用于药物用途的淀粉酶的制作方法

专利名称：：用于药物用途的淀粉酶的制作方法
技术领域：
：本发明涉及淀粉酶的药物用途，所述淀粉酶与源自芽孢杆菌属(Sac,'〃w力的a-淀粉酶(SEQIDNO:l-3)相关，并任选地与脂肪酶和/或蛋白酶组合。医学适应症(medicalindication)的实例是治疗消化性病症(digestivedisorder)、胰腺外分泌机能不全(pancreaticexocrineinsufficiency)(PEI)、膝腺炎、嚢性纤维化、I型糖尿病和/或II型糖尿病。
背景技术：
：已知几种以胰酶补充剂(pancreaticenzymesupplement)形式存在的商业药物用于治疗胰腺外分泌机能不全。这些产品的活性组分是消化酶，主要为淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶，其通常产生于胰腺并分泌至小肠上部(十二指肠)。这些药物中使用的酶源自牛或猪的胰腺，然而市场上也存在含有微生物酶的产品，例如产品Nortase⑧，其包含来自米根霉CR/^opw0^zae)的脂肪酶、来自)的蛋白酶和来自米曲霉的淀粉酶。US5614189(EP600868)描述源自疏棉状腐质霉(7/ww/co/a/a鼎g/"twa)的月旨肪酶在胰酶替代疗法(pancreaticenzymereplacementtherapy)中的用途，例如用于治疗患有嚢性纤维化的患者。所述脂肪酶来自疏棉状腐质霉DSM4109,并具有本文SEQIDNO:9的氨基酸1-269的氨基酸序列。WO00/54799描述具有脂肪分解、蛋白水解和淀粉分解活性的、生理上可以接受的酶混合物在治疗I型和II型糖尿病中的用途。WO02/060474描述来自德氏根霉CRWzo/wstfe/emw)的浓缩脂肪酶、来自蜂蜜曲霉C^/e^7/wswe〃ew力的中性蛋白酶和来自米曲霉的淀粉酶在治疗消化不良中的用途。WO01/62280描述与多官能交联剂(multiftmctionalcrosslinkingagent)交联的非真菌脂肪酶晶体、蛋白酶和淀粉酶用于在哺乳动物中治疗或预防胃肠病症的用途，其中脂肪酶晶体在约2.0-9.0的pH范围具有活性。优选的脂肪酶来自假单胞菌属(尸5ewfowo"a力，优选的淀粉酶来自曲霉属G4^e^z7/^)和芽孢杆菌属(6a"7/m)，优选的蛋白酶是菠萝蛋白酶(bromelain)、木瓜蛋白酶(papain)或无花果蛋白酶(ficin)。EP0828509描述某些酸稳定性淀粉酶任选地与某些酸稳定性脂肪酶和/或蛋白酶组合在治疗外分泌胰腺机能不全中的用途。优选的淀粉酶来自黑曲霉(y^/efgz7/ww'ge。，优选的月旨肪酶来自少根才艮霉(7/z/zo/wswt/z/zw)或爪。圭才艮WO99/19467描述源自嗜热脂肪芽孢杆菌CSac/〃wsWearaAwmop/n7M"、/ac/em)的a-淀粉酶的某些变体，以及它们的多种工业用途，然而未描述药物用途。将这些在WO99/19467中指定为SEQIDNO:3-5的野生型芽孢杆菌属a-淀粉酶的序列包括在本文中，分别作为SEQIDNO:10-12。EP0594235描述从发酵液制备纯化的淀粉酶的方法。也要求保护药用组合物，并提及作为消化助剂(digestiveaid)的潜在用途，以及其它潜在用途。实施例阐明要求保护的用于地衣芽孢杆菌a-淀粉酶的纯化方法。WO2004/078960公开了鉴定淀粉酶的至少一个T细胞表位和在至少一个表位上包含至少一个变化的变体淀粉酶的方法。列举了许多潜在用途，包括药物用途。提及来自地衣芽孢杆菌的一种淀粉酶。EP0828509描述某些酸稳定性淀粉酶任选地与某些酸稳定性脂肪酶和/或蛋白酶组合在治疗胰腺外分泌机能不全中的用途。优选的淀粉酶来自黑曲霉，并且优选的脂肪酶来自少根根霉或爪哇根霉。在本领域中需要可替换的(优选改进的)用于药物用途的酶。本发明提供可替换的(优选改进的)用于药物用途的酶，具体而言用于治疗消化性病症、胰腺外分泌机能不全(PEI)、胰腺炎、嚢性纤维化、I型糖尿病和/或II性糖尿病。所述新酶是蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶。优选地，根据本发明使用的酶在体内和/或体外具有改进的效能(efficacy);改进的pH活性曲线(profile);改进的比活性(specificactivity);改进的降解曲线；在胆汁盐(bilesalt)存在时有活性；和/或具有降低的变应原性(allergenicity)。本发明涉及用作药物的淀粉酶，所述淀粉酶与以下序列具有至少50%的同一性(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，发明简述和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483;所述淀粉酶任选地与脂肪酶和/或蛋白酶组合。本发明还涉及这些淀粉酶用于制备药物的用途，所述药物用来治疗消化性病症、PEI、胰腺炎、嚢性纤维化、I型糖尿病和/或II型糖尿病，这些用途任选地还包括使用脂肪酶和/或蛋白酶。此外本发明涉及药用组合物，其包含所述的淀粉酶，连同至少一种可药用的辅助材料，任选地包括脂肪酶和/或蛋白酶。本发明还涉及治疗消化性病症、PEI、胰腺炎(急性和/或慢性)、囊性纤维化、I型糖尿病和/或II型糖尿病的方法，其通过施用治疗上有效量的所述淀粉酶，任选地与脂肪酶和/或蛋白酶一起施用。附图简述图1显示表现淀粉酶降解曲线的层析图，所述淀粉酶具有SEQIDNO:1(嗜热脂肪芽孢杆菌淀粉酶变体)的氨基酸1-486的氨基酸序列；图2显示表现来自米曲霉的淀粉酶降解曲线的层析图；图3显示表现胰酶制剂(Pancreatin)降解曲线的层析图；图4显示表现淀粉酶降解曲线的层析图，所述淀粉酶具有SEQIDNO:3的氨基酸1-483(芽孢杆菌属菌种(5fl"7/附sp.)淀粉酶变体)的氨基酸序列；和图5显示表现淀粉酶降解曲线的层析图，所述淀粉酶具有SEQIDNO:2的氨基酸1-481(地衣芽孢杆菌淀粉酶变体)的氨基酸序列。发明详述整本发明涉及用作药物的淀粉酶的药物用途，其中所述淀粉酶与以下序列具有至少50%同一性(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸l-483。本发明还涉及这些淀粉酶用于制备药物的用途，所述药物用于治疗消化性病症、PEI、胰腺炎(急性和/或慢性)、嚢性纤维化、i型糖尿病和/或n型糖尿病。此外，本发明涉及药用组合物，所述药用组合物包含所述的酶，连同至少一种可药用的辅助材料。此外，本发明涉及通过施用治疗上有效量的所述淀粉酶来治疗上述病症的方法。在下文中，将用于本发明的组合物、方法和用途中的淀粉酶称作"本发明的淀粉酶"。在本文的上下文中，淀粉酶是催化淀粉和其它直链与支链寡糖和多糖的内水解(endo-hydrolysis)的酶。在具体的实施方式中，根据本发明使用的淀粉酶具有a-淀粉酶活性，即催化寡糖和多糖中1,4-a-糖苦键的内水解。a-淀粉酶对例如淀粉、糖原和相关的多糖和寡糖以随机方式发挥作用，释放a-构型中的还原基团。在优选的实施方式中，本发明的淀粉酶是a-淀粉酶(分类名称1,4-a-D-葡聚糖葡聚糖水解酶(l,4-alpha-D-glucanglucanohydrolase))。在进一步的实施方式中，本发明的淀粉酶属于淀粉酶的EC3.2.1.-组，例如EC3.2.1.1(a-淀粉酶)、EC3.2.1.2(p-淀粉酶)、EC3.2.1.3(葡聚糖1,4-a-葡糖苷酶、淀粉葡糖芬酶或葡糖淀粉酶)、EC3.2.1.20(a-葡糖苷酶)、EC3.2.1.60(葡聚糖1，4-a-麦芽四糖水解酶(glucanl，4-a-maltotetraohydrolase))、EC3.2.1.68(异淀粉酶)、EC3.2.1.98(葡聚糖1,4-a-麦芽己糖酶(glucan1,4-a-maltohexosidase))或EC3.2.1.133(葡聚糖1,4-a-麦芽糖水解酶(glucanl,4-a-maltohydrolase))。在优选的实施方式中，根据本发明使用的淀粉酶能够归类为或归类为属于EC3.2丄1组。EC号引用NC-IUBMB,AcademicPress,SanDiego,California的EnzymeNomenclature1992，包括分别在Eur.J.Biochem.1994，223,1-5;Eur.J.Biochem.1995，232，1-6;Eur.J.Biochem.1996,237,1-5;Eur.J.Biochem.1997，250,1-6;和Eur.J.Biochem.1999,264，610-650出版的补充文件1-5。所述命名法定期才卜充禾口更確斤；参见例^口http:〃www.chem.qmw.ac.uk/iubmb/enzyme/index.html的万维网。在具体实施方式中，本发明的淀粉酶与以下任一具有至少51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%或至少60%的同一性程度(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸l-483。在另外的具体实施方式中，本发明的淀粉酶与以下任一具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%或至少70%的同一性程度(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。在另外的具体实施方式中，本发明的淀粉酶与以下任一具有至少71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%或至少80%的同一性程度:(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。在其它的具体实施方式中，本发明的淀粉酶与以下任一具有至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或至少90%的同一性程度(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。在更进一步的具体实施方式中，本发明的淀粉酶与以下任一具有至少91°/。、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少99%的同一性程度(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。在进一步的具体实施方式中，本发明的淀粉酶在任一以下序列中包含一个或多个氨基酸的至少一个取代、缺失和/或插入(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。优选地，氨基酸改变对于性质是较不重要的(ofaminornature),即保守的氨基酸取代或插入，其不显著影响蛋白质的折叠和/或活性；小缺失；小的氨基或羧基末端延伸，例如氨基末端曱硫氨酸残基；小接头肽；或通过改变净电荷或其它功能来促进纯化的小延伸，例如多组氨酸序列(tract)、抗原表位或结合域。在上文中，术语"小"独立地表示多至25个氨基酸残基的数目。在优选实施方式中，术语"小"表示多至24、23、22、21或多至20个氨基酸残基。在其它的优选实施方式中，术语"小"独立地表示多至19、18、17、16、15、14、13、12、11或多至10个氨基酸残基。在进一步优选的实施方式中，术语"小"独立地表示多至9、8、7、6、5、4、3、2或多至1个氨基酸残基。在可选的实施方式中，术语"小"独立地表示多至40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26或多至25个氨基酸残基。保守取代的实例是在以下组之内碱性氨基酸组(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸组(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸组(丝氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸组(亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和丙氨酸)、芳族氨基酸组(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)和小氨基酸组(甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸和曱硫氨酸)。可供选择地，保守取代的实例是在以下组之内碱性氨基酸组(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸组(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸组(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸组(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸组(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)和小氨基酸组(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和曱硫氨酸)。