用于治疗病理性失调的病毒衣壳蛋白及其任意肽或者组合物的制作方法

专利名称：用于治疗病理性失调的病毒衣壳蛋白及其任意肽或者组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗与参与质量控制过程的细胞蛋白失活有关的失调的组合
物和方法。更特别的，本发明涉及病毒衣壳蛋白，优选的SV40VP1或者其 任意肽、片段、突变体和混合物在治疗这类病理性失调的组合物和方法中的 用途。
背景技术：
本申请提及的所有出版物均完整引入作为参考，包括其中引用的所有参 考文献。
病毒(最终的寄生虫)夺取了许多细胞功能进行它们自己的增殖[Munther etal., Science's STKE 335:1-13 (2006)]。 一旦它们结合细胞，在它们开始利用 细胞机器表达和复制之前，它们就触发多个级联事件，以便进行细胞侵入、 运输和分解。被感染病毒激活的一些因子参与关键过程诸如炎性应答和细胞 死亡。
在病毒基因组分解和表达前发生的非常早期的事件很可能是被病毒外壳 触发的。因此病毒衣壳可以被用于激活可能具有治疗作用的细胞机理。
SV40(以及多瘤病毒和乳头瘤病毒家族的其他成员)在感染后诱导伴侣蛋 白(chaperones)[Ioannis et al., FEBS Letters 355:282-286 (1994); Cripe et al., J. Virol. 69:7807-7813 (1995); Chromy et al., PNAS 100:10477-10482 (2006)和其 中的参考文献]，可能因为它们利用宿主伴侣蛋白进行分解(和组装)。本发明 令人惊讶地显示，伴侣蛋白是被衣壳蛋白或者病毒结构蛋白诱导的，而不是 被病毒调节蛋白诱导。伴侣蛋白被提议用于改善严重的疾病诸如AEDS (急性 呼吸窘迫综合征)和AKI (急性肾损伤)，其先前被称为ATN (急性肾小管坏 死)。尤其是，通过对模型ARDS大鼠的基因治疗实现的HSP70的异位表达 显示改善效果[Weiss et al.， the J. Clin. Invest 110:801-806 (2002)]。因此，本发 明人检测了通过SV40诱导伴侣蛋白来治疗这些疾病的可能性。本发明清楚 的显示，在AKI小鼠模型中SV40衣壳(VLP)显著地改善病理症状，因此适用 于治疗急性肾功能衰竭(ARF)。这个特殊实例(ARF)清楚确定了在各种器官中利用病毒衣壳蛋白，特别是SV40 VP1治疗与细胞质量控制机制功能失常有
关的任意其他失调的可行性。
因此本发明的一个目的是提供病毒衣壳蛋白VP1、 VP2和VP3，优选的 SV40VP1或者其任意肽、突变体、片段和混合物作为组合物的活性成分，用 于治疗病理性失调，优选的是与细胞蛋白失活有关的失调。这类细胞蛋白优 选的是参与质量控制过程的蛋白，诸如伴侣蛋白。
本发明的另一个目的是提供治疗与细胞蛋白失活有关的失调的方法，所 述细胞蛋白优选的是参与质量控制过程的蛋白，诸如伴侣蛋白。
本发明的另 一个目的是通过增加参与质量控制过程的细胞蛋白(诸如伴 侣蛋白)，提供增强所述细胞蛋白对病理性失调的改善作用的方法。
在另一个目的中，本发明提供SV40衣壳蛋白或者包括所述衣壳蛋白的 SV40 VLP在制备治疗病理性失调的组合物中的用途，所述失调优选的是免疫 相关失调或者神经变性失调。
随着说明的进行本发明的这些和其他目的将逐渐清楚。
发明概述
在第一个方面，本发明涉及治疗病理性失调的药物组合物。本发明的组 合物包括治疗有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片 段，或者包括至少一种衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段的任意VLP 作为活性成分。
应当注意到尽管本发明的组合物预期用于治疗病理性失调，但它不是预 期用作抗产生所述衣壳蛋白的病毒的疫苗。
根据一个实施方式，病毒衣壳蛋白可以是乳头瘤病毒或者多瘤病毒的任 意衣壳蛋白或者其任意片段、肽、突变体、任意混合物和组合。
根据特别优选的实施方式，病毒衣壳蛋白可以是SV40 VP1、 VP2、 VP3 和其任意肽、突变体、.片段、任意混合物和任意组合中的至少一种，或者包 括所述SV40衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段中至少一种的任意 VLP。最优选的，病毒衣壳蛋白可以是SV40 VP1或者其任意肽、突变体或者 片段。突变SV40VP1分子的特定实例可以是VP1AC突变体，优选的，所述 突变分子包括基本上由SEQ ID N0.4表示的氨基酸序列。
理性失调诸如神经变性失调或者免疫相关失调。应当注意到本发明组合物治疗的病理性失调优选的是与细胞蛋白失活有关的失调，优选的是与伴侣蛋白 失活有关的失调，所述细胞蛋白参与细胞内的质量控制过程。
在第二个方面，本发明涉及在有需要的患者中治疗病理性失调的方法。
该方法包括给被治疗的患者施用治疗有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其 任意肽、突变体或者片段或者包括相同物质的任意VLP，或者包括相同物质 的组合物的步骤。
在第三个方面，本发明涉及增强细胞蛋白对病理性失调的改善作用的方 法，所述细胞蛋白参与质量控制过程。该方法包括将从患有病理性失调的患 者获得的细胞与有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者 片段，或者有效量的包括相同物质的VLP接触的步骤。
在第四个方面，本发明涉及至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变
的用途。
利用下列附图和实施例进一 步描述本发明。 附图简述


图1A-1C在昆虫细胞中制备重组VLP
(A)VLP和(B)野生型SV40，用1%磷鴒酸盐，pH 7染色后在电子显微镜下 观察。(C)纯化VLP的PAGE分析，考马斯染色。缩写Prot.(蛋白)。
图2A-2B.在培养的CV1细胞中SV40 VLP上调Hsp/c70
按照50 ng和500 ng每106个细胞用SV40 VLP处理CV1细胞。(A)按 照图上方显示的不同时间点收集细胞总蛋白，并利用抗hsp/hsc70蛋白的单克 隆抗体的Western印迹进行分析。对照HS-CV1细胞，在45。C热休克90分 钟，C-未处理的对照。(B)用50 ng VLP处理的CV1细胞，抗Hsp/c70抗体 免疫染色，并在共焦显微镜下观察。缩写moc.(模拟)。
图3A-3C.人胚胎肾(HEK)细胞
在感染VLP的时候，利用终浓度20 |ag/ml的依托泊甙(etoposide)处理细 胞。VLP的浓度是50ng每l(^个细胞。(A)显示对照；(B)显示用依托泊戒处 理和(C)显示用依托泊戒和SV40VPl's处理。缩写cont.(对照)。
图4A-4B.在小鼠中SV40靶向于肾
通过尾静脉注射100 jil体积的108感染性单位(pfb)的SVluc载体[Arad， U. Virology 304:155-159 (2002)]后48小时的小鼠肾纵切面。利用作为一抗的抗
SV40 VP1 [Sandalon and Oppenheim, Virology 237:414-421(1997)]和HRP标记的抗兔二抗对肾组织进行免疫组织化学法。褐色的染色表示肾小管上皮细胞
的VP1摄取。PBS注射的对照没有显示染色。(A)显示10 x放大，和(B)显示 40 x放大。
图5.肾毒性的小鼠模型
给BALB/C雌性小鼠腹腔内(IP)施用指定浓度的HgCl2,在指定天数从尾 静脉取血，并利用Reflotron尿素试验(Roche)测量尿素水平。每组动物的数量 显示在括号中。条形(bars)表示标准差。缩写bl.Ur.(血尿素)，sh. (sham)。
图6.保护培养的小鼠肾小管细胞(tubularkidneycells)免受HgCl2损伤
用HgCl2 (A)或者HgCl2和SV40 VLP(B)处理培养的小鼠肾小管细胞，在 显微镜下观察。
图7A-7C. SV40 VLP治疗小鼠的存活率
(A)该图显示VLP治疗增加了 AKI模型小鼠的存活率(No vec.-只有 HgCl2; VLP=VLP+ HgCl2); (B)显示VLP治疗相对未治疗AKI动物的存活 率；(C)显示剂量反应。注释VLP剂量的对数等级。点下面的数字表述特定 剂量的动物数量。缩写sur.(存活)，D(注射HgCl2后天数)，sh.(sham)。 图8A-8B.突变的SV40VP1衣壳蛋白VP1AC保护AKI小鼠 (A)突变蛋白(a), (b)的制备-来自两批不同的VP1 △ C样品被注射给小鼠。 在MES緩冲液中进行PAGE,并通过银染检测蛋白。M-SeeBlue分子标记物 (Invitrogen)。 (B)存活实验。缩写Prot,(蛋白)，Sur.(存活)，sh. (sham)。 图9A-9C.不同临床指征(disease parameters)中的SV40 VLP保护作用 (A)注射HgCl2 3天后拍摄的肾大体形态。(B)第4天利用针对尿素的 Reflotron试剂盒和肌酸酐试验(Roche)分别测量血清尿素(左)和肌酸酐(右)水 平。注意到sham组和只接受VLP治疗的组的血清肌酸酐低于检测水平。单 尾Student's t-检验的结果对于血尿素是PK).0008，对于肌酸肝是P=0.035。每 组动物的数量标示在下方。(C) VLP治疗的AKI和未治疗AKI小鼠的血清尿 素。每组动物的数量显示在括号中。条形表示标准误差。缩写N. an (动物 的数量)，D.(天数)，sh.(sham)。 图10.汞-诱导的氧化应激
