专利名称：从低值海水鱼及下脚料蛋白中提取抗氧化剂的技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从低值海洋鱼及加工后其头、皮、骨、内脏等下脚料蛋白中提取抗氣 化剂的技术，属生物技术领域。技术背景众所周知，为防止或延缓食品成分氧化变质而所使用的一种食品添加剂称之抗氧化 剂，食品的氧化变质主要表现如油脂及富脂食品的酸败、食品的褪色、褐变、维生素破坏 等。对人体而言活性氣自由基对机体具有较大的损伤作用，引起蛋白质损伤、酶失活、脂 质过氧化，导致衰老、肿瘤、心血管疾病等。人工合成的二丁基羟基甲苯(BHT)、 丁基羟 基茴香醚(朋A)以及没食子酸丙酯(PG)等虽然具有良好的清除自由基的作用，但近年 来的研究表明，它们具有致癌作用。因此，寻找对人体安全而又髙效的新型抗氣化剂有着 重要的意义。发明内容为解决上述现有技术的不足，本发明是一种从海水鱼或海水鱼经加工后的头、皮、骨、 内脏等下脚料蛋白为原料提取抗氧化剂的方法。海洋低值鱼及下脚料蛋白质资源丰富，目前多数用于生产饲料鱼粉，少部分用于提取 食用水解蛋白或作为调味料，蛋白质水解产物具有抗氣活性的研究也有一些报道，但目前 还未得到有效的应用。蛋白质被水解为复合多肽并经过金厲螯合修饰后这种抗氧化作用得 到加强，有的接近于Vit.E的抗氧化活性。有关海洋蛋白质酶水解物复合多肽金厲螯合物 髙抗氧化活性还未见报道。为解决上述的提取技术，本发明通过对上述原料的复合酶水解、获得多肽复合物，再 经过金属螯合修饰与分级分离，获得抗菌剂，具体工艺技术方案为原料—前处理—复合 酶水解—离心过滤—超滤—螯合修饰—离心分离—酵沉—真空干燥—粉碎—成品本发明依据上述的技术方案(1) 使用的原料为新鲜的低值海水鱼及其经加工后的头、皮、骨、内脏等下脚料作 为原料；(2) 前处理原料清洗后用粉碎机粉碎，按1比2-4的比例加入水，即1份重量的 原料加入2-4份原料重量的水，磨成肉浆；(3) 复合酶水解调整肉浆pH为5-7，按活力1比1的比例加入木瓜蛋白酶(固体 粉末，40万IU)和风味酶(液体，200万IU),酶量控制为600-2400IU，在温度为40-60 'C的条件下有限水解2-4小时 将水解液加热到901C-100TC,并保持15分钟杀灭皞的活 力；(4 )离心过滤和超滤釆用板框过滤机或离心机粗过滤酶解液，再用膜孔径为0. 2-0. 5P m的超滤膜过滤，得到超滤水解液；(5) 螯合修饰—离心分离—酵沉调整超滤水解液的pH至6-8，在不断搅拌的条件下，缓慢加入按重量/体积比50份超滤水解液加入1份浓度为1-4%的氣化亚铁或氣化钙溶 液，并保持15-60分钟;静置放置3小时后离心分离得到沉淀A;滤液加入无水乙醇至体 系终浓度达到50-60%静置2小时再次离心分离得到沉淀B;再补加无水乙酵至终浓度达到 80%并静置2小时，离心分离得到沉淀C;(6) 真空干燥将沉淀A、 B、 C真空干燥即得到抗氧化剂成品。 所述的低值海水鱼指新鲜的或经冷冻的小型的、价廉的， 一般不被消费者购来食用的，其特点是价格低廉，至于加工后的下脚料如鱼皮、骨、内脏等则价格更为低廉。应用上述技术得到的抗氧化剂，开辟了海水鱼中低值鱼或加工后的下脚料蛋白类资源的髙值化开发途径，经亚铁或钙螯合后得到的抗氧化剂，不仅具有防氧化的作用，而且也是一种补铁(钙)的营养强化剂，尚未见到有关亚铁(或钙)复合物或肽及氨基酸铁(钙)整合物具有抗氧化活性的报导. 本发明具有如下优点(1) 以海洋低值鱼或加工后下脚料为原料，生产制备三种抗氧化剂，生产过程中的 酒精可以回收利用，生产成本低，可以实现水产品髙值化开发与髙度利用；(2) 生产工艺技术对设备要不高，设备投资少， 一般水产加工企业都具备开发的条件和能力；(3) 因为从鱼蛋白中提取，所以产品具有纯天然特点，具有显著的抗氧化生物活性， 其抗氧化活性达到维生素E的57.1-94. 4%，可以广泛应用于食品工业及相关工业。