通常不改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的，并且由例^口H.NeurathandR.L.Hill,1979,In,TheProteins,AcademicPress,NewYork描述。最普遍发生的交换是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、AWGly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ie、Leu/Va、Ala/Glu和Asp/Gy。在其它实施方式中，本发明的淀粉酶具有的氨基酸序列与以下任一的差异不多于25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12或不多于11个氨基酸(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483;或，其与以下任一的差异不多于10、9、8、7、6、5、4、3、2或不多于1个氨基酸(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。在可选的实施方式中，本发明的淀粉酶具有的氨基酸序列与以下任一的差异不多于40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27或不多于26个氨基酸:(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。在更进一步具体的实施方式中，本发明的淀粉酶是具有以下序列的任一淀粉酶的等位变体(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483,或它们具有淀粉酶活性的片段。本发明的淀粉酶也可以是具有SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12的氨基S臾序列的任一淀粉酶的等位变体。术语等位变体表示占据相同染色体基因座的基因的任何两种或两种以上可选形式。等位变异通过突变天然地发生，并且可导致种群内的多态性。基因突变可以是沉默的(在编码的多肽中无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位变体是由基因的等位变体编码的多肽。本文将术语片段定义为从SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个氨基酸的多肽，优选从以下序列的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个氨基酸的多肽SEQIDNO:1的氨基酸1-481、1-484、l-486或1-513;或SEQIDNO:2的氨基酸1-481，或SEQIDNO:3的氨基酸1-483。优选地，缺失小数目的氨基酸，小如上所定义。更优选地，片段包含至少440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453或至少454个氨基酸残基。最优选地，片段包含至少452、453454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469或至少470个氨基酸残基。甚至更优选地，片段含有至少471、472、473、474、475、476、477、478、479或至少480个氨基酸残基。总之，本发明的一个实施方式涉及用于药物用途的淀粉酶，其中a)所述淀粉酶包含选自下组的氨基酸序列(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483;和/或b)所述淀粉酶是选自下组的氨基酸序列的变体(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481,和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483,其中所述变体与相应的氨基酸序列相差不多于25个氨基酸，并且其中(i)与相应的氨基酸序列相比，所述变体包含一个或多个氨基酸的至少一个取代、缺失和/或插入；和/或(ii)与相应的氨基酸序列相比，所述变体包含至少一个小缺失；和/或(iii)与相应的氨基酸序列相比，所述变体包含至少一个小的N-或C-末端延伸；和/或c)所述淀粉酶是具有选自下组的氨基酸的淀粉酶的等位变体(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483;和/或d)所述淀粉酶是具有选自下组的氨基酸的淀粉酶的片段(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。具体而言，本发明涉及用于药物用途的淀粉酶，其中所述淀粉酶具有选自下组的氨基酸序列(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481、1-484、1-486或1-513，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481,和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。在本发明更进一步的具体实施方式中，淀粉酶源自微生物，例如源自真菌，或源自细菌。细菌的实例是芽孢杆菌属菌抹，例如解淀粉芽孢杆菌、环状芽孑包冲干菌C6ac/〃附">cw/ara)、5acz7/i/^/ma/a/ws、；也衣芽孑包4干菌、巨大芽孢杆菌(Ba"7/wmegafer/wm)、芽孢杆菌属菌种、嗜热脂肪芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌抹；优选源自解淀粉芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、B""7/w/za/m，a/w、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、芽孢杆菌属菌种和嗜热脂肪芽孢杆菌的菌抹；最优选源自嗜热脂肪芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或芽孢杆菌属菌种的菌抹。在本文的上下文中，术语"源自"包括从野生型菌抹能够获得或已经获得的酶；以及，优选地，它们具有至少一个氨基酸残基的至少一个取代、插入和/或缺失的变体。术语变体也包括改组体(shufflants)、杂合体、嵌合酶和共有酶(consensusenzyme)。变体可以用本领域已知的任何方法产生，如定点诱变(site-directedmutagenesis)、F遺才几i秀变、共有4汙生方；去(consensusderivationprocesses)(EP897985)和基因改组(geneshuffling)(WO95/22625、WO96/00343)等。本发明的野生型淀粉酶的非限定性实例是源自下述的野生型淀粉酶地衣芽孢杆菌，例如Swissprot登录名(entryname)AMY—BACLI,初始登录号(primaryaccessionnumber)P06278;解淀粉芽孢杆菌，例如Swissprot登录名AMY—BACAM，初始登录号P00692;巨大芽孢杆菌，例如Swissprot登录名AMY—BACME，初始登录号P20845;环状芽孢杆菌，例如Swissprot登录名AMY—BACCI，初始登录号P08137;嗜热脂肪芽孢杆菌，例如Swissprot登录名AMY—BACST，初始登录号P06279。另外的实例是来自枯草芽孢杆菌，例如Swissprot登录名AMY—BACSU，初始登录号P00691。更进一步的实例是源自Sa"7/w/zfl/wa/a/w的淀粉酶，SEQIDNO:4的氨基酸1-485。根据本发明使用的淀粉酶变体的非限定性实例公开于WO96/23873、WO99/19467、美国专利号4，933，279、EP722490和EP904360。在具体的实施方式中，本发明的淀粉酶(i)不是Swissprot登录名AMY—BACLI，初始登录号P06278;和/或(ii)不是Swissprot登录名AMY—BACST,初始登录号P06279。本发明的淀粉酶进一步的具体实例是包含于以下商品中的淀粉酶Clarase、DexLo、GC262SP、G-ZymeG990、G-ZymeG995、G-ZymeG997、G-ZymeG998、HTAA、Optimax7525、PurastarOxAm、PurastarST、SpezymeAA、SpezymeAlpha、SpezymeBBA、SpezymeDeltaAA、SpezymeDBA、SpezymeEthyl、SpezymeFred(GC521)、SpezymeHPA和Ultraphlow(全部来自Genencor);ValidaseBAA、ValidaseFAA、ValidaseHT340L、ValleyThin340L(全4卩来自ValleyResearch);Avizyme1500、Dextro300L、Kleistase、Maltazyme、Maxamyl、Thermozyme、Thermatex、StarzymeHT120L、StarzymeSuperCone和Ultraphlo。本发明的淀粉酶的具体优选实例如下包含SEQIDNO:1的氨基酸1-481的淀粉酶，例如具有SEQIDNO:1的氨基酸1-481、SEQIDNO:1的氨基酸1-484、SEQIDNO:1的氨基酸1-486或SEQIDNO:1的氨基酸1-513的淀粉酶；具有SEQIDNO:2的氨基酸1-481的淀粉酶；和具有SEQIDNO:3的氨基酸1-483的淀粉酶。在更进一步的具体实施方式中，可是使用额外的淀粉酶。额外的淀粉酶的实例是哺乳动物淀粉酶，和微生物淀粉酶。优选的哺乳动物淀粉酶是胰腺提取物，例如来自猪或牛(ox)的胰腺提取物，如胰酶制剂(pancreatin)。胰酶制剂可以以未包覆(未加工)产品的形式使用，或以配方产品(formulatedproducts)的形式(包有肠溶衣的(entericcoated)(提供对胃酸的抗性)，或非功能性包覆的(包覆但不提供对胃酸的抗性))使用。胰酶制剂可能还包含另外的酶活性组分，如胰脂肪酶、BSSL(BileSaltStimulatedLipase)和/或胰蛋白酶。微生物淀粉酶可以例如源自细菌或真菌菌抹，例如芽孢杆菌属、假单胞菌属、曲霉属或根霉属(W/z/zo/m)。具体而言淀粉酶可源自曲霉属的菌抹，例如黑曲霉、米曲霉或蜂蜜曲霉，例如下述产品的任一商业上可从AmanoPharmaceuticals,Japan获得的源自米曲霉的AmylaseAl，或商业上可从Extract-Chemie,Germany获得的源自蜂蜜曲霉的AmylaseEC。本发明的淀粉酶可与蛋白酶组合使用，有或没有如下所述的脂肪酶。术语"蛋白酶"在本文中定义为水解肽键的酶。它包括属于EC3.4酶组的任何酶(包括其十三个亚类中的每个，这些酶在下文中称作"属于EC3.4.-.-组")。蛋白酶可以是哺乳动物蛋白酶，或微生物蛋白酶。优选的哺乳动物蛋白酶是胰腺提取物，例如，来自猪或牛的胰腺提取物，如胰酶制剂。胰酶制剂可以以未包覆(未加工)产品的形式使用，或以配方产品的形式(包有肠溶衣的，或非功能性包覆的)使用。胰酶制剂可能(potentially)还包含另外的酶活性组分，如胰脂肪酶、BSSL(BileSaltStimulatedLipase)和/或胰淀粉酶。微生物蛋白酶可以是例如基于或源自细菌或真菌菌抹。具体而言蛋白酶可以源自曲霉属(例如米曲霉或蜂蜜曲霉)的菌抹，具体而言是商业上可从AmanoPharmaceuticals,Japan获得的产品Prozyme6(中性，碱性蛋白酶EC3.4.21.63)。细菌蛋白酶的实例是来自芽孢杆菌属和拟诺卡氏菌属(A^caW/o戸/"的蛋白酶，例如具有SEQIDNO:5的氨基酸1-274的氨基酸序列的地衣芽孢杆菌蛋白酶，具有SEQIDNO:6的氨基酸1-188的氨基酸序列的拟诺卡氏菌属菌种蛋白酶，或具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的氨基酸序列的达+>维尔拟诺卡氏菌达松维尔亚种(iVocan^'o/w^c/"Mo"We〃e/subsp.t/owow/〃e/)蛋白酶。SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶可以例如按DK专利申请号200500930、标题为"ProteasesforPharmaceuticalUse(用于医药用途的蛋白酶)"中所述来制备，所述文献在2005年6月24日由SolvayPharmaceuticalsGmbH和NovozymesA/S才是交。SEQIDNO:6-7的氨基酸页1-188的蛋白酶可以例如按WO2001/58276或WO2004/111224中所述来制备。在优选的实施方式中，蛋白酶与以下任一是至少70%同一的(i)SEQIDNO:5的氨基酸1-274，(ii)SEQIDNO:6的氨基酸1-188,和/或(iii)SEQIDNO:7的氨基酸1-188。