利用TBARS分析测量硫代巴比土酸反应物的水平[Esterbauer， H. and Cheeseman, KH. Methods Enzymol. 186:407-421 (1990)]。给小鼠注射6.5 mg/kg HgCl2,用或者不用0.3 mg/kg VLP治疗。在每个柱图下显示每组的数量。缩 写N.an(动物的数量)，sh.(sham)。
9发明详述
在第一个方面，本发明涉及治疗病理性失调的药物组合物。本发明的组 合物包括治疗有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其的肽、突变体或者片段， 或者包括至少一种衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段的VLP作为活性 成分。
应当注意到尽管本发明的组合物预期用于治疗病理性失调，但它不是被 用作抗病毒的疫苗，其中所述衣壳蛋白来自于所述病毒。因此，考虑到该组 合物不是用作疫苗或者用于接种被治疗的患者，本发明的组合物是用于病理 性失调的治疗。
根据一个实施方式，包含的作为活性成分的病毒衣壳蛋白可以是乳头瘤 病毒或者多瘤病毒衣壳蛋白，或者其任意片段、肽以及混合物和组合中的任 意一种。
乳头瘤、多瘤和空泡因子(vacuolating agents)似乎形成一组天然的肿瘤病 毒，将它们称为乳多空病毒组(papova virus group)。历史上，乳多空病毒这一 名称来源于兔乳头瘤病毒，小鼠多瘤病毒，猴(simian)空泡病毒。该组的成员 都是具有双链DNA基因组的无包膜病毒，它们在细胞核内进行增殖。乳头瘤 和多瘤病毒是相关的病毒家族，均具有共同的衣壳结构。对于这两种病毒来 说，72个壳粒(每个是该主要衣壳蛋白的五聚体)形成一个丁=7的二十面体 晶格。尽管多瘤病毒的主要衣壳蛋白(VP1)和乳头瘤病毒的主要衣壳蛋白(L1) 完全缺乏序列同源性，但存在这种结构相似性。
到目前为止已经鉴定了人乳头瘤病毒(HPV)的70个毒抹。已知这些病毒 在引发疣(寻常的疣和生殖器疣)中起作用，并且与癌症有关。大多数人在一生 中都会被HPV的一些毒抹感染。两种结构蛋白形成乳头瘤病毒的衣壳。主要 结构蛋白Ll是衣壳的结构决定簇，排列在72个五聚体的360拷贝中。估计 每个衣壳中存在12拷贝的次要结构蛋白L2。已经证明了 L2在与细胞表面受 体的相互作用以及病毒体摄取中的可能作用。L2定位于亚核结构域，该结构 域被确定为核结构域IO(NDIO)。
因此，根据一个具体实施方式
，乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll和L2可以被用 作本发明组合物的活性成分。多瘤病毒家族的小、无包膜、二十面体DNA病 毒的典型代表是小鼠多瘤病毒、猴病毒40(SV40)、人BK病毒和人JC病毒。 与大部分DNA病毒一样，多瘤病毒衣壳蛋白在胞浆中合成，而病毒体的组装 只在细胞核内发生。多瘤病毒衣壳由主要衣壳病毒蛋白(VP1)的72个五聚体(壳粒)组成，其按照^50nm直径的T-7二十面体晶格排列。 一种次要衣壳蛋 白VP2或者VP3在每个VP1的中央5倍体腔(5-fold cavity)结合，VP2或者 VP3在每个VP1五聚体的中央5倍体腔结合。病毒体的原子结构显示每个 VP1单体的C端结构域"侵入"相邻的五聚体形成重要的五聚体间接触，这 类接触被4丐离子稳定。
根据特别优选的实施方式，病毒衣壳蛋白可以是SV40 VP1、 VP2、 VP3 和其任意肽、突变体、片段、混合物和组合中的至少一种，或者包括所述SV40 VP1、 VP2、 VP3或者其任意肽、突变体或者片段中至少一种的任意VLP。 最优选的，病毒衣壳蛋白可以是SV40VP1或者其任意肽、突变体或者片段。 应当注意到术语SV40 VP1蛋白优选的是指具有GenBank登录号NP—043126 GI: 96 28426所示氨基酸序列的VP1蛋白，其在此引入作为参考。根据特别 优选的实施方式，SV40VP1衣壳蛋白包括SEQIDNO:l所示的氨基酸序歹'J。
SV40是一种小的双链DNA灵长类动物多瘤病毒，具有5.2 kb的微小染 色体。病毒衣壳由3种被病毒编码的蛋白VP1、 VP2和VP3组成，这些蛋白 包绕所述微小染色体。通过在染色质周围逐渐加入并排列衣壳蛋白进行包装。 一般认为病毒染色质和VP1衣壳由病毒蛋白VP2和VP3连接。邻近VP3羧 基端的结构域在体外显示与VP1相互作用。另一种病毒晚期蛋白是晚期16S mRNA前导区编码的agnoprotein或者LP1 。发现这种小(61个氨基酸)蛋白介 导VP1有效的定位到核区，并且促进成熟病毒从感染细胞的释放。
应当理解任何突变的病毒衣壳蛋白，优选的是VP1分子，只要它们能提 高伴侣蛋白水平、增强细胞存活机制并保护细胞抵抗凋亡或者氧化应激，就 都包括在本发明中。
本发明的组合物和方法可以使用的病毒衣壳蛋白突变体或者其衍生物可 以具有选自下列组的至少一种突变点突变、错义突变、无义突变、插入、 缺失或者重排。应当理解本文使用的术语"插入"和"缺失"是指本发明的 病毒衣壳蛋白分别任意添加或者缺失1-100个氨基酸残基，优选的1-50个氨 基酸残基，和最优选的，l-20个氨基酸残基。
根据一个具体实施方式
，突变的SV40 VP1分子可以是在其羧基端臂缺 失的VP1分子。这类特定的突变分子可以是突变体VP1AC。根据特别优选 的实施方式，该突变的VP1分子包括基本上由SEQIDN0.4表示的氨基S吏序 列。应当理解其他突变，包括缺失或者插入，例如可以是位于连接P链的VPl 表面环上的那些，也属于本发明的范围。预期这类突变可以比野生型VP1更 有效的激活伴侣蛋白机制和/或存活途径，以及保护细胞抵抗凋亡或者氧化应 激。还应当注意影响VPl或者VPl衍生物结构的任意其他突变，只要使它们 具有延长的体内作用，也属于本发明的范围。
才艮据一个具体实施方式
，本发明的组合物可以包括野生型VPl、 VPl AC
突变体和任意上述其他突变体的任意组合。
应当注意到本发明的组合物和方法使用的病毒衣壳蛋白可以是天然或者 合成的、修饰或者未修饰的、完整的或者其片段。片段可以来源于片段的合
优选的，可以重组制备病毒衣壳蛋白。重组衣壳蛋白的制备涉及使用本 领域公知的常规分子生物学技术。这类技术包括例如，将编码所需病毒衣壳
蛋白的基因克隆到合适的表达载体。优选的重组SV40 VPl衣壳蛋白可以利 用原核表达系统制备，优选的利用细菌或者真核表达系统。最优选的在真核 表达系统中制备衣壳蛋白，诸如在实验步骤中描述的杆状病毒系统。应当注 意到Sandalon等[Sandalon(1997)出处同上]详细描述了这些载体的构建，这是 本发明人先前的出版物，在此引入作为参考。
还应当注意到本发明组合物使用的衣壳蛋白，特别是SV40 VPl ，可以是 解离的VPl五聚体或者包括VPl和其他SV40衣壳蛋白的病毒样粒子(VLP， 如图l所示)，或者可选的，只包含VP1。此外，应当理解病毒衣壳蛋白可以 与任意其他病毒蛋白诸如agn叩rotein或者任意其他能促进它们的作用的蛋白 混合。此外，应当注意到为了制备所述SV40 VPl蛋白的解离五聚体或者片 段，可以使用细菌表达系统。
此外，应当理解本发明还包括任意融合蛋白在本发明任一组合物中作为 活性成分的用途，所述融合蛋白包括所述VP1或者VPl的任意突变体(例如， VPIAC)。
根据一个特别优选的实施方式，，利用本发明组合物治疗的病理性失调可 与参与质量控制过程的细胞蛋白的失活有关，因此可以通过激活这类蛋白得 到改善。
新合成的蛋白具有线样结构(string-like structure),所述线必须在空间上充 分折叠以便生成的蛋白正常起作用。因此，称为"分子伴侣，，的分子存在于 内质网帮助蛋白线(strings)的空间充分折叠。但是，有时甚至在分子伴倡的帮
12助下蛋白也没有充分折叠。这类不正常的蛋白被排除出内质网(ER)，并在称 为"蛋白酶体，，的蛋白降解工厂中分解。也就是说，内质网具有从折叠蛋白 中区别未正确折叠的蛋白的功能，以便去除不正常的蛋白。这种功能机制被 称作"内质网中的蛋白质量控制机制"。如果这种机制被破坏，细胞将无法 区分何种蛋白是正确的"产物"，从而诱导严重的、危急生命的损害。
更特别的，在活细胞中，新制备和先前存在的多肽链一直有错误折叠和 聚集的风险。根据错误折叠形式的广泛多样性，进化出精密的质量控制策略 来对抗这些不可避免的差错。最近的报道描述了聚集物从胞浆的去除，揭示
了内质网的蛋白质量控制机制，并提供对两种类型的分子伴侣Hsp70系统和 AAA+ (HsplOO)解叠酶的新的了解。
如上所述，内质网(ER)负责横贯分泌途径的大约四分之一蛋白质组的结 构成熟。ER使用两种独特的机制对错误折叠形式的存在进行应答。第一种是 ER专有的应激应答，称为解折叠(unfolded)蛋白应答(UPR),其作用于重建 ER以便增加其折叠能力。在酵母中，ER的折叠能力由IRE1监控，IRE1是 一种非常保守的跨膜激酶，其包含负责检测错误折叠形式的lumenal结构域 并包含细胞溶质激酶和核糖核酸酶结构域。ER内错误折叠蛋白的积聚导致 IRE激酶的激活。
