酸链标本上加盖压条。⑥用塑料膜将滴有标记RNA的加盖压条的固载类直接核酸标本包放入热水中，使RNA与DNA发生杂交。⑦将杂交后的固载类直线核酸标本从热水中取出，去掉塑料膜，取下压条，进行清洗，除去没有杂交的标记RNA。⑧用高分辨率显微镜或激光聚焦扫描等仪器对类直线核酸链标本进行基因定位。⑨重复步骤①-⑧，满足大批量基因定位的需求。
全文摘要
本发明涉及定位基因的方法，特别是一种利用类直线核酸链标本定位基因的方法，属于基因工程技术领域。其方法主要是利用呈类直线构象的大分子量核酸链与标记总RNA进行杂交，达到精确定位基因的效果。其特点是一次处理的基因信息量大，系统化程度高，准确性强。与现有技术相比，具有应用范围广，效果高等优点。
文档编号C12Q1/68GK1570141SQ0314951
公开日2005年1月26日 申请日期2003年7月15日 优先权日2003年7月15日
发明者周卫东 申请人:周卫东