在(i)、(ii)或(iii)的其它优选实施方式中,同一性程度是至少71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79°/。、80%、810/o、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少99%。在(i)、(ii)或(iii)中任一的可选实施方式中，同一性程度是至少大约50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%或至少69%。可将本发明的淀粉酶与脂肪酶组合使用,有或没有如上所述的蛋白酶。在本文的上下文中，脂肪酶的意思是羧酸酯水解酶EC3丄l.-，其包括活性如EC3.1.1.3三酰甘油脂肪酶、EC3丄1.4磷脂酶A1、EC3.1.1.5溶血磷脂酶、EC3.1.1.26半乳糖脂酶(galactolipase)、EC3.1.1.32磷月旨酶Al、EC3.1.1.73阿魏酸酯酶。在具体实施方式中，脂肪酶是EC3丄1.3三酰甘油脂肪酶。脂肪酶可以是哺乳动物脂肪酶，或微生物脂肪酶。优选的哺乳动物脂肪酶是胰腺提取物，例如来自猪或牛的胰腺提取物，如胰酶制剂。胰酶制剂可以以未包覆(未加工)产品的形式使用，或者以配方产品的形式(包有肠溶衣的，或非功能性包覆的)使用。胰酶制剂可能还包含进一步的酶活性组分，如胰蛋白酶、BSSL和/或胰淀粉酶。微生物脂肪酶可以是例如源自细菌或真菌菌林，例如芽孢杆菌属、假单胞菌属、曲霉属或根霉属。具体而言脂肪酶可以源自根霉属的菌抹，如爪哇根霉、米根霉或德氏根霉，例如商业上可从AmanoPharmaceuticals,J叩an获得的产品LipaseDAmano2000(也称作LipaseD2TM)。在进一步的具体实施方式中，脂肪酶是重组产生的微生物脂肪酶，例如源自真菌如腐质霉属或根毛霉属(W/zfew7wc0r)，源自酵母如念珠菌属(Caw&Wa),或源自细菌如假单胞菌属。在优选的实施方式中，脂肪酶源自疏棉状腐质霉或米赫根毛霉(i^/zomwcor/w'e/ze/)的菌林。疏棉状腐质霉(与细毛嗜热霉(77zenww^c"/fl"wg/mww力同义)脂肪酶(SEQIDNO:9)在EP305216中描述，具体的脂肪酶变体在下述文献中描述，例如WO92/05249、WO92/19726、WO94/25577、WO95/22615、WO97/04079、WO97/07202、WO99/42566、WO00/32758、WO00/60063、WO01/83770、WO02/055679和WO02/066622。优选的脂肪酶变体是包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶，如下(i)SEQIDNO:8的氨基酸+1至+269，(ii)SEQIDNO:8的氨基酸-5至+269，(iii)SEQIDNO:8的氨基酸-4至+269;(iv)SEQIDNO:8的氨基酸-3至+269;(v)SEQIDNO:8的氨基酸-2至+269;(vi)SEQIDNO:8的氨基酸-1至+269，(vii)SEQIDNO:1的氨基酸+2至+269,以及(viii)(i)-(vii)的脂肪酶中两种或更多种的任何混合物-和它们的变体。在具体实施方式中，根据本发明使用的脂肪酶选自(i)、(ii)的脂肪酶，和(i)与(ii)的任意混合物。(i)与(ii)的优选混合物包含至少5%，优选至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或至少95。/。的脂肪酶(i),百分比4吏用Edman方法通过N-末端测序确定，如要求DK专利申请号200500929的优先权的PCT申请中实施例5所述。其它优选混合物是(a)包含35-75%,优选40-70%,更优选45-65。/。的脂肪酶(ii)的组合物；(b)包含20-60%,优选25-55%,更优选30-50%，最优选35-47。/。的脂肪酶(i)的组合物；(c)包含多至30%，优选多至25%,更优选多至20%,最优选多至16。/。的脂肪酶(vii)的组合物；和(d)(a)、(b)和/或(c)的任意组合，如包含45-65。/。的脂肪酶(ii)、35-47。/。的脂肪酶(i)和多至16。/。的脂肪酶(vii)的组合物。SEQIDNO:8和9的脂肪酶可例如基于美国专利号5，869，438中的教导来制备(该美国专利中的SEQIDNO:1是编码SEQIDNO:9的脂肪酶的DNA序列)。SEQIDNO:8的脂肪酶可例如通过在合适的宿主细胞中重组表达DNA序列来制备，所述DNA序列是该美国专利的SEQIDNO:1的修饰序列，所述修饰反映出本文的SEQIDNO:8和9之间的氨基酸差异。这些修饰可以用定点诱变实现，如本领域所了解的。真菌脂肪酶另外的实例是EP785994中所述来自特异腐质霉的角质酶(cutinase),和EP869167中所述来自尖镰孑包CFwsar/Mmox少5/oraw)的磷月旨酶。酵母脂肪酶的实例是来自南极假丝酵母(Caw/Waa"torc"ca)的脂肪酶A和B,其中脂肪酶A在EP652945中有所描述，而脂肪酶B由例如Uppenberg等在Structure,2(1994),293中描述。细菌脂肪酶的实例是EP214761中所述源自洋葱H单月包菌(户sew(iomowascepac/a)的月旨肪酶。在优选的实施方式中，脂肪酶与SEQIDNO:8的脂肪酶或与SEQIDNO:8的氨基酸1-269是至少70%同一的。在另外的优选实施方式中，与SEQIDNO:8或与其氨基酸l-269的同一性程度，是至少71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、卯％、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98Q/。或至少99%。在可选的实施方式中，与SEQIDNO:8或与其氨基酸1-269的同一性程度，是至少约50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%或至少69%。在更进一步优选的实施方式中，脂肪酶，如哺乳动物胰脂肪酶，是1,3-位特异性的脂肪酶。就本发明而言特别优选的酶的组合如下(i)SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶与包含SEQIDNO:1的氨基酸1-481(例如其氨基酸1-481、1-484、1-486或l-513)的淀粉酶组合；(ii)SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶与SEQIDNO:2的淀粉酶组合；(iii)SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶与SEQIDNO:3的淀粉酶组合；(iv)SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶与包含SEQIDNO:1的氨基酸1-481(例如其氨基酸1-481、1-484、1-486或1-513)的淀粉酶组合；(v)SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶与SEQIDNO:2的淀粉酶组合；(vi)SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶与SEQIDNO:3的淀粉酶组合；(vii)包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶与包含SEQIDNO:1的氨基酸1-481(例如其氨基酸1-481、1-484、1-486或1-513)的淀粉酶组合；(viii)包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶与SEQIDNO:2的淀粉酶组合；(ix)包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶与SEQIDNO:3的淀粉酶组合；(x)SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶与包含SEQIDNO:1的氨基酸1-481(例如其氨基酸1-481、1-484、1-486或I-513)的淀粉酶和包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶组合；(xi)SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶与SEQIDNO:2的淀粉酶和包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶组合；(xii)SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶与SEQIDNO:3的淀粉酶和包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶组合；(xiii)SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶与包含SEQIDNO:1的氨基酸1-481(例如其氨基酸1-481、1-484、1_486或l-513)的淀粉酶和包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶组合；(xiv)SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶与SEQIDNO:2的淀粉酶和包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶组合；(xv)SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶与SEQIDNO:3的淀粉酶和包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶组合；(xvi)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶与包含SEQIDNO:1的氨基酸1-481(例如其氨基酸1-481、1-484、1-486或l-513)的淀粉酶组合；(xvii)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶与具有SEQIDNO:2的氨基酸1-481的淀粉酶组合；(xviii)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶与具有SEQIDNO:3的氨基酸1-483的淀粉酶组合；(xix)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶与包含SEQIDNO:1的氨基酸1-481(例如其氨基酸1-481、1-484、1-486或l-513)的淀粉酶和包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶组合；(xx)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶与包含SEQIDNO:2的氨基酸1-481的淀粉酶和包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶组合；和(xi)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶与具有SEQIDNO:3的氨基酸1-483的淀粉酶和包含SEQIDNO:8的氨基酸1-269或2-269的脂肪酶组合。因此，本发明的一个实施方式涉及根据权利要求4或5的与脂肪酶和/或蛋白酶组合的淀粉酶，其中(i)所述淀粉酶选自下组a)包含SEQIDNO:1的氨基酸1-481的淀粉酶，b)具有SEQIDNO:2的氨基酸1-481的淀粉酶，和c)具有SEQIDNO:3的氨基酸1-483的淀粉酶；(ii)所述脂肪酶包含SEQIDNO:8的氨基酸2-269;(iii)所述蛋白酶是选自下组的蛋白酶a)具有SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶，b)具有SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶，和c)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶。其它优选的酶的组合如下(i)与SEQIDNO:5的氨基酸1-274具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:1的氨基酸1-481具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(ii)与SEQIDNO:5的氨基酸1-274具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:2的氨基酸1-481具有至少50。/。同一性的淀粉酶组合；(iii)与SEQIDNO:5的氨基酸1-274具有至少50。/。