第二种，称为ER相关的降解(ERAD),其特异识别末端错误折叠的蛋白， 并将它们逆向转移(retrotranslocates)穿过ER膜进入胞浆，在那里它们可被泛 素蛋白酶体降解体系降解。与在ER中折叠的蛋白的多样性对应，最近的研 究证明ER相关的降解(ERAD)包括许多不同的系统，每个系统负责具有相同 物理性能的蛋白亚群的降解。这在酵母中表现的最明显，在那里存在至少两 种独特的监控机制用于识别末端错误折叠的ER蛋白。第一种，称为ERAD-L， 检查包含错误折叠的lumenal结构域的蛋白。第二种，称为ERAD-C,检测跨 膜蛋白的错误折叠的细胞溶质结构域。尽管这两种途径最终汇集到泛素-蛋白 酶体降解系统，但它们依赖于不同组的ER-相关组分检测错误折叠的蛋白并 将其输送到胞浆。就ERAD-C (但不是ERAD-L)而言，降解通常依赖于细胞 溶质伴侣蛋白的特定亚组，包括Hsp70和Hsp40成员。
最近的研究鉴定了两种不同的定位于ER的外源凝集素，它们在ERAD 中起着重要作用。第一种与甘露糖苷酶蛋白有关，负责ER内N-聚糖的修饰， 但看来失去了其催化活性。第二种外源凝集素Yos9p与错误折叠的蛋白形成稳定的复合物，Yos9p的丟失将导致错误折叠糖蛋白的降解的重大且特异性 的缺陷。
泛素-蛋白酶体途径可能是去除具有聚集倾向的蛋白的主要途径。现在看 来泛素^^饰实际上可以募集聚集的蛋白，通过一种独立的机制"自P笪，，途径 进行清除。自噬涉及识别靶蛋白或者细胞器并将其包装/吞噬入自噬体嚢泡，
该嚢泡与溶酶体融合，其中嚢泡和它们的内容物均被破坏。超过20种所谓的 Atg组分介导该重要的过程。
现在已经越来越清楚，即使伴侣蛋白和蛋白水解机器与错误折叠的蛋白 存在于相同的小室，体内还是存在各种疾病，这些质量控制机制失效，错误 折叠的蛋白形成聚集物。此外，这类胞内聚集物与许多神经变性疾病有关， 诸如亨廷顿氏病，阿尔茨海默氏病，肌萎缩性侧索硬化和帕金森氏病。对真 核细胞中蛋白聚集物的性质和经历了解得很少。
不受任何理论的约束，下列实施例显示，病毒衣壳蛋白，尤其是包含VP1 的VLP、 VP1五聚体或者突变的VP1分子，优选的，VP1AC突变体，激活 参与质量控制过程的蛋白，特别是伴侣蛋白(例如本发明的HSP/c70所示)， 从而导致被治疗的病理性失调的明显改善。本发明利用AKI(急性肾损伤)小鼠 模型(其被正式命名为ATN)清楚证明了病理性失调的这种改善。
因此，根据一个具体实施方式
，参与质量控制过程的蛋白可以是伴倡蛋 白。例如，下列家族的伴侣蛋白HSP-40, HSP-70， CALNEXIN, BiP， HSP-27, HSP-22, HSP-60, HSP-65, HSP-27， HSP-90。
热休克蛋白(HSP)被称为应激蛋白(stressprotein)或者分子伴侣，它们通过 折叠合成的或者应激变性的蛋白来帮助细胞拯救(cellrescue)。如上所述，HSP 还被认为是各种自身免疫疾病的诱发因素，所述疾病的病因被认为来自于抗 靶分子HSP的免疫应答。例如，在患有多发性硬化(MS)和其他神经疾病患者 的脑脊液(CSF)中报道了对HSP60家族蛋白以及HSP70家族蛋白(HSP70和 HSC70)的抗体滴度升高，因此所述抗体滴度升高可能通过改变免疫应答和分 子伴侣的细胞保护功能在MS的病理生理学中起着重要作用。
在Charcot-Marie-Tooth疾病(CMT)(该疾病是一种最常见的但是异质性遗 传的运动和感觉性神经病)和远端型遗传性运动神经病(HMN)(这是专一的运 动性神经病但也是临床和遗传异质性的神经病)中鉴定出热休克蛋白27 (HSP27)和HSP22的突变。急性呼吸窘迫综合征(ARDS)(炎性应答的实例)，军团病(legioner disease) ， GBS (Guillain-Barre综合征)和足细胞损伤(podocyte injury)也^皮证明 是与伴侣蛋白功能失常有关的失调，因此它们也是可以用本发明的组合物和 方法治疗的失调。
根据另 一个实施方式，本发明的组合物尤其可应用于并且适合于治疗病 理性失调诸如神经变性失调或者免疫相关失调。应当注意到，如上所述，利 用本发明组合物治疗的病理性失调优选的是与细胞蛋白失活有关的失调，所 述细胞蛋白参与细胞内的质量控制过程。
更特别地，免疫失调与Thl-Th2应答的失衡有关，因此免疫相关失调可 以是例如，自身免疫病(例如，多发性硬化(MS), 1型糖尿病，狼疮，Graves 病和甲状腺炎)，恶性和非恶性增生性失调，移植排斥疾病和移植抗宿主疾病， 炎症以及病原体相关失调(诸如由致热外毒素诱导的中毒性休克、失能和死 亡，脓毒性休克和严重脓毒病)。
炎症包括任意炎性疾病，其中所述炎性疾病可以是下列疾病中的任意一 个类风湿性关节炎，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，哮喘，鼻炎，特发性肺 纤维化，腹膜炎，心血管炎症，心肌缺血，再灌注损伤，动脉粥样硬化，脓 毒病，创伤，II型糖尿病，视网膜病，银屑病，胃肠炎症，肝硬化和炎症性 肠病。
通常，下文描述的本发明组合物以及方法，可用于治疗任意自身免疫病 诸如，但不限于，类重症肌无力综合征(Eaton-Lambert syndrome),肺出血肾 综合征(Goodpasture's syndrome), Greave's病，Guillain-Barr综合症，自身免 疫性溶血性贫血(AIHA)，肝炎，胰岛素依赖性糖尿病(IDDM),系统性红斑狼 痴(SLE)，多发性硬化(MS),重症肌无力，神经丛疾病(plexus disorder)诸如急 性臂神经炎，多腺缺陷综合征，原发性胆汁性肝硬变，类风湿性关节炎，硬 皮病，血小板减少，曱状腺炎诸如桥本氏曱状腺炎(Hashimoto's disease), Sjogren's综合症，过敏性紫癥，银屑病，混合型结締组织病，多肌炎，皮肌 炎，血管炎(vasculitis)，多发性结节性动脉炎，风湿性多肌痛，眶坏死性肉芽 肿病(Wegener's granulomatosis), Reiter's综合征，Behget's综合症，关节强硬 性脊推炎(ankylosing spondylitis),天疱疮，大疱性类天疱疮，疱渗样皮炎，胰 岛素依赖型糖尿病，炎症性肠病，溃疡性结肠炎和克罗恩氏病(Crohn's
15当在本文中用于描述本发明时，术语"恶性增生性失调"、"癌症"、 "肺瘤"和"恶性肿瘤"都与组织或者器官的增生同等相关。如果组织是淋 巴系统或者免疫系统的一部分，则恶性细胞可以包括循环细胞的非实体瘤。 其他组织或者器官的恶性肿瘤可以产生实体瘤。通常，如下所述的本发明的
组合物以及方法可用于治疗非实体瘤和实体瘤，例如，癌(carcinoma),黑素 瘤，白血病禾口'淋巴瘤。
因此，根据优选的实施方式，本发明的SV40衣壳蛋白或者包括相同物 质的任意组合物可用于治疗或者抑制非实体癌，例如造血系统恶性病，诸如 所有类型的白血病，例如急性淋巴细胞性白血病(ALL),急性髓性白血病 (AML)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL),慢性髓性白血病(CML)，脊髓发育不 良综合征(MDS)，月巴大细胞白血病，毛细胞白血病，霍奇金氏病，非霍奇金 氏淋巴瘤，伯基特氏淋巴瘤和多发性骨髓瘤，以及用于治疗或者抑制实体瘤 诸如以下位置的肿瘤唇和口腔、咽、喉、鼻旁窦、主要唾液腺、曱状腺、 食管、胃、小肠、结肠、结直肠、肛管、肝、胆嚢、肝外胆管、肝胰管壶腹、, 外分泌胰腺、肺、肋膜的间皮瘤，骨，软组织肉瘤，皮肤癌和皮肤恶性黑色 素瘤，乳腺，外阴，阴道，子宫颈，子宫体，卵巢，输卵管，恶性滋养细胞 肿瘤，阴茎，前列腺，睾丸，肾，肾盂，输尿管，膀胱，尿道，眼睑癌，结 膜癌，结膜恶性黑色素瘤，葡萄膜恶性黑色素瘤，视网膜母细胞瘤，泪腺癌， 眼眶肉瘤，脑，脊髓，血管系统，血管肉瘤和卡波西氏肉瘤。
在另一个具体实施方式
中，下文中描述的本发明组合物以及本发明的方 法可用于治疗神经变性失调。
"神经系统失调，，是一种特征为神经元细胞或者神经元支持细胞异常或 者功能失常的病症或者疾病。所述失调能够影响中枢和/或周围神经系统。示 例性的神经系统疾病包括神经病、骨骼^L萎缩和神经变性疾病。
"神经变性失调"是复杂和致命性的疾病，潜伏发病，随后是进行性衰 退。临床表现由失调的部位和严重程度决定。尽管病因可能不同，但患有神 经变性失调的患者很可能显示定位于脑细胞的普遍萎缩，导致智力和躯体功 能的损害。示例性的神经变性疾病包括阿尔茨海默氏病，帕金森氏病， ALS(肌萎缩性侧索硬化)，亨廷顿氏病，taupathies诸如Pick's病，额颞痴呆 (fronto temporal dementia), 皮质基底节变性(cortico-basal degeneration)和进行 性核上性麻痹和海绵状脑病诸如癢痒症，疯牛病和牛海绵状脑病，
16Creutzfeldt-Jakob病，致死性家族性失目民，Gerstmann隱Straussler-Scheinker综合
症和库鲁病。
调。病原体包括原核微生物，低等真核微生物，复杂的真核生物，病毒，真 菌，朊蛋白，寄生虫，酵母，毒素和毒液(venom)。