具体实施方式
本发明实施例一(1) 使用的原料为新鲜的低值海水鱼及其经加工后的皮、骨、内脏等下脚料作为原料；(2) 前处理原料清洗后用粉碎机粉碎，按1比2的比例加入水，即1份重量的原 料加入2份原料重量的水，磨成肉浆；(3) 复合酶水解调整肉浆pH为5，按活力l比l的比例加入木瓜蛋白酶(固体粉 末，40万IU)和风味酶(液体，200万IU)，酶量控制为600IU,在温度为40-60X:的条 件下有限水解2小时。将水解液加热到90iC，并保持15分钟杀灭酶的活力；(4) 离心过滤和超滤采用板框过滤机或离心机粗过滤酶解液，再用膜孔径为0.2 H m的超滤膜过滤，得到超滤水解液；(5) 螯合修饰爿离心分离—醇沉调整超滤水解液的PH至6，在不断搅拌的条件下， 缓慢加入按重i/体积比50份超滤水解液加入l份浓度为1%的氣化亚铁或氣化钙溶液，并 保持15分钟；静置放置3小时后离心分离得到沉淀A;滤液加入无水乙酵至体系终浓度达到50 4静置2小时再次离心分离得到沉淀B;再补加无水乙醇至终浓度达到80%并静置2小 时，离心分离得到沉淀C;(6)真空干燥将沉淀A、 B、 C真空干燥即得到抗氣化剂成品。所述的低值海水鱼指新鲜的或经冷冻的小型的、价廉的， 一般不被消费者购来食用的， 其特点是价格低廉，至于加工后的下脚料如鱼皮、骨、内脏等则价格更为低廉，本发明实施例二(1) 使用的原料为新鲜的低值海水鱼及其经加工后的皮、骨、内脏等下脚料作为原料；(2) 前处理原料清洗后用粉碎机粉碎，按1比3的比例加入水，即1份重量的原 料加入3份原料重量的水，磨成肉浆；(3) 复合酶水解调整肉浆pH为6，按活力1比1的比例加入木瓜蛋白酵(固体粉 末，40万IU)和风味睥(液体，200万IU),酶量控制为15001(J，在温度为50C的条件 下有限水解3小时。将水解液加热到951C,并保持15分钟杀灭酶的活力；(4) 离心过滤和超滤采用板框过滤机或离心机粗过滤酶解液，再用膜孔径为0.3 P m的超滤膜过滤,得到超滤水解液；(5) 螯合修饰—离心分离—酵沉调整超滤水解液的pH至7，在不断搅拌的条件下， 缓慢加入按重量/体积比50份超滤水解液加入1份浓度为2. 5%的氣化亚铁或氣化钙溶液， 并保持40分钟；静置放置3小时后离心分离得到沉淀A;滤液加入无水乙酵至体系终浓度 达到50%静置2小时再次离心分离得到沉淀B;再补加无水乙酵至终浓度达到80%并静置2 小时，离心分离得到沉淀C;(6) 真空干燥将沉淀A、 B、 C真空干燥即得到抗氣化剂成品. 本发明实施例三(1) 使用的原料为新鲜的低值海水鱼及其经加工后的皮、骨、内脏等下脚料作为原料；(2) 前处理原料清洗后用粉碎机粉碎，按1比4的比例加入水，即1份重量的原 料加入4份原料重董的水，磨成肉浆；(3) 复合酶水解调整肉浆pH为7，按活力1比1的比例加入木瓜蛋白酶(固体粉 末，40万IU)和风味酶(液体，200万IU),酶量控制为2400IU,在温度为60"C的条件 下有限水解3小时。将水解液加热到lOOt),并保持15分钟杀灭酶的活力；(4) 离心过滤和超滤采用板框过滤机或离心机粗过滤酶解液，再用膜孔径为0.5 nm的超滤膜过滤，得到超滤水解液；(5) 螯合修饰—离心分离—酵沉调整超滤水解液的PH至8，在不断搅拌的条件下， 缓慢加入按重量/体积比50份超滤水解液加入l份浓度为4%的氯化亚铁或氣化钙溶液，并 保持60分钟；静置放置3小时后离心分离得到沉淀A;滤液加入无水乙醇至体系终浓度达 到50%静置2小时再次离心分离得到沉淀8;再补加无水乙酵至终浓度达到80X并静置2小时，离心分离得到沉淀C;(6)真空干燥将沉淀A、 B、 C真空干燥即得到抗氣化剂成品。 