同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:3的氨基酸1-483具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(iv)与SEQIDNO:6的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:1的氨基酸1-481具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(v)与SEQIDNO:6的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:2的氨基酸l_48l具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(vi)与SEQIDNO:6的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:3的氨基酸1-483具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(vii)与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:1的氨基酸1-481具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(viii)与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:2具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(ix)与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:3的氨基酸1-483具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(x)与SEQIDNO:5的氨基酸1-274具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:1的氨基酸1-481具有至少50%同一性的淀粉酶，及与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的脂肪酶组合；(xi)与SEQIDNO:5的氨基酸1-274具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:2的氨基酸1-481具有至少50°/。同一性的淀粉酶，及与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的脂肪酶组合；(xii)与SEQIDNO:5的氨基酸1-274具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:3的氨基酸1-483具有至少50%同一性的淀粉酶，及与SEQIDNO:8的氨基酸l-269具有至少50%同一性的脂肪酶组合；(xiii)与SEQIDNO:6的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:1的氨基酸1—481具有至少50%同一性的淀粉酶，及与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的脂肪酶组合；(xiv)与SEQIDNO:6的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:2的氨基酸1-481具有至少50%同一性的淀粉酶，及与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的脂肪酶组合；(xv)与SEQIDNO:6的氨基酸1-188具有至少50。/。同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:3的氨基酸1-483具有至少50%同一性的淀粉酶，及与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的脂肪酶组合；(xvi)与SEQIDNO:7的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:1的氨基酸1-481具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(xvii)与SEQIDNO:7的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:2的氨基酸1-481具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(xviii)与SEQIDNO:7的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:3的氨基酸1-483具有至少50%同一性的淀粉酶组合；(xix)与SEQIDNO:7的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:1的氨基酸1-481具有至少50%同一性的淀粉酶，及与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的脂肪酶组合；(xx)与SEQIDNO:7的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:2的氨基酸1-481具有至少50%同一性的淀粉酶，及与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的脂肪酶组合；和(xi)与SEQIDNO:7的氨基酸1-188具有至少50%同一性的蛋白酶，和与SEQIDNO:3的氨基酸1-483具有至少50%同一性的淀粉酶，及与SEQIDNO:8的氨基酸1-269具有至少50%同一性的脂肪酶组合。在(i)-(xi)的优选实施方式中，每个同一性程度独立为，至少51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96。/o、97%、98%或至少99%。因此，本发明的一个实施方式涉及根据权利要求4或5的淀粉酶与脂肪酶和/或蛋白酶的组合，其中(i)所述淀粉酶是如本文所定义的淀粉酶；(ii)所述脂肪酶与具有SEQIDNO:8的氨基酸1-269的脂肪酶具有至少70%的同一性；(iii)所述蛋白酶与选自下组的蛋白酶具有70%的同一性a)具有SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶，b)具有SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶，和c)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶。通常而言，本发明的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶(下文称作"酶，，)可以是天然或野生型酶，其获得自动物，具体而言哺乳动物，例如人或猪的酶；获得自植物，或获得自微生物，但也可以是其显示期望的酶活性的任何突变体、变体、片段等，以及合成酶，如改组、杂合或嵌合酶，和共有酶。在具体的实施方式中，酶是低变应原性变体，将所述酶设计成当曝露于动物包括人时产生降低的免疫应答。将术语免疫应答理解为由曝露于(exposeto)酶的动物的免疫系统产生的任何反应。免疫应答的一种类型是变应性应答，其导致曝露的动物中IgE的水平增加。低变应原性变体可以使用本领域已知的技术制备。例如可将酶与聚合物部分(polymermoieties)接合，所述聚合物部分屏蔽涉及免疫应答的酶的部分或表位。与聚合物的接合可涉及聚合物对酶的体外化学偶联，例如，如WO96/17929、WO98/30682、WO98/35026和/或WO99/00489所述。所述接合可以另外或可选地涉及聚合物对酶的体内偶联。这种接合可以用下述方法实现编码酶的核苷酸序列的遗传工程，在酶中插入编码额外糖基化位点的共有序列和在能够将酶糖基化的宿主中表达酶，参见例如WO00/26354。提供低变应原性变体的另一种方法是编码酶的核苷酸序列的遗传工程，以引起酶的自寡聚，致使所述酶单体可屏蔽其它酶单体的表位，并且由此降低寡聚体的抗原性。这些产品和它们的制备在例如WO96/16177中有所描述。免疫应答中所涉及的表位可以由各种方法鉴定，如WO00/26230和WO01/83559中所述的噬菌体展示方法，或EP561907中所述的随机方法。一旦鉴定了表位，可通过已知的基因操作技术，如定点诱变(参见例如WO00/26230、WO00/26354和/或WO00/22103)改变它的氨基酸序列以产生改变的酶的免疫性质，和/或可在足够接近表位处进行聚合物的接合，以使聚合物屏蔽所述表位。在具体实施方式中，酶为(i)在pH2-8稳定，优选也在pH3-7稳定，更优选在pH4-6稳定；(ii)在pH4-9，优选4-8有活性；(iii)对胃蛋白酶和其它消化蛋白酶(如胰蛋白酶(pancreasprotease)，即主要为胰蛋白酶(trypsin)和胰凝乳蛋白酶)的降解稳定；和/或(iv)在胆汁盐存在下稳定和/或有活性。在优选的实施方式中，本发明的淀粉酶在pH7.0和37。C具有的活性为相对于在最适pH和37。C的活性的至少35%。更优选地，在pH7.0和37°C的活性为在最适pH和37°C的活性的至少40、45、50、55、60、65、70或至少75%(参照实施例3的表2)。在其它优选的实施方式中，本发明的淀粉酶在pH7.0、37。C和5mM胆汁盐存在下具有的活性为相对于在最适pH、37°C和无胆汁盐存在下的活性的至少25%。更优选地，在pH7.0、37。C和5mM胆汁盐存在下具有的活性是在最适pH、37。C和无胆汁盐存在下的活性的至少30、35、40、45、50、55、60或至少65%(参照实施例3的表3)。在更进一步的优选实施方式中，在pH7.0和37。C，本发明的淀粉酶的比活性相对于在pH5.0和37。CSEQIDNO:1的淀粉酶的比活性是至少10%，更优选至少15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或至少70%(参照实施例3的表4)。在其它优选的实施方式中，在pH7.0和37°C和5mM胆汁盐存在下，'本发明的淀粉酶的比活性相对于在pH5.0和37。C和5mM胆汁盐存在下SEQIDNO:1的淀粉酶的比活性是至少10%，更优选至少15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或至少75%(参照实施例3的表5)。以上优选实施方式中涉及的活性可使用还原糖试验合适地测定，例如实施例3中所述，优选使用蜡质种玉米(waxycorn)作为底物。实施例3中描述了详细的步骤。在进一步的、独立的具体实施方式中，本发明的淀粉酶所具有的淀粉降解曲线有以下一种或多种独特的性质(i)检测到作为降解产物的DPI;(ii)DP4的量j氐于DP5的量；(iii)DP4的量j氐于DP6的量；和/或(iv)DP5和/或DP6的量高于DPI的量。单体DPI优选是葡萄糖，并且DP2-DP6产物分别是葡萄糖的二聚物-六聚物。可使用HPLC如实施例4中所述测定降解曲线，即在60或37°C的温度、6.0或5.5的pH温育24小时之后，优选使用蜡质种玉米作为底物，更优选在Ca"存在下进行测定。术语"与......组合"指蛋白酶、脂肪酶和/或淀粉酶根据本发明的组合用途。组合用途可以是同时的、重叠的或顺序的，这三个术语通常按照医师的处方来解释。术语"同时的"指酶同时有活性的环境，例如当它们作为一种或多种单独的药物产品同时施用时，或者如果将它们在一种和同样的药用组合物中施用时。术语"顺序的，，指这样的情况，其中一种和/或两种酶先作用，而第二种和/或第三种酶随后作用。顺序的作用能够通过如下方法这样获得将所述酶作为单独的药物制剂施用，中间有期望的间歇；或者作为一种药用组合物施用，其中对所述酶进行不同的配制(区分(compartmentalize))'例如为了获得不同的释放时间，提供改进的产品稳定性，或为了最优化酶剂量。术语"重叠的"指这样的情况，其中酶活性时期既不完全是同时的，也不完全是顺序的，即存在特定的时期，其中两种酶或全部酶都有活性。术语"一(a)",例如当用于本发明的酶的上下文中时，指至少一种。在具体实施方式中，"一"表示"一种或多种，，或"至少一种"，其也表示一种、两种、三种、四种、五种等。用参数"同一性"描述两个氨基酸序列之间的相关性。就本发明而言，通过使用来自EMBOSS软件包(http:〃emboss.org)2.8.0版的Needle程序，确定两个氨基S吏序列的比对。Needle程序运行Needleman，S.B.andWunsch，C.D.(1970)J.Mol.Biol.48,443-453中描述的全局比对算法(globalalignmentalgorithm)。<吏用的耳又4戈杀巨阵(substitutionmatrix)是BLOSUM62，缺口开放罚分(gapopeningpenalty)是10，缺口延伸罚分(gapextensionpenalty)是0.5。