原核微生物包括细菌诸如革兰氏阳性、革兰氏阴性和革兰氏可变细菌以 及胞内细菌。本文预期的细菌实例包括以下属中的种密螺旋体属(7)^;7o"emfl ),發b螺、3走体属(5o7re//a ),、淋3求菌属(iVez.^en.a ),军团#干菌属(丄eg/owe〃a 博德特氏菌菌属(Borafe&〃a 埃希氏杆菌属(Esc/zen'c/z/a 沙门氏 菌属(Sa/mowe〃a s/ .),志贺氏菌属(57n'ge〃a 克雷伯氏菌属(《/efo/e〃a s/ .)， 耶尔森氏菌属(7era/"/a 弧菌属(W6n'o w.)，嗜血杆菌属(Hemop/n7w 立克次氏体属(7 /cfetoz'a 衣原体属(C7z/am>^/<3 sp.)， 支原体属
(Jk^co/7/osma s/ .), 葡萄球菌属(S啤/zy/ococcws 链球菌属(5^印tococcws ".), 芽孑包杆菌属(5acz'〃M61 s; .)， 梭菌属(C7oWrWw附 sp,)， 棒杆菌属 (Co/^weZ)ac&n'ww 5p.), 丙酸才干菌属(iVop7.o"z,6ac&n'wm s/ .), 分支4干菌属 (A^co6acten'ww sp.),脈y^体属(t/reG/ /asmo！ 5/ .)和李其斤对争菌属(ZiWen'a 5p.)。
具体的种包括苍白密螺旋体(7Ve;w"ema / a仏Ww附)，伯氏疏螺旋体 (5。^re/Za 6wrgdc^/^r0 ，'淋3求菌(A^e/Men'a go"on-Zzea)，月卤月莫炎3求菌(7Vez-^en'a mem'"g7'^fo), 口耆月申军团菌(丄eg7'owe〃a p"ewwop/n7a)， 百日咳4干菌(5onie&〃a / eWwM^), 大肠牙干菌(5^c/2en'c/z/a co//)，伤寒沙门氏菌(5"a/wowe〃a ^p/ /), 鼠伤 寒沙门氏菌(Sa/mowe〃" (yp/z/ww/wm), 痢疾#干菌(;S7z,ge〃a ，肺炎才干
菌(i^7efe/e〃ap"ewwom'ae), 鼠疫耶尔森氏菌(7era/m'ap&sto)， 霍^U瓜菌(K/6n'o c/ o/erae)， 流感嗜血杆菌(//emopMRy /"/7we"z—， 立氏立克次体(i /cAe咖'" Wcfetoz7)， 沙目艮衣原体(CTz/awj^/z'a frac/zo附"""，月申炎支原、体(Afyco/ /"iw" ， 金黄色葡萄球菌(S鄉/zy/ococcws Gwrews)， 肺炎链球菌 (5VreptococcMs /7wezw7om'ae)，酉良脈4连J求菌(5^ej! tococc^s /^ogewas), 炭症4干菌 (万ac/〃w awf/zrac/力，肉毒4干菌(C7osfr/(iz'wm 6ofw//wwm)，石皮伤风4干菌(C7ostn.Www etom')， 产气荚膜#炎菌(C7ostrz.(i/M附/ e yH"gera)， 白p娱4干菌(Co^v"e6acfeWww fi^似/zen'a/)， 痤齊丙酸才干菌(/Vc;pWom'6ac&n'Mm acwe力，结才亥分才支才干菌 (Afyco6acten.ww ^^e/rw/osz's)， 麻风分才支才干菌(Afyco6acfen.wm /e/ rae)和单才亥纟田 月包增生李斯特菌(丄/Wen'" wo"。qytoge"as)。低等真核生物包括酵母或者真菌，诸如但不限于卡氏肺嚢虫
(PweMw0c3Asto car/""), 白色念J朱菌(Ca"(i/cib a/6/cam1)， 曲霉(^s/ erg77/us), 荚 月莫组织月包浆菌(///sto/ /ay附a capsw/afw附),皮炎芽生菌(B/(xytomyces tfe厂ma份/(5fa)， 新型隐3求菌(0;/; tococciw weq/brwara1)， 发裤菌(Trichophyton) 和小孑包子菌(Microsporum)。
复杂的真核生物包括蠕虫，昆虫，蜘蛛，线虫，aemobe,溶组织内阿米 巴(五"tomoe6a /^to/少/7'ca), 蓝氏贾第虫(G/fln/z'a /"wW/a)， 阴道毛滴虫 (TWc/zowowos vag/"a/^), 冈比亚布氏4偉虫(7yy/ a"osom(3 6n/cez' gam6/erae),克 氏4,虫(r^pa"oscww craz/), 结肠小袋纤毛虫(5a/a""&ww co//)， 弓形虫 (roxop/osma go"A7), 隐孑包'子虫(Cryptosporidium)或者利"f十曼虫(Leishmania)。
术语"病毒"使用其广义，包括以下家族的病毒腺病毒，乳头瘤和多 瘤病毒，疱渗病毒单纯疱渗，水痘-带状疱疹，Epstein-Barr， CMV,痘病 毒天花，牛痘(vaccina),乙肝，鼻病毒，曱肝，脊髓灰质炎病毒，风疹病 毒，丙肝，虫媒病毒，狂犬病病毒，流感病毒A和B,麻渗病毒，腮腺炎病 毒，HIV， HTLVI和II。
术语"真菌"包括例如，致病真菌诸如痺，组织胞浆菌病，芽生菌病， 曲霉病，隐J求菌病，孑包子丝菌病，；求孑包子菌病，paracoccidio画idoinycosis和念 J朱菌病。
术语寄生虫包括但不限于，体细胞绦虫，肝蛭，组织蛔虫，阿米巴，和 痴原虫，锥虫，利什曼虫，和弓形虫造成的感染。
根据一个具体和优选的实施方式，本发明的组合物预期用于治疗病原体 诱导的病理性失调。这类失调可能引起脓毒病，而这可能导致ARF(急性肾功 能衰竭)疾病或者病症诸如AKI、 ARDS(急性呼吸窘迫综合征)和多系统器官衰 竭中的任意一种。
根据一个具体和优选的实施方式，并且实施例3-7清楚的显示，本发明 的组合物尤其适于治疗ARF,这利用AKI模型得到证明，如上所述ARF是 一种可以通过激活或者添加伴侣蛋白緩解的失调。
急性肾损伤(AKI),原先被称为"急性肾小管坏死，，，涉及多种病理生理 机制。直接的肾小管毒性，内皮功能障碍伴肾微循环改变，肾小管低氧损伤， 来自活性氧物质的损害，受损的肾小球血液动力学和局部或者全身的炎症， 它们共同相互作用形成肾功能障碍，特征为肾小球滤过率(GFR)迅速降低和肾 小管功能缺陷。慢性肾病(CKD)的进展也反映了多种病理生理机制，其在原
18发性肾结构破坏后开始。3种主要的诱导因子(肾小球超过滤、蛋白尿和肾器 质性缺氧)通过多种化合物和相互作用机制导致微血管和肾单位的萎缩以及
间质性纤维化。CKD进展到末期肾衰竭和AKI两者都造成实质上的病态，并
显著的增加死亡率，还涉及临床控制需要的巨额花费。
尽管与这些失调有关的生理机制只被部分的了解，但肾器质性的凋亡或 者非凋亡细胞死亡显然起着重要作用，弱化这些过程的方法是治疗性介入的 主要目标。 一种这样的可能的介入是细胞适应机制的诱导，诸如应激应答基
因，包括热休克蛋白(HSP)的上调。这些沿着进化树非常保守的分子在受损蛋 白的整个蛋白酶体降解过程中充当受损蛋白的伴侣蛋白[Aufricht, C. Pediatr. Nephrol. 20: 707-713 (2005)]。 HSP被认为具有细胞保护作用，瞬时缺氧或者 热应激对它们的诱导被证明在体外和体内均减弱凋亡损害和AKI [Lu， CY. et al, Curr. Opin. Nephrol, Hypertens. 16:83-89(2007)]。
文描述的本发明方法进行治疗。
根据另一个具体实施方式
，提供本发明的组合物用于治疗ARF，尤其是 AKI。
如实施例2和7所示，包括SV40 VP 1的VLP保护肾细胞免受凋亡，还 可以保护细胞抵抗氧化应激。因此，应当注意到还可以体外(invitro)或者回体 (ex vivo)使用本发明的组合物从涉及氧化应激和凋亡的病理过程中拯救有需 要的患者的细胞。
术语凋亡或者程序性细胞死亡，是多细胞机体发育和健康的正常组成。 细胞死亡是对各种刺激的应答，并且细胞在凋亡期间对各种刺激的应答受到 控制和调节。这使得凋亡不同于另一种形式的细胞死亡(称为坏死)，在坏死中 不受控制的细胞死亡导致细胞裂解、炎性应答并有可能导致严重的健康问题。 但是，如前文所述， 一些情况下不受控制的凋亡过程可能导致病理性失调， 例如AKI，因此应当预防所述过程。因此本发明提供减弱有害凋亡过程并诱 导细胞存活途径的方法和组合物。
如上所述，本发明的组合物适用于涉及氧化应激的疾病。活性氧的产生 与生物系统轻易使活性中间体解毒或者轻易修复所致损害的能力之间的失调 造成氧化应激。所有形式的生命均在其细胞内维持还原环境。细胞的氧化还 原环境由酶维持，所述酶通过代谢能量的恒定输入维持还原状态。对这种正 常氧化还原状态的干扰可通过产生过氧化物和自由基引起毒性作用，所述过
19氧化物和自由基损害细胞的全部组分，包括蛋白、脂和DNA。广泛多种疾病
都显示自由基的过量产生、氧化应激和不充足的抗氧化活性。神经变性疾病
的一些实例是(见下文)，心脏病，HIV病，慢性疲劳综合症，肝炎，癌症，自 身免疫疾病，等等。
如实施例所述，本发明人未出版的数据显示SV40 VP1从氧化应激和凋 亡中拯救细胞，这可能通过诱导细胞存活机制，优选的PI3K-PKB/Akt存活途 径来实现。因此，根据一个实施方式，本发明的组合物可以用来在有需要的 患者的细胞中诱导细胞存活途径，优选的，PI3K-PKB/Akt存活途径。
应当注意到PKB/Akt是多种细胞存活机制中的关键角色。这尤其是在神 经变性疾病的潜在神经保护中得到证明[Schmeer, C. et al. Restor Neurol Neurosci 24:79-95 (2006)]，所述疾病包括帕金森氏病[Fallon, L. et al. Nat. Cell. Biol. 8:834-842 (2006)],阿尔茨海默氏病[Cole, G.M. et al, Exp. Gerontol. 42:10-21 (2007)],以及中风和脑损伤后的神经存活[Zhang， X. J. Cereb. Blood Flow Metab. 26:915-926 (2006)]。其他的实例是抗心肌肥厚[Patten, R.D. and Karas, R.H. Trends Cardiovasc. Med. 16:69- 75(2006)]和肾病[Mitch, W.E. J. Ren.Nutr. 17:66-69 (2007)]的保护。