通过上述实例例所得到的本发明的抗氧化剂，采用TBA法，即硫代巴比妥酸法.其抗 氧化效果见下表所示多肽复合物及螯合修饰物与Vit.E抗氧化活性的比较(采用TBA法，即硫代巴比妥酸法)试样多肽复合多肽象合物亚铁螯合修饰物多肽复合物钙螯合條饰物VE物ABCABC和生育酸6876.892.457.194.4385.2279. 07100的比较oo由上表可以明显看出，多肽复合物与多肽复合物的螯合修饰物的3种分级分离组分都 表现出不同程度的抗氣化活性；亚铁螯合修饰物A、 B、 c三组分抗氧化活性达到生育酚氣 化抑制率的76. 8、 92. 4沐57.1%;钙螯合修饰物A、 B、 C三组分分别达到94. 43%、 85. 22X 和79.0754与多肽复合物相比较，钩螯合修饰物A、 B、 C三组分抗氧化活性均得到较显著的 提髙；与生育酚对比，亚铁螯合修饰物B组分及钙螯合修饰物A组分到生育酚氧化抑制率 为92.4%和94.43沐，结果同样表明，酵溶性较低的组分均有较好的抗氧化能力，其抗氧化 能力髙于未螯合的活性肽；而酵溶性较髙的组分，其抗氧化能力较弱，但仍髙于未螯合的 活性肽(复合多肽)。
权利要求
1. 从低值海水鱼及加工后下脚料蛋白中提取抗氧化剂的技术，其特征在于，其提取方法为(1)原料使用的原料为新鲜的低值海水鱼及其经加工后的头、皮、骨、内脏等下脚料作为原料；(2)前处理原料清洗后用粉碎机粉碎，按1比2-4的比例加入水，即1份重量的原料加入2-4份原料重量的水，磨成肉浆；(3)复合酶水解调整肉浆pH为5-7，按活力1比1的比例加入木瓜蛋白酶，为固体粉末，40万IU，和风味酶，为液体，200万IU，酶量控制为600-2400IU，在温度为40-60℃的条件下有限水解2-4小时。将水解液加热到90℃-100℃，并保持15分钟杀灭酶的活力；(4)离心过滤和超滤采用板框过滤机或离心机粗过滤酶解液，再用膜孔径为0.2-0.5μm的超滤膜过滤，得到超滤水解液；(5)螯合修饰→离心分离→醇沉调整超滤水解液的pH至6-8，在不断搅拌的条件下缓慢加入按重量/体积比50份超滤水解液加入1份浓度为1-4％的氯化亚铁或氯化钙溶液，并保持15-60分钟；静置放置3小时后离心分离得到沉淀A；滤液加入无水乙醇至体系终浓度达到50-60％静置2小时再次离心分离得到沉淀B；滤液再补加无水乙醇至终浓度达到80％并静置2小时，离心分离得到沉淀C；(6)真空干燥将沉淀A、B、C真空干燥即得到天然抗菌剂成品。
全文摘要
本发明公开一种从低值海水鱼及加工后下脚料蛋白中提取抗氧化剂的技术。上述原料加2-4倍重量的水，磨成肉浆，肉浆pH调整为5-7，按活力1比1加入木瓜蛋白酶和风味酶水解，酶量控制在600-2400IU，过滤酶解液，将所得到的超滤水解液其pH调整为6-8，在不断搅拌下，按重量/体积比50份超滤水解液加入1份1-4％的氯化亚铁或氯化钙溶液螯合，离心分离得到沉淀A，滤液加入无水乙醇，至终浓度50-60％，静置后离心分离得到沉淀B，在滤液中，再加入乙醇至终浓度80％，静置后离心分离所得到沉淀C，真空干燥A、B、C得到抗菌剂，其抗氧化活性达到维生素E的57.1-94.4％，可应用于食品工业和相关工业。
文档编号A23L1/327GK101233950SQ20071006714
公开日2008年8月6日 申请日期2007年1月29日 优先权日2007年1月29日
发明者超 谢, 邓尚贵 申请人:浙江海洋学院