本发明的氨基酸序列("发明序列"；例如SEQIDNO:1的氨基酸1-481)与不同的氨基酸序列("外源序列"；例如SEQIDNO:12的氨基酸l-514)之间的同一性程度计算为将两个序列的比对中精确匹配的氨基酸数目，除以"发明序列"的长度或"外源序列"的长度中较短的一个。结果以百分比同一性表示。当"发明序列"和"外源序列"在重叠中的相同位置具有同一的氨基酸残基时(在下述比对实例中用'T表示)，则发生精确匹配。序列的长度是序列中氨基酸残基的数目(例如SEQIDNO:1的长度是481)。在下述完全假设的比对实例中，重叠是序列1的氨基酸序列"HTWGER-NL";或序列2的氨基S吏序列"HGWGEDANL"。在所述实例中，缺口用"-"表示。假设的比对实例序列1:ACMSHTWGER-NL1IIIII序列2:HGWGEDANLAMNPS因此，序列1对序列2的同一性百分比是6/12=0.5，对应于50%。在具体实施方式中，多肽的氨基酸序列与(wkh),或对于(to)，SEQIDNO:1的氨基酸1-481的同一性百分比用如下方法确定i)使用Needle程序比对两个氨基酸序列，采用BLOSUM62取代矩阵，缺口开放罚分为10,并且缺口延伸罚分为0.5;ii)计算比对中精确匹配的数目；iii)将精确匹配的数目除以两个氨基酸序列中最短序列的长度，和iv)将iii)中除法的结果转换成百分比。与或对于本发明的其它序列例如SEQIDNO:2的氨基酸1-481或SEQIDNO:3的氨基酸1-483的同一性百分比以类似的方法计算。或者，两个氨基酸序列的同一性程度可以用程序"align"确定，所述程序"align"为Needleman-Wunsch比对(即全局比对)。将序列通过所述程序比对，使用默认的记分矩阵BLOSUM50。缺口的第一个残基的罚分是12,对于缺口其它残基的罚分是2。Needleman-Wunsch算法在Needleman,S.B.andWunsch,C.D.,(1970)，JournalofMolecularBiology,48:443-453中有描述，并且所述align程序由Myers和W.Miller在"OptimalAlignmentsinLinearSpace"CABIOS(computerapplicationsinthebiosciences)(1988)4:11-17中描述。"align"是FASTA软件包v20u6版的一部分(参见W.R.PearsonandD.J.Lipman(1988),"ImprovedToolsforBiologicalSequenceAnalysis",PNAS85:2444-2448,禾口W.R.Pearson(1990)"RapidandSensitiveSequenceComparisonwithFASTPandFASTA"MetodsinEnzymology183:63-98)。本发明的任何酶的样品序列或测试序列，与指定序列之间的同一性程度可以按照如下方法确定使用程序"align"来比对所述两个序列。确定比对中完美匹配的数目("N-完美-匹配")(完美匹配指比对中相同位置上为相同的氨基酸残基)。也确定两个进行比对的序列的共有长度(commonlength),即比对(重叠)中氨基酸的总数，包括比对产生的拖尾和前导缺口，如果存在任何这样的缺口("N-重叠")。将同一性程度计算为"N-完美-匹配"和"N-重叠"之间的比率(如果要转换成同一性百分比，则乘以100)。在可选的实施方式中，样品序列或测试序列与特定序列之间的同一性程度可以按照如下方法确定使用软件"align"来比对所述序列。确定比对中完美匹配的数目("N-完美-匹配")(完美匹配指比对中的相同位置上是相同的氨基酸残基)。确定样品序列的长度(氨基酸残基数)("N-样品")。将同一性程度计算为"N-完美-匹配"和"N-样品"之间的比率(如果要转换成同一性百分比，则乘以100)。在另外的可选实施方式中，样品序列或测试序列与特定序列之间的同一性程度也可以按照如下方法确定使用软件"align"来比对所述序列。确定比对序列中完美匹配的数目("N-完美-匹配")(完美匹配指比对中的相同位置上是相同的氨基酸残基)。确定指定序列的长度(氨基酸残基数)("N-指定")。将同一性程度计算为"N-完美-匹配"和"N-指定"之间的比率(如果要转换成同一性百分比，则乘以100)。优选地，重叠是指定序列的至少20%("N-重叠"如上所定义，除以指定序列中氨基酸的数目("N-指定")，乘以100),更优选为至少25。/。、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或至少95%。这表示当将样品序列与指定序列比对时，指定序列的氨基酸的至少20%(优选25-95。/。)最终(endup)包括于重叠中。或者，重叠是指定序列的至少20%("N-重叠"如上所定义，除以如上所定义的"N-样品"，乘以100)，更优选为至少25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75。/。、80°/0、85%、90%或至少95%。这表示当与指定序列比对时，样品序列的氨基酸的至少20%(优选25-95°/。)最终包括于重叠中。本发明的酶的活性能够使用任何合适的试验方法测定。通常，试验-pH和试验-温度可适用于所述酶。试验-pH值的实例是pH2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。试验-温度的实例是30、35、37、40、45、50、55、60、65、70、80、90或95。C。优选的pH值和温度是在生理范围，如pH值4、5、6、7或8，和温度30、35、37或40。C。合适的试验方法在实验部分和DK专利申请号200500929和200500930以及相应的PCT申请中描述。其它实例是用于蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性的Ph.Eur.试验。药物在本文的上下文中，术语"药物"指化合物，或化合物的混合物，其治疗、预防和/或减轻疾病的症状，优选治疗和/或减轻疾病的症状。药物可以由医师开出处方，或者可以是非处方(over-the-counter)产品。药用组合物本发明的酶的分离、纯化和浓缩可以通过常规方法进行。例如，它们可以通过常规方法从发酵液中回收，所述常规方法包括但不限于，离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，并用本领域已知的各种方法进一步纯化，所述方法包括但不限于，层析(例如，离子交换、亲和、疏水、层析聚焦和大小排阻)、电泳方法(例如，制备型等电聚焦)、差别溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见，例如，ProteinPurification,丄-CJansonandLarsRyden,editors,VCHPublishers,NewYork,1989)。例如，编码本发明的淀粉酶的DNA(例如分別编码SEQIDNO:1-4的SEQIDNO:13-16)可如本领域已知的在芽孢杆菌属宿主细胞中重组表达，并且通过如离心、过滤、超滤和(如果需要的话)除菌过滤(germ-filtration)等处理步骤从发酵液中纯化。额外的、任选的处理步骤包括各种类型的层析，例如，离子交换层析和疏水相互作用层析。合适的疏水柱材料是丁基或苯基，并且这些柱是商业上可获得的，例如，从Pharmacia获得。SEQIDNO:1、2和3的淀粉酶的pi分别是5,7、7.3和8.8，对于全部三种淀粉酶由SDS-PAGE测定的分子量是大约55kDa。在具体实施方式中，将每个酶的浓缩固体或液体制备物单独制备。这些浓缩物也可以，至少部分地，单独进行配制，如下所更详细解释的。在进一步具体的实施方式中，将酶以固体浓缩物形式包括于本发明的药用组合物中。酶能够通过本领域已知的各种方法形成固态。例如，固态可以是结晶，其中酶分子以高度有序的形式排列；或是沉淀物，其中酶分子排列形式有序性较低，或是无序形式。结晶可以例如在接近酶的pl的pH和低电导率(conductivity)实现，所述电导率例如10mS/cm或更低，如EP691982所述。各种沉淀方法是本领域已知的，包括用盐(如硫酸铵和/或疏酸钠)沉淀；用有机溶剂(如乙醇和/或异丙醇)沉淀；或用聚合物(如PEG(聚乙二醇))沉淀。或者，能够用本领域已知的各种方法通过去除溶剂(通常为水)而从溶液沉淀酶，所述方法例如冻干、蒸发(例如在减压下)和/或喷雾干燥。在进一步具体的实施方式中，酶的固体浓缩物中活性酶蛋白的含量为固体浓缩物中总蛋白含量的至少50%(重量/重量)。在更进一步具体的实施方式中，活性酶蛋白的含量相对于固体浓缩物的总蛋白含量是至少55、60、65、70、75、80、85、90或至少95%(重量/重量)。能够如本领域已知的进行测量蛋白含量，例如通过光密度计(densimeter)扫描考马斯染色的SDS-PAGE凝胶，例如使用来自BIO-RAD的GS-800校准的光密度计；通过使用商业试剂盒，如ProteinAssayESL,定购号1767003，其商业上可从Roche获得；或根据WO01/58276的实施例8所述的方法。优选地，淀粉酶酶蛋白组成根据本发明使用的固体脂肪酶浓缩物的蛋白i普(proteinspectmm)的至少50%,更优选至少55、60、65、70、75、80、85、卯、92、94、95、96或至少97%，如通过光密度计扫描考马斯染色的SDS-PAGE凝胶所测定的。本发明的药用组合物包含酶，所述酶优选为浓缩酶制备物的形式，更优选固体浓缩物的形式，连同至少一种可药用的辅助材料或补充(subsidiary)材料，如(i)至少一种载体和/或赋型剂；或(ii)至少一种载体、赋型剂、稀释剂，和/或佐剂。任选的其它组分的非限定性实例(全部为可药用的)是崩散剂(disintegrator)、润滑剂、緩冲剂、增湿剂、防腐剂、增香剂、溶剂、增溶剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂、推进剂和媒介物(vehide)。通常，根据所述医学适应症，可以针对本领域已知的所有施用方式(优选包括肠施用(通过消化道))来设计本发明的组合物。因此，组合物可以为固体、半固体、液体或气体形式，如片剂、胶嚢、粉剂、颗粒剂(granule)、微球(microsphere)、软膏(ointment)、乳膏(cream)、泡沫、〉容液、才全剂、注射剂、吸入剂、凝胶、微球、洗剂(lotion)和气溶胶。医务工作者将了解选择最合适的施用途径，并理所应当地避免潜在的危险或不利的施用途径。下述方法和辅助材料因此也仅为示例性的而绝非用于限制。对于固体口服制备物，所述酶能够单独使用或与合适的添加剂组合使用，以制成小丸(pellet)、微丸(micropellet)、片剂、微片剂、粉剂、颗粒剂或胶嚢，例如，与常规载体组合使用，如乳糖、甘露醇、玉米淀粉或马铃薯淀粉；与赋型剂或粘合剂组合使用，如结晶状或微结晶状纤维素、纤维素衍生物、阿拉伯胶(acacia)、玉米淀粉或明胶；与崩散剂组合使用，如玉米淀粉、马铃薯淀粉或羧曱基纤维素钠；与润滑剂组合使用，如巴西棕榈蜡(carnaubawax)、白蜡、虫胶(shellac)、无水胶状硅石(waterlesscolloidsilica)、从1500到20000的聚乙二醇(PEG，也称作macrogol),特别是PEG4000、PEG6000、PEG8000,聚维酮(povidone),滑石，monolein或硬脂酸镁；并且如果需要，与稀释剂、佐剂、緩沖剂、润湿剂、防腐剂如对羟基苯曱酸曱酯(E218)、着色剂如二氧化钛(E171),和增香剂如蔗糖、糖精、橙油、柠檬油和香兰素(vanillin)组合使用。口服制备物是用于治疗PEI的医学适应症的优选制备物的实例。还能够将所述酶非常常规地配制成液体口服制备物，通过将它们溶解、悬浮或乳化在水溶剂如水中，或非水溶剂中，如植物性或其它类似的油、合成的脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸的酯、丙二醇、聚乙二醇如PEG4000,或低级醇，如直链或支链C1-C4醇，例如2-丙醇；并且如果需要，与常规补充材料或添加剂组合使用，如增溶剂、佐剂、稀释剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、賴-定剂和防腐剂。此外，所述酶通常可通过与各种基底(bases)例如乳化基底(emulsifyingbase)或水溶性基底(water-solublebase)混合制成栓剂用于直肠施用。所述栓剂可包括在体温熔化而在室温固化的々某介物如可可脂(cocoabutter)、碳蜡(carbowax)和聚乙二醇。使用脂质体作为递送媒介物是另一种通常可能感兴趣的方法。脂质可以是已知的形成脂质体的脂质(liposomeforminglipid)的任何有用组合，包括阳离子或两性离子的脂质，例如磷脂酰胆碱。剩余的脂质通常将是中性或酸性脂质，例如胆固醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油等。对于制备脂质体，可以使用Kato等(1991)J.Biol.Chem.266:3361所述的方法。可以提供用于口服或直肠施用的单位剂型如糖浆、酏剂、粉剂和悬浮剂，其中每剂量单位，例如，一茶匙、一大汤匙、胶嚢、片剂或栓剂，包含预定量的酶。