更进一步，本发明提供用于增强伴侣蛋白对病理性失调的改善作用的药 物组合物。
应当理解本发明的药物组合物通常包括缓冲剂(一种调节其渗透性的试 剂)，以及可选的，本领域已知的一种或者多种药学上可接受的载体、赋形剂 和/或添加剂。组合物中还可以添加辅助活性成分。所述载体可以是溶剂或者 分散介质，包含，例如，水，乙醇，多元醇(诸如，甘油，丙二醇，和液态聚 乙二醇，等等)，其合适的混合物，和植物油。例如，通过使用包衣诸如卵磷 脂，就分散剂来说通过维持需要的粒径以及通过使用表面活性剂，可以维持 适当的流动性。
本文使用的"药学上可接受的载体"包括任意溶剂、分散介质、包衣、 抗细菌剂和抗真菌剂等等。这类介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领 域公知的。除非任何常规介质或者试剂与活性成分不相容，否则其在治疗组 合物中的使用也包括在本发明中。
在第二个方面，本发明涉及在有需要的患者中治疗病理性失调的方法。 该方法包括给^f皮治疗的患者施用治疗有效量的至少 一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段，或者包括至少一种衣壳蛋白或者其任意肽、突变 体或者片段的VLP，或者包括相同物质的组合物的步骤。
本发明的方法适用于治疗患有病理性失调诸如神经变性失调或者自身免 疫相关失调的患者。本文使用的术语"失调"是指正常功能存在障碍的病症。 "疾病，，是身体或者心理的任意反常情况，这造成患者或者与其接触的人的 不适、功能障碍或者痛苦。有时候该术语被广泛使用包括损伤、残疾、综合 征、症状、偏差行为以及结构与功能的不正常变化，而在其他情况下这些被
认为是可区分的类型。应当注意到术语"疾病(disease)"、"失调(disorder)"、 "病症(condition)"和"病(illness)"在本文中等同使用。
在说明书和权利要求中使用的术语"治疗(treat, treating, treatment)"表示 在患有病理性失调的患者中改善疾病活力的 一种或者多种临床表现。
"治疗"是指治疗性处理(therapeutictreatment)。那些需要治疗的是患有 任意病理性失调或者自身免疫相关失调的哺乳动物患者。"患者"或者"有 需要的患者"表示需要施用本发明的病毒衣壳蛋白或者任意药物组合物，以 预防、克服或者减慢这类伤害的任何哺乳动物。
"预防性处理(preventive treatment)，，或者"预防性治疗(prophylactic treatment)"是以保护性方式起作用，以抵御或者预防某事，特别是病症或者 疾病。
根据一个实施方式，病毒衣壳蛋白可以是乳头瘤病毒或者多瘤病毒衣壳 蛋白，或者其任意片段、肽、突变体、任意混合物和组合中的任意一种。优 选的，病毒衣壳蛋白可以是SV40 VP1、 VP2、 VP3,和其任意肽、片段、突 变体、混合物和组合中的至少一种。最优选的，病毒衣壳蛋白可以是SV40 VP1、其任意肽、突变体或者片段，或者包括SV40 VP1或者其任意肽、突变 体或者片段的任意VLP。
具体实施方式
涉及包括SEQIDNO:l所示氨基S吏序 列的SV40 VP1蛋白。
才艮据另一个具体实施方式
，突变的SV40 VP1分子可以是VP1AC突变 体。该突变分子优选的包括基本上由SEQIDN0.4表示的氨基酸序列。
优选的，利用本发明方法治疗的病理性失调是由参与质量控制过程或者 炎性过程的细胞蛋白失活引起的病症，因此，可以通过激活这类细胞蛋白得 到改善。
根据一个特别优选的实施方式，参与质量控制过程的蛋白可以是伴侣蛋 白。本发明清楚的证明，施用包含VP1的VLP或者由VP1 △ C突变分子组成的VP1五聚体，都会导致伴侣蛋白水平尤其是伴侣蛋白HSP/c70的升高。通
过被治疗动物的存活、降低的血尿素和肌酸酐水平清楚的证明，这种升高与
SV40 VP1对ARP病症诸如AKI的有益效果有关。
根据另一个实施方式，本发明的方法打算用于治疗病理性失调诸如神经 变性失调或者免疫相关失调。
根据一个具体实施方式
，本发明的方法适合于治疗免疫相关失调诸如自 身免疫病、恶性和非恶性增生性失调，移植排斥疾病和移植抗宿主疾病，以 及病原体诱导的失调。
在另一个特别优选的实施方式中，本发明的方法特别适合于治疗病原体 诱导的病理性失调。这类失调可引起脓毒病，而这可导致ARF(急性肾功能衰 竭)、ARDS(急性呼吸窘迫综合征)和多系统器官衰竭中的任意一种。
因此，根据一个特别优选的实施方式，所述ARF疾病可以是AKI。
如前文所述，急性肾损伤(AKI)的病理特征是不同程度的肾小管细胞损 伤。肾细胞死亡可由长时间肾缺血、肾毒素或者脓毒病引起。AKI在临床上 导致肾小球滤过率(GFR)和肾小管功能的快速(数小时到数天)下降，这导致尿 毒症毒素的滞留、酸碱平衡失调、体液失衡和几乎所有其他系统的功能障碍。
本发明方法使用的术语"有效量"或者"足够量，，表示实现预期结果必 需的量。"有效治疗量"由疾病的严重性以及预防或者治疗目的、给药途径 和患者的身体条件(年龄，性别，体重和主治医师已知的其他条件)决定。
可以按照任何常规剂量配方施用治疗性制剂。根据一个具体和特定的实 施方式，本发明使用病毒衣壳蛋白治疗ARF，如AKI模型所示。如实施例所 示，SV40 VP1蛋白以VLP的形式使用，其被注射到患病的动物。合适的剂 量范围介于0.01-100mg/kg体重，优选的大约0.1-50mg/kg,最优选的 0.1-20mg/kg。制剂通常包括至少一种上文限定的活性成分，以及一种或者多 种其可接受的载体。
如实施例所示，本发明的组合物和方法还可以4吏用突变的SV40 VP1分 子VP1AC,尽管实现对被处理细胞所需的有益效果可能需要更高的量。
应当注意到本发明的组合物和方法使用的制剂包括那些适于口服、直肠、 鼻或者肠胃外(包括皮下、肌内，静脉内和真皮内的)施用的制剂。所述制剂可 以方便地存在于单位剂型中，并且可以采用药学领域公知的任何方法制备。 包括在患者中产生预期作用所必需的有效量的所有这类化合物的性质、可用 性和来源都是本领域公知的，无需在本文中进一步描述。在另一个实施方式中，根据本发明方法的施用步骤，包括口服，静脉内， 肌内，皮下，腹腔，胃肠外，透皮，阴道内，鼻内，粘膜，舌下，表面局部， 直肠或者皮下施用，或者其任意组合。
如上所述，利用一种或者多种生理上可接受的载体，用于本发明的药物 组合物可以采用常规方式配制，所述载体包括赋形剂和辅助剂，其有利于将 活性成分加工成药学上可以使用的制剂。合适的制剂取决于选择的给药途径。
对于注射，本发明的活性成分可以在水性溶液中配制，优选的是生理上
相容的緩冲液诸如Hank's液，Ringer's液或者生理盐水緩冲液。对于透粘膜 施用，在制剂中使用对将渗透的屏障合适的渗透剂。这类渗透剂通常是本领 域已知的。
用于表面局部施用的药物组合物可以包括透皮贴片，软膏(ointment),洗 剂，乳剂，凝胶，滴剂，栓剂，喷雾剂、液体和粉剂。常规的药物载体，水 性、粉末或者油性基质，增稠剂等等可以是必需的或者所希望的。
对于口服给药，通过将活性化合物与本领域公知的药学上可接受的载体 组合可以轻易地配制化合物。这类载体可以将本发明的化合物配制为片剂， 丸剂，糖锭剂(dragee),胶嚢，液体，凝胶，糖浆剂，膏剂(slurry),悬液，等 等，用于患者的口服摄取。
用于口服的药物制剂可以利用固体赋形剂来制备，可选的，在根据需要 添加合适的辅助剂后，研磨所获混合物，并加工颗粒混合物，以获得片剂或 糖锭剂核心。合适的赋形剂是，尤其是，填充剂诸如糖，包括乳糖，蔗糖， 甘露醇，或者山梨糖醇，纤维素制品诸如，例如，玉米淀4分，小麦淀粉，米 淀粉，马铃薯淀粉，明胶，黄蓍树胶，曱基纤维素，羟丙基曱基纤维素，羧 曱基纤维素钠；和/或生理上可接受的聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。增 稠剂，调味剂，稀释剂，乳化剂，分散辅助剂或者结合剂可能也是需要的。
对于通过鼻吸入的施用，用于本发明的活性成分(其是病毒衣壳蛋白，或 者优选的，包括SV40 VP1的VLP,或者突变VP1分子)，可以方便地采用气 溶胶喷射物形式输送，所述气溶胶喷射物利用合适的喷射剂(例如，二氯二氟 曱烷，三氯氟曱烷，二氯四氟乙烷或者二氧化碳)从加压袋(pressurized pack) 或者喷雾器产生。就增压气溶胶而言，通过提供一个输送指定量的阀来决定
剂量单位。例如可以将分配器使用的明胶胶囊和明胶药筒制成包含化合物和 合适的粉末基质(诸如乳糖或者淀粉)的粉末混合物。可以将本文描述的制剂配制用于肠胃外给药，例如，通过推注或者连续 输注给药。用于注射的制剂可以存在于单位剂型，例如，安瓿中或者多剂量 容器中，可选的含有添加的防腐剂。组合物可以是溶于油性或者水性赋形剂
的悬液、溶液或者乳液，并且可以包含配方剂(formulatory agents)诸如悬浮剂、 稳定剂和/或分散剂。