相似地，用于注射或静脉内施用的单位剂型可将酶包含在组合物中作为无菌水、生理盐水或其它可药用载体的溶液。术语"单位剂型，，用于本文指适合作为人和动物受试者单元剂量(unitarydosage)的物理上的离散单位(physicallydiscreteunit),每单位含有预定量的酶，所述酶的量足以产生期望效果。在具体实施方式中，本发明的药用组合物用于肠施用，优选口服施用。在进一步的具体实施方式中，口服组合物是(i)包含酶晶体的液体组合物；(ii)(高度)純化酶的沉积物的液体悬液；(iii)包含固体或溶解形式的酶的凝胶；(iv)固定化酶或吸附于颗粒上的酶等的液体悬浮剂；或(v)以含酶粉剂、小丸、颗粒剂或微球形式存在的固体组合物，如果需要，以片剂、胶囊等形式存在的固体组合物，可任选地将所述固体组合物包覆，例如用酸稳定的包覆物包覆。在组合物的另一个具体的实施方式中，对酶进行区分(compartmentalize),即4皮此分离，例如通过单独包覆(sepamtecoating)的方法。在组合物的更进一步的具体实施方式中，将蛋白酶与组合物的其它酶组分分隔，所述其它酶组分如脂肪酶和/或淀粉酶。酶的剂量变化很大，其依赖于待施用的具体的酶、施用频率、施用方式、症状的严重性和受试者对副作用的易感性等。一些特定的酶可能比其它的酶更有效。本发明的酶的固体口服制备物的实例包含(i)淀粉酶，其与以下序列具有至少50%同一性:(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸l-483;(ii)蛋白酶，其与选自下组的蛋白酶具有至少70%同一性a)具有SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶，b)具有SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶，和c)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶；和/或(iii)脂肪酶，其与具有SEQIDNO:8的氨基酸1-269的脂肪酶具有至少70%同一性；其中优选(i)、(ii)和(iii)的酶的预期每曰临床剂量如下(全部以mg酶蛋白每kg体重(bw)表示)对于(i)的淀粉酶0.001-250、0.005-100、0.01-50或0,05-10mg/kgbw;对于(ii)的蛋白酶0.005-500、0.01-250、0.05-100或0.1-50mg/kgbw;对于(iii)的脂肪酶0.01-1000、0.05-500、0.1-250或0.5-100mg/kgbw。本发明的酶的固体口服制备物的优选实例包含(i)包含SEQIDNO:1的氨基酸1-481的淀粉酶；(ii)包含SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶；和/或(iii)包含SEQIDNO:8的氨基酸2-269的脂肪酶。(i)、(ii)和(iii)的酶的预期每日临床剂量的实例如下(全部以mg酶蛋白每kg体重(bw)表示)对于(i)的淀粉酶0,01-50、0.05-10或0.1-5mg/kgbw;对于(ii)的蛋白酶0.05-100、0.1-50或0.5-25mg/kgbw;对于(iii)的月旨肪酶0.1-250、0.5-100或1-50mg/kgbw。为了口服施用时更好的稳定性，可对酰胺(肽)键以及氨基和羧基末端进行修饰。例如，可将羧基末端酰胺化。可通过将本发明的酶并入小丸中来制备本发明的药用组合物的具体实施方式，其适合于治疗消化性病症、PEI、胰腺炎、嚢性纤维化、I型糖尿病和/或n型糖尿病。所述小丸通常可包含io-90%(重量/重量，相对于所得小丸的干重)生理上可以接受的有机聚合物，10-90%(重量/重量，相对于所得小丸的干重)的纤维素或纤维素衍生物，和80-20%(重量/重量，相对于所得小丸的干重)的酶，每种情况下，使有机聚合物、纤维素或纤维素衍生物和酶的总量达到100%。生理上可以接受的有机聚合物可选自下组聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇3000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000、聚乙二醇20000、羟丙基曱基纤维素、聚氧乙烯(polyoxyethylen)、聚氧乙烯-聚氧丙烯的共聚物(copolymersofpolyoxyethylene-polyoxypropylen)和所述有机聚合物的混合物。聚乙二醇4000优选作为生理上可以接受的有机聚合物。纤维素或纤维素衍生物可以例如选自纤维素、乙酸纤维素、纤维素脂肪酸酯、硝酸纤维素、纤维素醚、羧曱基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、曱基纤维素、曱基乙基纤维素和曱基羟丙基纤维素。纤维素，特别是微晶纤维素优选作为纤维素或纤维素衍生物。所得小丸可以用合适的肠溶衣包覆，用其它非功能性包覆物包覆或不进行这种包覆直接使用。此外，可将所得小丸填充入胶嚢如硬明胶胶嚢或不含明胶的胶嚢，所述胶嚢的大小适合治疗上文详细描述的病症或疾病。在本发明的实施方式中，可产生自不同酶类型的小丸，特别是产生自脂肪酶、蛋白酶和/或淀粉酶的小丸填充入所述胶嚢。当用不同酶类型填充胶囊时，通过向胶囊添加指定量的脂肪酶、蛋白酶和/淀粉酶中的任一种，可使单一酶类型(即脂肪酶、蛋白酶或淀粉酶)的剂量适合于某个适应症组或某个患者亚组的特定需要，即可产生其中脂肪酶:蛋白酶:淀粉酶的具体比例不同的胶嚢。本发明的脂肪酶的优选药用组合物在WO2005/092370中描述，特别是包含本文提到的优选赋形剂的配制物(formulation)。在特别优选的实施方式中，药用组合物包含单、二和三酰基甘油酯和脂肪族C6-C22羧酸的聚乙二醇(PEG)单酯和二酯的聚乙二醇甘油酯(macrogolglyceride)混合物，并且也可能包含小部分的甘油和游离聚乙二醇。包含于聚乙二醇甘油酯混合物中的聚乙二醇(PEG)优选为平均每分子有6个到最多40个环氧乙烷单元的PEG，或优选为分子量在200-2000的PEG。本发明的另一个方面提供本发明的酶的药用组合物，其包含由表面活性剂、共表面活性剂(co-surfactant)和亲脂相组成的体系，所述体系具有大于或等于10的HLB值(亲水-亲脂平衡，Hydrophilic-Lip叩hilicBalance)和高于或等于30。C的熔点。在优选实施方式中，所述体系具有10-16的HLB值，优选12-15，和30-600°C,优选40-50(TC的熔点。具体而言，通过HLB值和熔点表征的体系是单、二和三酰基甘油酯与聚乙二醇(PEG)和具有8-20,优选8-18个碳原子的脂肪族羧酸的单酯和二酯的混合物，由此聚乙二醇优选每分子具有大约6至大约32个环氧乙烷单元，并且所述体系任选地包含游离甘油和/或游离聚乙二醇。这种体系的HLB值优选用PEG的链长调控。这种体系的熔点通过脂肪酸的链长、PEG的链长和脂肪酸链的饱和度调控，并且因此受到制备聚乙二醇甘油酯混合物的起始油(startingoil)的调控。"脂肪族C8-C18羧酸"指混合物，其中将辛酸(C8)、癸酸(CIO)、月桂酸(C12)、肉豆蔻酸(C14)、棕榈酸(C16)和硬脂酸(C18)以显著而可变的比例包含在内，如果这些酸是饱和的，和相应的不饱和C8-C18羧酸。这些脂肪酸的比例可以根据起始油而变化。这样的单、二和三酰基甘油酯和聚乙二醇(PEG)与具有8-18个碳原子的脂肪族羧酸的单酯和二酯的混合物，可以例如通过分子量为200-1500的聚乙二醇和起始油之间的反应获得，所述起始油由脂肪酸的甘油三酸酯混合物组成，所述脂肪酸选自包含以下脂肪酸的组辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚麻酸，单独存在或者作为混合物。任选地，这种反应的产物也可包含小比例的甘油和游离聚乙二醇。这些混合物是商业上可获得的，例如以商品名Gelucire⑧获得。本发明的一个有利的实施方式提供已知商品名为Gelucire的产品，特别是"Gelucire50/13"和/或"Gelucire44/14"，所述商品代表适合用于根据本发明的药物制备物中的混合物。Gelucire50/13是混合物，包含单、二和三酰基甘油酯和聚乙二醇的单酯和二酯，分别具有40%-50%的棕榈酸(<:16)和48%-58%的硬脂酸((318),组成结合脂肪酸(boundfattyacid)的主要部分。在每种情况下辛酸(C8)和癸酸(C10)的比例少于3%，并且在每种情况下月桂酸(C12)和肉豆蔻酸(C14)的比例少于5%。Gelucire44/14是混合物，包含单、二和三酰基甘油酯和聚乙二醇的单酯和二酯，各比例为棕榈酸(C16)4-25。/。，硬脂酸(C18)5-35%，辛酸(C8)少于15%,癸酸(C10)少于12%,月桂酸(C12)30-50。/o和肉豆蔻酸(C14)5-250/0。例如，能够通过使用棕榈仁油和聚乙二醇1500的醇解/酯化反应制备Gelucire44/14。本发明的优选实施方式提供本发明的酶的药用组合物，其包含的体系含有单、二和三酰基甘油酯与脂肪族C8-C18羧酸的聚乙二醇单酯和二酯的混合物，并还可能含有小比例的甘油和游离聚乙二醇，所述体系具有在4(TC-55。C的熔点和12-15的HLB值。更优选地，所述体系具有在44。C-50。C的熔点和在13-14的HLB值。或者，所述体系具有大约44。C的熔点和14的HLB值，或所述体系具有大约5(TC的熔点和13的HLB值。处理方法本发明的淀粉酶，任选地与脂肪酶和/或蛋白酶组合(本发明的酶)，在对动物中各种疾病或病症的治疗处理和/或预防处理中是有用的。术语"动物"包括所有动物，特别是人类。动物的实例是非反刍动物和反刍动物，如绵羊、山羊和牛，例如肉牛(cattlebeef)和奶牛。在具体实施方式中，动物是非反刍动物。非反刍动物包括单胃动物，例如猪(包括但不限于，小猪、正在生长的猪(growingpigs)和母猪(sow));家禽如火鸡、鸭和小鸡(chickens)(包括但不限于雏鸡(broilerchick)、蛋鸡(layer));牛犊(youngcalves);宠物如猫和狗；和鱼(包括但不限于鲑鱼(salmon)、鳟鱼(trout)、罗非鱼(tilapia)、鲶鱼(catfish)和鲤鱼(carp));和曱壳类动物(包括但不限于河奸(shrimp)和对坏(prawn))。在具体实施方式中，动物是哺乳动物，更具体为人。例如，所述酶对于消化性病症如消化不良或胃弱(dyspepsia)等的治疗有用，所述消化性病症经常由消化酶的产生不足和/或向胃肠道的分泌不足引起，所述消化酶通常分泌自胃和胰腺。此外，所述酶对PEI的治疗特别有用。能够使用Borgstr6m测试(JORJPancreas(Online)2002;3(5):116-125>睑证PEI,并且它可能由以下疾病和症状导致如胰腺癌、胰腺和/或胃的外科手术，例如胰腺的全部或部分切除术、胃切F余术、后胃肠分;危术(postgastrointestinalbypasssurgery)(例^口BillrothII式胃肠造口吻合术)；慢性胰腺炎；施-戴综合征(ShwachmanDiamondSyndrome);胰腺或总胆管的管梗阻(例如来自肿瘤)；和/或嚢性纤维化(遗传性疾病，其中稠粘液阻塞胰腺管)。所述酶也可以对急性胰腺炎的治疗有用。可以如EP0600868中概括描述的来测定所述酶对消化性病症的作用效果；其中实施例2描述用于测定在胃条件下的脂肪酶稳定性测试的体外消化性测试，而实施例3描述在存在胆汁盐时用于测定脂肪酶活性的体外消化性测试。可以针对蛋白酶和淀粉酶建立相应的测试。WO02/060474也公开了合适的测试，例如(l)用于测定猪的测试伺料中脂质消化的体外测试，和(2)用胰腺机能不全的猪进行的体内试验，测定其中脂肪、蛋白和淀粉的消化性。在具体实施方式中，使用实施例2中用于淀粉酶效能的体内筛选测试测定本发明的淀粉酶的效果。作为另一个实例，酶对I型和/或II型糖尿病(D/a/7etewe肌fM力的治疗有用，特别是在糖尿病治疗中对经常伴随这种病症的消化性病症的辅助治疗有用，以逐渐减少晚期并发症(latecomplication)为目的。可以用WO00/54799中描述的一个或多个方法来确定酶对糖尿病的效果，例如通过控制糖基化血红蛋白的水平，血糖水平，〗氐血糖发作(hypoglycaemicattack),脂溶性维生素如维生素A、D和E的状态，胰岛素的必需每日剂量，体重指标和高血糖期。因为这些实施方式旨在说明本发明的几个方面。任何等同的实施方式应包含于本发明的范围内。事实上，除了本文所示和所述之外对本发明的各种修饰，根据前面的描述，对本领域的技术人员是显而易见的。这些修饰也应包含于所附权利要求的范围内。在发生冲突的情况下，以包括定义的本公开为准。本文引用了各种文件，所述文件的公开内容通过引用完全并入本文。实施例实施例1:酶试验淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性可以使用FIP试验(F6d6rationInternationalePharmaceutique)测定，1FIP-单位=1Ph.Eur.-单位(欧洲药典)。这些试验在F6d6rationInternationalePharmaceutique，ScientificSection:InternationalCommissionforthestandardisationofpharmaceuticalenzymes,a)"PharmaceuticalEnzymes,"Editors:R.Ruyssen和A.Lauwers,E.StoryScientia,Ghent,Belgium(1978),b)EuropeanPharmacopoeia中描述。也可参见DeemesteretalinLauwersA,Scharp6S(eds):PharmaceuticalEnzymes,NewYork,MarcelDekker，1997,p.343-385。酶标准品可从InternationalCommissiononPharmaceuticalEnzymes,CentreforStandards,Harelbekestraat72，B-9000Ghent^曰狄付。淀粉酶FIP试验根据欧洲药典5.1中公布的方法相对于FIP提供的胰酶制剂标准品分析胰酶制剂的淀粉分解活性。对于测定根据本发明使用的淀粉酶的淀粉分解活性，对FIP描述的用于微生物淀粉酶的淀粉分解活性试验进行修饰。原则上，淀粉酶于pH5.8和恒温(37.0+/-O.rC)在氯化钠和氯化钙的存在下将淀粉水解。在碱性溶液中，得自水解反应的还原基团与碘反应，并且用硫代硫酸盐滴定过量的碘。将淀粉酶的一个单位定义为在限定的条件和底物下，每分钟水解1微摩尔糖苷键的酶量。试剂底物溶液底物是可溶性淀粉(例如Merck，No.101252)。在开启容器时测定每个批次可溶性淀粉的含水量。向等同于10.0g干底物的量的可溶性淀粉添加50mL纯(过滤/离子交换)水并且混合。将该悬液在不断搅拌的同时加入800mL沸腾的纯水中。用每次10mL连续量的纯水清洗容器几次，并且将洗涤的水添加至热淀粉溶液中。在不断搅拌下加热至沸腾。冷却至室温并且用纯水稀禾奪至1000mL。緩沖(乙酸)溶液pH5.8(0.2mol/L):将12g乙酸、1g氯化钠和544mg氯化钙溶解在大约800mL水中。用氢氧化钠溶液(大约10N)调节pH至5.8。稀释至1000mL。乙酸，CH3COOH，p.a.氯化钠，NaCl，p.a.氯化钓x2H20,p.a.0.25N氢氧化钠1N氪氯酸0.1N碘溶液(例如Titrisol(Merck9910),用纯水稀释)0.1N硫代硫酸钠溶液石克酸(p.a.)20%:向4体积4分的水小心地添加1体积4分的石克酸96%。真菌淀粉酶参照标准品FIP(BatchNo.2;55310FlP-U/g，条件25。C无氯化钓)。质量控制悬液(真菌淀粉酶参照标准)溶解精确称重的参照标准品从而使溶液产生2-4mL的硫代硫酸盐滴定体积(例如称重大约12-15mg的真菌淀粉酶标准品并且溶解在100ml緩冲溶液中)。质量控制悬液仅用于每天监测测试体系。测试悬液溶解精确称量的测试样品从而使溶液产生2-4mL的硫代硫酸盐滴定体积。方法测试样品对于每个测量，在300mLErlenmeyer摇瓶中制备含有25.0mL底物溶液和10.0mL0.2M乙酸(盐)緩沖溶液的反应溶液。用橡胶塞将其塞紧，并且置于恒温(37.0+/-0.1。C)水浴中。一旦底物混合物达到恒温，通过添加2.0mL测试悬液开始反应。简单地摇动并且在37。C精确温育IO分钟。通过添加4mL盐酸立即终止反应。在搅拌的同时添加10mL0.1N碘溶液、25mL0.25N氢氧化钠和20mL用于清洗器壁的纯水。将混合物在完全黑暗中放置15分钟。添加4mL硫酸并且使用微量滴定管(microburette)用硫代硫酸钠溶液滴定所述溶液。计算两次测定的平均。质量控制样品与用于测试样品的方法所述相同，两次重复测定质量控制悬液的活性。使用2.0mL参照悬液。空白值制备测试悬液和参照悬液的空白值。重复如上所述的方法，但在添加测试溶液和参照溶液之前添加4mL1N氢氯酸。使用以下等式计算淀粉酶活性，以每g测试样品的单位表示(ntJ-nUB)x5x1，000测试溶液[ml]淀粉酶单位2mlx称量的样品[mg][g]测试样品nU:在测试悬液的滴定中使用的0.1N硫代硫酸钠的消耗[mL];nUB:在测试悬液的空白滴定中使用的0.1N硫代疏酸钠的消耗[mL];监测样品(真菌参照样品)的测量活性是97500U/g，范围是平均数+/-3xSD，特别是+Z-6000U/g的范围。淀粉酶可选地，可使用以下淀粉酶试验底物Phadebas片剂(PharmaciaDiagnostics;交联、不溶、蓝色的淀粉聚合物，将其与牛血清白蛋白和緩冲物质混合，并制成片剂)。试验温度37°C试验pH:4.3(或7.0，如果需要)反应时间20分钟在悬浮于水中后，将淀粉用oc-淀粉酶水解，产生可溶的蓝色片段(fragment)。所得蓝色溶液于620nm测得的吸光度是a-淀粉酶活性的函数。一个真菌a-淀粉酶单位(lFAU)是在标准试验条件下每小时分解5.26g淀粉(Merck,AmylumsolubileErg.B.6，批号9947275)的酶量。更详细的试验说明APTSMYQI-3207可向NovozymesA/S，Krogshoejvej36，DK-2880Bagsvaerd,Denmark请求获得。脂肪酶底物对硝基苯基(pNP)戊酸试验pH:7.7试验温度40°C反应时间25分钟带有黄色的消化产物在405nm有特征吸收。用分光光度法确定它的量。一个脂肪酶单位是在给定试验条件下，每分钟释放1微摩尔可滴定的丁酸的酶量。更详细的试验说明AF95/6-GB可向NovozymesA/S，Krogshoejvej36,DK-2880Bagsvaerd，Denmark请求获得。蛋白酶底物Suc-AAPF-pNA(SigmaS-7388)。试验緩冲液100mM琥珀酸、100mMHEPES(SigmaH-3375)、100mMCHES(SigmaC-2885)、100mMCABS(SigmaC-5580)、lmMCaCl2、150mMKCl、0.01%TritonX-100，用HC1或NaOH调节至pH9.0。试验温度25°C。将300(al稀释的蛋白酶样品与1.5ml试-睑緩沖液混合，通过加入1.5mlpNA底物(50mg溶于1.0mlDMSO中，并用0.01%TritonX-100进一步稀释45x)开始活性反应，并且在混合后，用分光光度计监控A4Q5的增加作为蛋白酶活性的量度。在活性测量之前稀释蛋白酶样品，以确保所有活性测量结果都落入试验的剂量-应答曲线的线性部分中。实施例2:淀粉酶效能的体内筛选测试在雌性G6ttingen迷你猪(Ellegaard)中测试SEQIDNO:1的氨基酸1-486、SEQIDNO:2的氨基酸1-481和SEQIDNO:3的氨基酸1-483的纯化芽孢杆菌属淀粉酶，以及源自米曲霉的纯化真菌淀粉酶，其与SEQIDNOs:1-3中任一的同一性在50%以下。通过结扎胰管诱导迷你猪的胰腺外分泌机能不全(PEI),并且配以回盲折返插管(ileo-caecalre-entrantcannula),上述全部在氟烷麻醉下进行，体重为大约25kg，如Tabelingetal"J.1999，Studiesonnutrientdigestibilities(pre-caecalandtotal)inpancreaticduct-ligatedpigsandtheeffectsofenzymesubstitution,J.Anim.Physiol.A.Anim.Nutr.82:251-263(下文中称为"Tabeling1999，，)；和Gregoryetal.,J.1999.Growthanddigestioninpancreaticductligatedpigs,Effectofenzymesupplementationin"BiologyofthePancreasinGrowingAnimals"(SGPierzynowski&R.Zabielskieds)，ElsevierScienceBV,Amsterdam,pp381-393(下文中称为"Gregoryetal1999")中所述。在研究开始之前，允许用至少4周的时间从外科手术中恢复。在研究开始前，通过粪便胰凝乳蛋白酶测试(商业上可从ImmundiagnostikAG,Wiesenstrasse4,D-64625Bensheim,Germany获得，目录号K6990)确认每头猪的PEI状态。在研究过程中，将猪圏养在改良的代谢笼(modifiedmetabolismcage)中，采用12:12小时的明-暗循环，并且允许自由饮水，每日喂食两餐。测试餐包含15.4。/。蛋白质、69%淀粉和2.1%脂肪，并具有以下组成(以g/100g干物质表示)家禽肉粉7.1;鱼粉2.45;酪蛋白4.1;小麦粉20.65;带壳/脱壳稻(shelledrice)9,8;马铃薯淀粉7.7;玉米淀粉39.8;纤维素粉3.0;维生素5.3(按照营养需求)。用250g的这种测试餐与l升水、0.625gCr;z03(三氧化二铬)混合来喂猪，并在喂食前即刻将不同量的淀粉酶(O、7500、18750、90000FIPU淀粉酶/餐，参见实施例l)混入其中。在回肠中第一次出现食物标记(绿色食糜)后，持续收集总共6小时的回肠食糜，在收集之后立即在-20。C冷冻以避免样品的任何细菌发酵。在单独的测定之间允许有至少一天的沖洗(washout)。将冷冻样品冷冻干燥、研磨并且分析干物质(DM)和淀粉。在103。C温育8小时后冻干，然后以重量计估计DM;在酸水解之后以旋光法分析淀粉，并且以重量分析法估计糖。将0203氧化成铬酸盐，并且通过在365nm的消光(分光光度计)计算铬含量，如Petry和Rapp在ZeitungfUrTierphysiologie(1970):vol.27,p.181-189中所述。消化性根据以下公式进行表观盲肠前淀粉消化性(apparentpre-caecalstarchdigestibility)的计算，其中将Cr203和淀粉表示g/100g干物质表观消化性(％)=100-「饲料中的％02(^.样品中的％淀粉.ioo"l1_样品中的％0"203饲料中的％淀粉」表观淀粉消化性结果如下表1中所示。表1:<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>从表1中的结果显而易见的是，根据本发明的淀粉酶表现远胜于已知的米曲霉淀粉酶，并且优于已知的胰酶制剂制备物。本发明的淀粉酶在淀粉消化性上引起强烈且依赖于剂量的改进，其在测试的最低剂量已显示出高效的改进。实施例3:存在和不存在胆汁盐时的淀粉酶pH曲线为了用于PEI和相关疾病的治疗中，优选胰替代酶在大约pH6-7(小肠上部的通常条件)具有高活性。本实验用于测定在添加和不添加胆汁盐时，四种a-淀粉酶、三种本发明的细菌淀粉酶和现有技术的真菌米曲霉淀粉酶的pH曲线。才才泮+禾。方法酶用于本研究的淀粉酶是SEQIDNO:1的氨基酸1-486("SEQl")、SEQIDNO:2的氨基酸1-481("SEQ2")和SEQIDNO:3的氨基酸1-483("SEQ3")的纯化芽孢杆菌属淀粉酶，和用于比较的源自米曲霉的纯化真菌淀粉酶("米曲霉")、商业Fungamyl淀粉酶产品的淀粉酶(其可从NovozymesA/S,Krogshoejvej36,DK-2880Bagsvaerd,Denmark获得)。pH-曲线-还原糖试验酶緩冲液50mM乙酸(盐)(acetate)、50mM咪唑、50mM丙二酸、1mMCaCl2、0.01%TritonX-100。用HCl/NaOH调节至pH2.0、3.0、4.0、5.0、6.0或7.0。底物緩冲液1.5mg/ml支链淀粉(蜡质种玉米，例如来自Cerestar的Waxycom04201,批次WM5671)、50mM乙酸、50mM咪唑、50mM丙二酸、1mMCaCl2。用HCl/NaOH调节至期望的pH(如上)。在100。C温育5分钟。制备包含或不包含5mM胆汁盐(即牛黄胆酸钠BRP,lot2，来自Ph.Eur或FIP，商业上也可从例如LGCpromochem获得，500g/mol)的底物緩沖液。通过还原糖试验片企测淀粉酶活性。简而言之，将50pl酶(在酶緩沖液中稀释以使其落入试验的线性范围)与100fil底物缓沖液在PCR-MTP(Thermo-Fast96，ABgene,目录号AB-0600)中混合。将MTP's在37。C温育15分钟，其后添加75pl终止溶液(100mM对羟基苯甲酸酰肼、180mM酒石酸钾钠、2。/。NaOH)，并且将平板在95。C温育IO分钟。随后将来自每个孔的150}_il转移至96孔MTP,监测410nm的吸光度作为淀粉酶活性的量度。结果结果(两次重复测定的平均值)示于下表2-4。表2显示无胆汁盐时在所示pH的每种酶的活性。对于每种酶，将最大活性定为100%。表3显示内容与表2相同，但是在存在5mM胆汁盐的条件下。表4显示无胆汁盐时在所示pH的每种酶每mg酶蛋白的活性，其相对于该实验中测定的最大酶活性，即在pH5.0的SEQ1酶的活性(100%)。因此将每种酶的活性相对于此活性标准化。基于所述比活性确定每种酶的酶蛋白量。表5显示内容与表4相同，但是在存在5mM胆汁盐的条件下。在此SEQ1酶在pH5.0、5mM胆汁盐存在下的活性是参照值(100%)。