用于肠胃外给药的药物组合物包括水溶性形式的活性制剂的水溶液。此 外，可以将活性成分的悬液制成合适的基于油或者水的注射悬液。合适的亲 脂性溶剂或者赋形剂包括脂肪油诸如芝麻油，或者合成脂肪酸酯诸如油酸乙 酯，甘油三酯或者脂质体。水性注射悬液可以包含增加悬液粘性的物质，诸 如羧曱基纤维素钠，山梨糖醇或者葡聚糖。可选的，悬液还可以包含合适的 稳定剂或者增加活性成分的可溶性以制备高浓度溶液的试剂。
此外，活性成分可以采用粉末形式，以便用合适的赋形剂配好后投入使 用，所述赋形剂例如无菌的、无热原的水溶液。
利用例如常规的栓剂基质诸如可可脂或者其他甘油酯，还可以将本发明 的药物组合物配制成直肠组合物诸如栓剂或者滞留型灌肠剂(retention enemas)。
因此，本发明的药物组合物包括，但不限于，溶液，乳液，和包含脂质 体的制剂。这些组合物可以利用各种组分产生，所述组分包括但不限于，预 制液体、自乳化固体和自乳化半固体。
适用于本发明的药物组合物包括含有实现预期目的所需有效量的活性成 分的组合物。更具体地，治疗有效量表示有效预防、减轻或者改善被治疗患 者的病症或者延长其存活的活性成分的量。
如上所述，治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力之内。
对于本发明治疗方法使用的任何药物组合物，最初都可以从体外分析估 算治疗有效的量或者剂量。例如，在动物模型中配制一定的剂量，然后可以 使用这类信息更准确的确定人的有效剂量。
通过标准的体外药学步骤，在细胞培养物或者实^r动物中确定本文所述 活性成分的毒性和治疗效果。从体外细胞培养物分析和动物研究获得的数据 可用于配制给人使用的剂量范围。根据使用的剂型和釆用的给药途径，该剂 量可以变化。各个医生根据患者情况可以选择准确的剂型、给药途径和剂量。根据待治疗病症的严重性和应答性，给药可以是单次或者多次施用，疗 程持续数天到数周，或者直到治疗起了作用或者实现了疾病状态或者症状的 减轻。
施用药物组合物的量显然取决于被治疗的患者，疾病的严重性，给药方 式，处方医生的判断，等等。
尽管预期本发明的方法尤其被用于治疗人类的病理性失调，但也包括其 他哺乳动物。作为非限制性的实例，哺乳动物患者包括猴，马，牛，犬，猫， 小鼠，大鼠和猪。
在第三个方面，本发明涉及增强细胞蛋白对病理性失调的改善作用的方 法，所述细胞蛋白参与质量控制过程。该方法包括将从患有病理性失调的患 者获得的细胞在回体或者体外与有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意 肽或者片段接触的步骤。
本发明还提供在有需要的患者中增强细胞蛋白对病理性失调的改善作用 的方法，所述细胞蛋白参与质量控制过程。该方法包括给所述患者施用治疗 有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽或者片段，或者包括相同物质
的任意VLP,或者包括相同物质的组合物的步骤。
根据一个特别优选的实施方式，参与质量控制过程的细胞蛋白可以是伴 侣蛋白，尤其是HSP/c70。
本发明还提供一种从氧化应激或者凋亡中拯救细胞的方法，包括将经历 氧化应激或者凋亡过程的细胞与有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意 肽、突变体或者片段，或者包括所述病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或 者片段的VLP，或者包括相同物质的组合物接触的步骤。
根据一个具体实施方式
，这些细胞是患有病理性失调的患者的细胞，所 述失调与凋亡过程或者氧化应激有关。
本发明还提供增强细胞存活途径，优选的PBK-PKB/Akt存活途径的方 法。本发明的方法包括将细胞与有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意 肽、突变体或者片段或者包括相同物质的VLP接触的步骤。根据一个具体实 施方式，利用本发明的方法和组合物对细胞存活途径的诱导，可以在体外或 者体内的细胞培养物中进行，或者，在有需要的患者体内进行。
根据一个实施方式，本发明任意方法提供的病毒衣壳蛋白可以是乳头瘤 病毒或者多瘤病毒的任意衣壳蛋白，或者其任意片段、肽以及混合物和组合。 优选的，病毒衣壳蛋白可以是SV40 VP1、 VP2、 VP3,和其任意肽、片段、突变体、任意混合物和组合中的至少一种。最优选的，病毒衣壳蛋白可以是
SV40VP1或者其任意肽、突变体或者片段，或者包括SV40VP1的VLP。特 别的，SV40VP1蛋白可以包括SEQIDNO:l所示的氨基^f列。
在另一个实施方式中，本发明方法使用的突变VP1分子可以是VP1AC 突变体，其优选的包括SEQ ID N0.4所示氨基酸序列。
优选的，本发明的方法增强参与质量控制过程的细胞蛋白的改善作用， 因此尤其可用于由这类蛋白失活引起的病理性失调，所述细胞蛋白优选的是 伴侣蛋白。
根据另一个实施方式，本发明的方法增强细胞蛋白对病理性失调诸如神 经变性失调或者免疫相关失调的改善作用，所述细胞蛋白优选的是伴侣蛋白。
根据一个具体实施方式
，免疫相关失调可以是自身免疫病、恶性和非恶 性增生性失调，移植排斥疾病和移植抗宿主疾病，以及病原体诱导的失调。
在另一个特别优选的实施方式中，病原体诱导的病理性失调可能引起脓 毒病，此病导致ARF疾病、ARDS(急性呼吸窘迫综合征)和多系统器官衰竭 中的任意一种。
因此，根据一个特别优选的实施方式，这类ARF失调可以是AKI。
在第四个方面，本发明涉及至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变 体或者片段在制备治疗病理性失调的药物组合物中的用途。
根据一个实施方式，本发明使用的病毒衣壳蛋白可以是乳头瘤病毒或者 多瘤病毒的任意衣壳蛋白，或者其任意片段、肽、突变体、混合物和组合。 优选的，病毒衣壳蛋白可以是SV40 VP1、 VP2、 VP3,和其任意肽、片段、 突变体、混合物和组合中的至少一种。最优选的，病毒衣壳蛋白可以是SV40 VP1或者其任意肽、突变体或者片段。
优选的，本发明的用途是制备增强参与质量控制过程的细胞蛋白的改善 作用的组合物，因此尤其可用于治疗由这类蛋白失活引起的病理性失调，所 述细胞蛋白优选的是伴侣蛋白。
根据另一个实施方式，本发明病毒衣壳蛋白的用途是制备治疗病理性失 调诸如神经变性失调或者免疫相关失调的组合物。
根据一个具体实施方式
，免疫相关失调可以是自身免疫病、恶性和非恶 性增生性失调，移植排斥疾病和移植抗宿主疾病，以及病原体诱导的失调。
病原体诱导的病理性失调可引起脓毒病，这可导致ARF失调、ARDS(急 性呼吸窘迫综合征)和多系统器官衰竭中的任意一种。
26根据一个特别优选的实施方式，这类ARF失调可以是AKI。本发明还提供至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段，
或者包括所述衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段的VLP,在制备用于
从氧化应激或者凋亡中拯救细胞的药物组合物中的用途。
根据一个具体实施方式
，本发明可以使用突变的VP1AC分子。虽然进行了公开和描述，但应理解本发明不限于本文公开的特定实施例、
方法步骤和组合物，因为这类方法步骤和组合物可以稍微不同。还应理解本
文使用的术语只是用于描述具体实施方式
，而不是旨在限制，因为本发明的
范围只是由所附权利要求和其同等物来限定。
必须指出，在本说明书和所附权利要求中使用的，单数形式"一个(a)"、"一个(an)"和"the"包括复数含义，除非上下文明确另外规定。
在本说明书以及下面的实施例和权利要求中，除非上下文另外需要，单
词"包括(comprise)"和其变形"包括(comprises)""包括(comprising)"应被_理解为表示包含一个指定的整体或者步骤(step)或者一组整体或者步骤(steps),但不排除任意其他整体或者步骤或者一组整体或者步骤。
下列实施例代表本发明人实施本发明各个方面使用的技术。应当理解当这些技术作为实施本发明的示例性优选实施方式时，本领域技术人员根据本文的教导，将意识到可以做出许多不背离本发明精神和预期范围的改变。
实施例实验步骤
還傲歸场郝模型,
通过6.5 mg/kg剂量的肾毒剂HgCb诱导AKI,其被正式称为ATN (急性
肾小管坏死)。观察小鼠的全身表现并测量血液中的尿素水平，确认被注射小鼠患上了AKI。正常健康动物的血尿素水平范围通常〈50mg/dL。在头3-4天AKI动物的血尿素显著增加。利用该HgCl2剂量处理的大部分动物在4天内死亡。存活的那些小鼠从第5天开始显示血尿素减少，倾向于康复。K丄尸財/务
在Sf9细胞中扩增利用多角体蛋白启动子[Sandalon (1997) ibid.; Sandalon,Z. and Oppenheim, A. In SV40 protocols, L. Raptis， ed. (Totowa, NJ, HumanaPress Inc.) (2001)]表达VP1的重组杆状病毒。简单来说，使用moi 10的高滴度病毒原液(stock)( >109 pfu/ml)感染Sf9细胞的对数期培养物，用于VP1制备。