表2:无胆汁盐时的相对活性<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表3:存在胆汁盐时的相对活性<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表4:无胆汁盐时相对于SEQ,1标准化的绝对活性<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表5:存在胆汁盐时相对于SEQ1标准化的绝对活性<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>这些结果显示尽管胆汁盐看起来轻微减少淀粉酶活性，但在5mM胆汁盐存在下的活性仍令人满意。结果也显示胆汁盐不导致最适pH的改变。此外，所述结果显示本发明的每种芽孢杆菌属淀粉酶在pH7均具有多于50%的相对活性，而对于比较的真菌淀粉酶则并非如此。最后，表4和5说明至少在这些条件下，具有SEQIDNO:1的氨基酸1-486的淀粉酶具有的每mg酶的活性显著高于测试的全部其它酶。实施例4:淀粉酶降解曲线通过蜡质种玉米淀粉的降解和之后HPLC的分析来测定五种a-淀粉酶的降解曲线(DP1-10定性指紋(DP1-10qualitativefmgerprint))。才才泮+禾p方法酶是纯化的芽孢杆菌属淀粉酶SEQIDNO:1的氨基酸1-486("SEQl")、SEQIDNO:2的氨基酸1-481("SEQ2")和SEQIDNO:3的氨基酸1-483("SEQ3"),和用于比较的源自米曲霉的纯化真菌淀粉酶("米曲霉")，商业FungamyrM淀粉酶产品的淀粉酶，其商业上可从NovozymesA/S,Krogshoejvej36,DK-2880Bagsvaerd,Denmark获得。胰酶制剂来自SolvayPharmaceuticals。在50mM醋酸钠緩沖液pH6.0，40ppmCa2+中制备50mg/mL蜡质种玉米淀粉(例如来自Cerestar的Waxycorn04201,批次WM5671)的浆料作为底物。以0.0073mg酶蛋白每g反应混合物的干底物的浓度配制纯化酶。使用在S.C.Gill&RH.vonHippel，AnalyticalBiochemistry182,319-326,(1989)中概括的原理，基于A，值和氨基酸序列(氨基酸组成)计算淀粉酶酶蛋白的量。配制酶之后，将反应在60。C温育。24小时后回收等分试样，在去矿质水(demineralizedwater)中1:1稀释，并且添力口两滴1MHC1。通过煮沸15分钟使酶失活。在上样于HPLC之前，将样品通过0.2nm滤器过滤，所述HPLC装有两个串联的AminexHPX42A(Biorad)柱，并且使用水作为洗脱剂(duent》将100mg胰酶制剂溶解在10mL50mM乙酸钠緩沖液pH5.5中。将20ul这种溶液添加至1mL底物浆料(50mM乙酸钠pH5.5中的50mg/mL蜡质种玉米淀粉)并且在37°C温育24小时，随后在上样于HPLC之前如上所述使其失活并且过滤。在单独的实验中(未显示)，还在37°C测试"SEQl"淀粉酶，其产生与在60°C相同的降解曲线。结果24小时温育之后所得的层析图示于图1-5，并且在层析图中对哪个峰代表哪种化合物进行标记。为了清晰，仅在图1中插入这些标记，但它们加以必要的变更(mutatismutandis)也适用于其它附图中的每一幅。名称DP表示聚合度(DegreeofPolymerization)。因此，DPI表示单体，DP2表示二聚物，DP3表示三聚物，DP4表示四聚物，DP5表示五聚物，DP6表示六聚物等等。从图中显示，真菌a-淀粉酶("米曲霉")产生DP2、DP3和DP4作为主要降解产物，然而它剩余大部分未水解的底物(在保留时间10分钟处的大峰)。未检测到作为降解产物的DP1。另一方面，细菌a-淀粉酶("SEQr、"SEQ2"、"SEQ3")通常产生DPI、DP2、DP3，和DP5或DP6中之一作为主要产物，仅剩余小部分的未水解底物。总体而言，看起来产生少量的DP4。至于考虑到胰酶制剂，它的表现似乎是上述真菌和细菌淀粉酶的混合，即产生小DP产物(DP1、DP2和DP3)，几乎没有DP4、DP5和DP6，并且仅留下未水解底物的小峰。实施例5:药用淀粉酶组合物(A)高强度小丸(high-strengthpellet)如DK200500931中所述制备具有SEQIDNO:1的氨基酸1-486的淀粉酶的液体浓缩物(过滤除菌超滤液)。将液体浓缩物喷雾干燥。测得的喷雾干燥的淀粉酶粉剂中淀粉酶蛋白质含量为37%。将1125g喷雾干燥的淀粉酶粉剂与微晶纤维素(450g)和聚乙二醇4000(Macrogol4000;6乃g)在商业上可获得的混合器中进行干式预混合。加入异丙醇100%(460g)，将所得湿物质继续于室温完全混合。然后将均质化的物质在商业上可获得的装有冲孔模(piercingdie)的挤压机中挤压以形成圆柱型小丸，所述沖孔模具有的孔直径为0.8mm。在挤压时小珠温度(beadtemperature)不超过50。C。用商业上可获得的制粒机(spheronizer),通过加入必要量的异丙醇100%(75.5g)将产生的挤压物滚圓成(roundto)球形小丸。将小丸在大约40。C的供应温度在商业上可获得的真空干燥机(来自Voetsch)中千燥。产品温度不超过45。C。然后通过使用带有0.7和1.4mm筛的机械筛选机分离干燥的小丸。收集^0.7mm并且^1.4mm的筛分粒级(sievefraction),并且能够以每份200mg小丸填充入尺寸2的胶嚢中。所得干燥小丸的淀粉酶浓度为大约18.5%(重量/重量)。(B)较低强度小丸与(A)中提供的实例近似，如下制备具有较低淀粉酶含量的小丸使用562.5g相同的喷雾干燥的淀粉酶粉剂、微晶纤维素(1125g)、聚乙二醇4000(562.5g)、用于润湿的异丙醇(700g)和用于滚圆的异丙醇(4L6g)。所得干燥小丸的淀粉酶浓度是大约9.3%(重量/重量)。通过采用微生物淀粉酶的经修饰的FIP方法，测试由实例(A)和(B)产生的小丸的淀粉分解活性。原则上，于pH5.8和恒温(37.0+A0.1。C)，在氯化钠和氯化钓存在下，用淀粉酶水解淀粉。在碱性溶液中从水解反应获得的还原基团与碘反应，并且用硫代硫酸盐滴定过量的碘。将淀粉酶的一个单位定义为在限定的条件和底物下，每分钟水解1微摩尔糖苷键的酶量。发现小丸的淀粉水解活性相对于实例(A)和(B)各自的起始粉状淀粉酶材料是大约96%。随后#4居Pharm.Eur.2.9.1(Section"Disintegrationoftabletsandcapsules")测试实例(A)和(B)所得小丸的崩散性(测试溶液水-500实施例6:淀粉酶和蛋白酶的药用组合物如下制备含有淀粉酶和蛋白酶的高强度小丸如DK专利申请号200500930实施例1中所述制备SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶的过滤除菌液体浓缩物，并且喷雾干燥。将如实施例5中所述制备的粉剂形式的喷雾干燥的淀粉酶(398.5g)与喷雾干燥的蛋白酶粉剂(746.5g,测得的蛋白酶蛋白质含量为58.5%)、微晶纤维素(458g)和聚乙二醇4000(Macrogol4000;687g)在商业上可获得的混合器中进行干式预混合。加入异丙醇100%(460g)，所得湿物质继续于室温完全混合。然后将均质化的物质在商业上可获得的装有沖孔模的挤压机中挤压以形成圓柱型小丸，所述沖孔模具有的孔直径为0.8mm。在挤压时小珠温度不超过50。C。使用商业上可获得的制粒机，通过加入必要量的异丙醇100。/。(58g)将产生的挤压物滚圓成球形小丸。将小丸在大约40。C的供应温度在商业上可获得的真空千燥机(来自Voetsch)中干燥。产品温度不超过45。C。然后通过使用带有0.7和1.4mm筛的机械筛选机分离干燥的小丸。收集^0.7mm并且^1.4mm的筛分粒级，并且以每份200mg小丸填充入尺寸2的胶嚢中。根据如上所述的方法测试所得小丸的蛋白水解和淀粉分解活性。发现在每种情况下，分别相对于起始粉状蛋白酶或淀粉酶材料，小丸中的蛋白水解或淀粉分解活性无损失。权利要求1.用作药物的淀粉酶，其与(i)SEQIDNO1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO3的氨基酸1-483具有至少50％同一性。2.根据权利要求1的淀粉酶，其中a)所述淀粉酶包含选自下组的氨基酸序列(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483;和/或b)所述淀粉酶是选自下组的氨基酸序列的变体(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481,和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483，其中所述变体与相应氨基酸序列的差异不多于25个氨基酸，并且其中(i)与相应的氨基酸序列相比，所述变体包含一个或多个氨基酸的至少一个取代、缺失和/或插入；和/或(ii)与相应的氨基酸序列相比，所述变体包含至少一个小缺失；和/或(iii)与相应的氨基酸序列相比，所述变体包含至少一个小的N-或C-末端延伸；和/或c)所述淀粉酶是具有选自下组的氨基酸的淀粉酶的等位变体(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481，(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483;和/或d)所述淀粉酶是具有选自下组的氨基酸的淀粉酶的片段(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481，和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。3.根据权利要求2的淀粉酶，其中所述淀粉酶具有选自下组的氨基酸序列(i)SEQIDNO:1的氨基酸1-481、1-484、1-486或1-513,(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1-481,和/或(iii)SEQIDNO:3的氨基酸1-483。4.用作药物的权利要求l-3任一项的淀粉酶与脂肪酶或蛋白酶的組合。5.用作药物的权利要求l-3任一项的淀粉酶与脂肪酶和蛋白酶的组合。6.根据权利要求4或5的淀粉酶与脂肪酶和/或蛋白酶的组合，其中(i)所述脂肪酶与具有SEQIDNO:8的氨基酸1-269的脂肪酶有至少70%的同一性；并且(ii)所述蛋白酶与选自下组的蛋白酶有至少70%的同一性a)具有SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶，b)具有SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶，和c)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶。7.根据权利要求4或5的淀粉酶与脂肪酶和/或蛋白酶的组合，其中(i)所述淀粉酶是选自下组的淀粉酶a)包含SEQIDNO:l的氨基酸1-481的淀粉酶，b)具有SEQIDNO:2的氨基酸1-481的淀粉酶，和c)具有SEQIDNO:3的氨基酸1-483的淀粉酶；(ii)所述脂肪酶包含SEQIDNO:8的氨基酸2-269;(iii)所述蛋白酶是选自下组的蛋白酶a)具有SEQIDNO:5的氨基酸1-274的蛋白酶，b)具有SEQIDNO:6的氨基酸1-188的蛋白酶，和c)具有SEQIDNO:7的氨基酸1-188的蛋白酶。8.权利要求1-3任一项所限定的淀粉酶用于制备药物的用途，所述药物用于治疗消化性病症、胰腺外分泌机能不全、胰腺炎、嚢性纤维化、I型糖尿病和/或n型4唐尿病。9.权利要求8的用途，还包含脂肪酶或蛋白酶的用途。10.权利要求8的用途，还包含脂肪酶和蛋白酶的用途。11.权利要求9或10的用途，其中所述脂肪酶和/或蛋白酶如权利要求6或7所限定。12.药用组合物，其包含权利要求l-3任一项限定的淀粉酶，连同至少一种可药用的辅助材料。13.权利要求12的组合物，其还包含脂肪酶或蛋白酶。14.权利要求12的组合物，其还包含脂肪酶和蛋白酶。15.权利要求13或14的组合物，其中所述脂肪酶和/或蛋白酶如权利要求6或7所限定。16.用于治疗消化性病症、胰腺外分泌机能不全、胰腺炎、嚢性纤维化、I型糖尿病和/或II型糖尿病的方法，所述方法通过施用治疗上有效量的4又利要求l-3任一项所限定的淀粉酶进行。17.权利要求16的方法，其还包括施用治疗上有效量的脂肪酶或蛋白酶。18.权利要求16的方法，其还包括施用治疗上有效量的脂肪酶和蛋白酶。19.权利要求17或18的方法，其中所述脂肪酶和/或蛋白酶如权利要求6或7所限定。全文摘要本发明涉及与SEQIDNO1-3的芽孢杆菌属α-淀粉酶相关的淀粉酶任选地与脂肪酶和/或蛋白酶组合的药物用途。医学适应症的实例是治疗消化性病症、胰腺外分泌机能不全(PEI)、胰腺炎、囊性纤维化、I型糖尿病和/或II型糖尿病。SEQIDNO1-3的淀粉酶是来自嗜热脂肪芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和芽孢杆菌属菌种的淀粉酶的变体。本发明的淀粉酶具有改进的体内效能、改进的pH-曲线、高比活性和/或改进的淀粉降解曲线。文档编号C12N9/28GK101242853SQ200680030222公开日2008年8月13日申请日期2006年6月16日优先权日2005年6月24日发明者彼得·C·格雷戈里,艾伦·斯文德森申请人:诺维信公司;索尔维医药有限责任公司