27感染72小时后离心收集细胞，利用从Schreiber等[Schreiber et al.， NucleicAcids Research 17: 6419 (1989)]改进的步骤制备核提取物，或者在5-6天后，裂解被感染的Sf9细胞，然后从培养基收集核提取物。将核提取物等分，保存于-80'C。这类核提取物包含自发组装的SV40病毒样粒子(VLP)。为了去除大分子，主要是RNA(其可能滞留在VLP内)，核提取物按照下面3个步骤被分解然后再组装步骤A,在37。C用1 jal 150 mM DTT和10 (ig RNase处理5(il Sf9核提取物20分钟，终体积为10 pl。步骤B，向被处理的核提取物(步骤A)中添加一种再组装混合物(包含10 mM ATP， 20 mM Hepes-KOH緩冲液pH7.9, 80mMKCl， 40mMNH4Cl， 10mMMgCl2, 16%甘油和0.08% NP-40,终体积为10 pl),在37。C孵育该再组装反应物1小时。步骤C，添加10 |^1稳定緩沖液(150 mM醋酸钠緩冲液pH 5.2， 3 mM CaCl2， 120 mM KC1和40mMNH4Cl，保持160 mM的盐浓度)后，将包装反应物在冰上静置过夜，得到30jil的总体积。
将反应混合物用氯仿(5 W)处理，然后涡旋振荡所述混合物，离心分离并在含水层中回收部分纯化的VLP。在氩气中利用XM300膜(Millipore)通过搅拌-超滤作用将VLP进一步纯化，并浓缩 300倍(到终浓度5-10mg/ml)。将浓缩物重悬于0.5 M NaCl盐水(初始体积的一半)，另外再过滤3次。将纯化的VLP等分，并在-20。C保存直至使用。在使用前VLP用H20稀释3倍(到166mM的NaCl终浓度)，再用盐水(saline)稀释到需要的VP1浓度。
如下进行VLP的透射电子显微镜成像将样品吸附到聚乙烯醇缩甲醛(formvar)-碳-包被的铜网，并用1%磷鴒酸钠pH7.0染色。利用100kV的电压，在Philips CM-12电子显微镜下观察样品，并按照66,000 x的放大率拍照。
图1显示纯化的VLP。如该图所示，在两种收集方法中(核或者培养基)，VLP均表现为与野生型SV40(图1B)类似的均匀形状和大小的分离的纳米颗粒(图1A)。凝胶电泳显示它们包含 95%的VP1(图1C)。在颗粒中没有检测到DNA。
实施例1
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如本发明背景部分所述，伴侣蛋白被证明可以改善临床病症诸如急性肾小管坏死(ATN)或者现在被称为AKI的病症，并且SV40激活伴倡蛋白Hsp70测了不含任何遗传物质的SV40衣壳蛋白是否影响或者调节伴侣蛋白蛋白诸如Hsp70的水平。因此，然后鉴定了SV40衣壳蛋白对伴侣蛋白生物合成的诱导。向来自非洲绿猴肾的CV1细胞添加SV40衣壳蛋白(SV40VLP, 50ng和500 ng每l(^个细胞)，所述SV斗0衣壳蛋白是只包含VP1的病毒样粒子(VLP)以及解离的VP1五聚体。在添加衣壳蛋白后的数个时间点收集总细胞蛋白，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印迹分析等量的总细胞蛋白，所述Western印迹利用对哺乳动物HSP/c70伴侣蛋白特异的抗体。未接受治疗的小鼠被用作对照。图2A显示Western印迹，其指示Hsp/c70蛋白的水平。进一步分析SV40 VLP对HSP/c70表达的增强作用。如图2B所示，CV1细胞用50ngVLP处理，抗Hsp/c70抗体免疫染色，并在共焦显微镜T观察。该图清楚的显示，猴CV-1对VLP感染产生应答，表现为上调Hsp/c70。 Western分析显示在两种VP1浓度(50和500 ng),感染9小时后的蛋白水平均显著增力口。共焦显微镜检查(图2B)显示第6个小时Hsp/c70水平的微小增加。Hsp/c70在细胞中持续聚积，并且在感染9小时后向细胞核移位。第48小时Hsp/c70不再出现。利用突变的VP1 AC分子获得类似的结果(数据未显示)。因此本发明人总结出存在Hsp/c70的增加，开始于感染后6-9个小时。
实施例2
KLP保^培券时f"勿應浙^源亡
不断增加的证据表明伴估蛋白预防肾衰竭[Lu, CY. et al. Curr. OP. inNephrol. Hypertens. 16:83-89 (2007); Riordan， M. et al. Nat. Clin. Pract. N印hrol.2:149-156 (2006); Kelly, K丄Contrib. Nephrol. 148:86-106(2005)]。因此，本发明人检测了 SV40 VLP对hsp/c70的诱导是否可以保护细胞抵抗凋亡。利用依托泊戒诱导人肾HEK细胞的凋亡。如图3所示，每106个细胞添加50 ng VLP显著改善凋亡效应，所述细胞表现得类似于未经处理的对照。利用CV-1细胞获得类似的结果。乾々f ^
在自然界中SV40位于灵长类动物的肾。因此病毒靶向于小鼠的肾是并不令人惊讶的。如图4A和4B所示，单次尾静脉注射SV40 VLP 48小时后，利用抗VP1抗体在小鼠的肾小管中观察到大范围的染色。因此，这进一步证明了利用VLP或者衣壳蛋白治疗ARF失调的适用性和可行性。
29实施例3
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观察到的SV40 VLP和衣壳蛋白提高伴侣蛋白水平以及抗肾细胞凋亡的保护作用的效果鼓励本发明人进一步研究SV40 VLP和衣壳蛋白对病理性失调的可能有益效果，所述病理性失调尤其与肾有关。选择汞肾毒性小鼠模型用于初步研究，因为它具有高度重现性。为了建立小鼠模型，使用19-21克(6-9周)的BALB/C雌性小鼠。给小鼠腹腔内施用指定浓度的HgCl2。在指定天数从尾静脉取血，利用Reflotron尿素试验(Roche)测量尿素。如图5所示，各个HgCl2浓度的血尿素水平的标准偏差较低。根据该实验选择6.5 mg/kg HgCl2的剂量用于本发明的研究。在重复实验中该剂量的死亡率一直是大约90%。
^^凝^^/、^IV、^勿應危菱/^a2谬爭w源亡
为了检测VLP对肾毒性的效果，使用小鼠肾小管细胞[Haverty， T.P. et al.J. Cell Biol. 107:1359-1368 (1988)]代表急性肾衰竭期间体内受影响的肾小管上皮细胞。图6A和6B清楚的显示，利用15 ^MHgCl2处理细胞导致普遍的凋亡，而50 ng VLP/106个细胞的感染提供有效的保护。HEK和CV-1细胞获得类似的结果(未显示)。
实施例4
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如上所示，利用AKI动物模型，注射6.5mg/kgHgCl2的大部分动物都在3-4天内死亡。这些结果得到图7A证实，只有2/20(10%)的AKI动物存活。相反，施用VLP的动物中的存活率要高得多。图7A显示按照60-600微克/小鼠的剂量，接受3次VLP注射的11只动物的数据。该组的存活率是5/11(45%)。这些实验清楚证明了 VLP对AKI具有治疗效果。
为了进一步研究这些令人振奋的初步数据，检查下列3个实验组以分析VLP对存活的影响第一组(Sham)被施用替代VLP的盐水和替代HgCl2的PBS，第二组用HgCl2和VLP(AKI+VLP)处理，第三组用替代VLP的盐水和HgCl2处理。采用连续3次的每日注射(0.1mg/kg每天，第-3、 -2、 -1天)通过尾静脉给小鼠施用VLP (0.3 mg/kg,溶于盐水)。不施用VLP的小鼠被平行注射盐水。在第四天腹腔内注射溶于PBS的HgCl2，这一天在下面所示的实验中被记为第0天。平行的给sham动物施用PBS。观察到小鼠又存活了 14天。
30如图7C所示，所述治疗导致存活率从12% (6/49)增加到63% (19/30)。利用Kaplan-Meier/Mantel-Cox log-rank检验的统计分析标明显著性为P=0.000002。如图7B所示，在3 |ig/kg-3 mg/kg的较宽剂量范围内都观察到减毒作用。
实施例5
PTi ^果沐弄^f减弱AK7 ^活遂
本发明人然后检验了观察到的有益效果是否需要完整的衣壳，或者VP1五聚体中是否存在凋亡保护作用的足量信息。SV40 VLP由主要衣壳蛋白VP1的72个五聚体组成(360个单体)。单体结构是具有延伸的氨基端臂和羧基端臂的P-心型轴(barrel core)。五聚体通过360个羧基端臂聚集在一起。VP1 △C, 一种在羧基端臂有缺失的突变VP1衣壳蛋白，保留了核心结构但无法组装成VLP。在Sf9细胞中产生缺失突变体VP1 △ C65-His [Roitman- Shemer, V.et al. Biochem Biophys. Res. Commun. 353:424-430 (2007)]，并通过His-标签在Ni-NTA树月旨(Qiagen)上纯化。考马斯染色的SDS-PAGE(图8A)显示，在上样lmg蛋白的泳道中，蛋白是大约95%纯。
如上对VLP所述在各组小鼠(每组4只动物)中进行存活实验。如图8B所示，在注射0.750 mg/kg的小鼠中，VP1治疗导致75% (3/4)的存活。这些结果提示VP1 AC也能有效预防汞损伤，尽管与VLP相比其剂量更高。
实施例6
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本发明人进一步研究了用SV40 VLP治疗病理性失调(优选的是ARF)对其他肾衰竭指征的适用性和可行性。被检测的一个指征是肾脏结构和形态学。汞损伤3天后收集的3组小鼠的代表性肾在下面显示。尽管AKI肾更小并且较苍白，但来自VLP治疗小鼠的肾表现的与sham肾类似(图9A)。当检测其他指征时，也观察到VLP的有益效果。如图9B所示，感染后4天，与未接受治疗的AKI小鼠相比，VLP治疗AKI小鼠中血清尿素和肌酸酐水平(肾衰竭的两个标志)的增加显著减弱。值得注意的是，AKI小鼠的血清尿素在该实验的4天期间持续增加。相反，如图9C所示，接受VLP治疗的AKI动物的血清尿素在第3天达到峰值，此后开始降低。这种方式与VLP治疗动物的肾功能恢复一致，并与更高的存活率有关。实施例7棵^的批賴
为了分析SV40 VLP和VP1衣壳蛋白保护AKI动物的可能机制，检测了涉及的应激信号。
利用硫代巴比土酸反应物(TBARS)分析测量脂质过氧化作用的水平。
VLP治疗小鼠中该水平降低(图10)，表明VLP对氧化应激的减弱至少部分地
介导保护肾功能免受汞诱导的肾毒性。
在一个平行研究(未公开的数据，未显示)中，本发明人发现利用VP1 VLP
处理细胞导致PLC-Y和其信号途径非常迅速的激活。尤其是PARP-1以及caspases3和10的快速激活(在第1小时时)，表明凋亡途径的起始。但是细胞不进展到凋亡，该过程在第6小时被伴侣蛋白(Hsp/c70)和PI3K-PKB/Akt存活途径的激活终止，所述途径包括PI3K-PKB/Akt和Bad蛋白的磷酸化。因此，不受任何理论的约束，本发明人提出以下假设，即SV40 VP1衣壳蛋白(或者其任何突变体或者VLP)诱导PI3K-PKB/Akt存活途径。
权利要求
1. 一种治疗病理性失调的药物组合物，包括治疗有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段，或者包括至少一种衣壳蛋白或者其任意肽、突变体、衍生物或者片段的病毒样粒子(VLP)作为活性成分。
2. 如权利要求1所述的组合物，其特征在于所述病毒衣壳蛋白是乳头瘤病毒或者多瘤病毒的任意衣壳蛋白，或者其任意片l殳、突变体、衍生物、肽、混合物和组合。
3. 如权利要求2所述的组合物，其特征在于所述病毒衣壳蛋白是SV40VP1、 VP2、 VP3,以及其任意肽、突变体、衍生物、片段、混合物和组合中的至少一种。
4. 如权利要求3所述的组合物，其特征在于所述病毒衣壳蛋白是SV40VP1或者其任意肽、突变体或者片段，或者所述组合物包括含有至少一种SV40 VP1或者其任意肽、突变体或者片段的VLP。
5. 如权利要求4所述的组合物，其特征在于所述SV40 VP1突变体在其羧基端臂有缺失，被命名为VP1 △ C。
6. 如权利要求1所述的组合物，其特征在于通过激活参与质量控制过程或者炎性过程的细胞蛋白改善所述病理性失调。
7. 如权利要求6所述的组合物，其特征在于参与质量控制过程的所述蛋白是伴侣蛋白。
8. 如权利要求6和7中任一所述的组合物，其特征在于所述病理性失调可以是神经变性失调和免疫相关失调中的任意一种。
9. 如权利要求8所述的组合物，其特征在于所述免疫相关的失调是自身免疫病、恶性和非恶性增生性失调，移植排斥疾病和移植抗宿主疾病，以及病原体诱导的失调中的任意 一种。
10. 如权利要求9所述的组合物，其特征在于病原体诱导的所述病理性失调引起脓毒病，其导致急性肾衰竭(ARF)、 ARDS(急性呼吸窘迫综合征)和多系统器官衰竭中的任意一种。
11. 如权利要求IO所述的组合物，其特征在于所述ARF(急性肾衰竭)是AKI(急性肾损伤)。
12. 如权利要求1-5中任一所述的组合物，其用于治疗ARF的组合物。
13. 如权利要求1-5中任一所述的组合物，用于拯救细胞免受氧化应激和 凋亡中的任意一种，并诱导所述细胞的存活途径。
14. 如权利要求13所述的组合物，用于拯救来自有需要的患者的细胞免受氧化应激和凋亡中的任意一种，并诱导所述细胞的存活途径。
15. —种在有需要的患者中治疗病理性失调的方法，包括以下步骤给 所述患者施用治疗有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或 者片段，或者包括至少一种衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段的病毒 样粒子(VLP),或者包括相同物质的组合物。
16. 如权利要求15所述的方法，其特征在于所述病毒衣壳蛋白是乳头瘤 病毒或者多瘤病毒的衣壳蛋白，或者其任意片段、突变体、肽以及混合物和 组合中的任意一种。
17. 如权利要求16所述的方法，其特征在于所述病毒衣壳蛋白是SV40 VP1、 VP2、 VP3，以及其任意肽、突变体、片段、混合物和组合中的至少一种o
18. 如权利要求17所述的方法，其特征在于所述病毒衣壳蛋白是SV40 VP1或者其任意肽、突变体或者片段，或者包括所述SV40VP1的任意VLP。
19. 如权利要求18所述的方法，其特征在于所述SV180 VP1突变体在其 羧基端臂有缺失，被命名为VP1AC。
20. 如权利要求15所述的方法，其特征在于通过激活参与质量控制过程 或者炎性过程的细胞蛋白改善所述病理性失调。
21. 如权利要求20所述的方法，其特征在于参与质量控制过程的所述蛋 白是伴侣蛋白。
22. 如权利要求20和21中任一所述的组合物，其特征在于所述病理性 失调是神经变性失调和免疫相关失调中的任意一种。
23. 如权利要求22所述的方法，其特征在于所述免疫相关的失调是自身 免疫病、恶性和非恶性增生性失调，移植排斥疾病和移植抗宿主疾病，以及 病原体诱导的失调中的任意 一种。
24. 如权利要求23所述的方法，其特征在于病原体诱导的所述病理性失 调引起脓毒病，其导致ARF、 ARDS(急性呼吸窘迫综合征)和多系统器官衰竭 中的任意一种。
25. 如权利要求24所述的方法，其特征在于所述ARF是AKI。
26. —种增强细胞蛋白对病理性失调的改善作用的方法，所述细胞蛋白参与质量控制过程，所述方法包括以下步骤将从患有病理性失调的患者获 得的细胞与有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段， 或者包括所述病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段的VLP接触。
27. —种在有需要的患者中增强细胞蛋白对病理性失调的改善作用的方 法，所述细胞蛋白参与质量控制过程，所述方法包括以下步骤给所述患者 施用治疗有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段， 或者包括所述病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段的VLP,或者包 括相同物质的组合物。
28. —种从氧化应激或者凋亡中拯救细胞的方法，包括以下步骤将经 历氧化应激或者凋亡过程的细胞与有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任 意肽、突变体或者片段，或者包括所述病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体 或者片段的VLP，或者包括相同物质的组合物接触。
29. —种在有需要的细胞中诱导存活途径的方法，包括以下步骤将所 述细胞与有效量的至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段， 或者包括所述病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段的VLP,或者包 括相同物质的组合物接触。
30. 如权利要求28和29中任一所述的方法，其特征在于所述细胞是患 有病理性失调的患者的细胞。
31. 如权利要求28和29中任一所述的方法，其特征在于所述病毒衣壳 蛋白是SV40VP1或者其任意肽、突变体或者片段，或者包括SV40VP1或者 其任意肽、突变体或者片段的VLP。
32. 如权利要求31所述的方法，其特征在于所述SV40VP1突变体在其 羧基端臂有缺失，被命名为VP1 △ C。
33. 如权利要求30所述的方法，其特征在于所述病理性失调是神经变性 失调和免疫相关失调中的任意 一种。
34. 如权利要求33所述的方法，其特征在于所述病理性失调是ARF。
35. 至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段，或者包括 所述衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段的VLP，在制备用于治疗病理 性失调的药物组合物中的用途。
36. 如权利要求35所述的用途，其特征在于所述病毒衣壳蛋白或者其任 意肽、突变体或者片段，或者包括所述病毒衣壳蛋白的VLP,增强细胞蛋白在所述病理性失调中的改善作用，所述细胞蛋白与质量控制过程有关，优选 的是伴侣蛋白。
37. 至少一种病毒衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段，或者包括 所述衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段的VLP，在制备用于从氧化应 激或者凋亡中拯救细胞的药物组合物中的用途。
38. 如权利要求35和37中任一所述的用途，其特征在于所述病毒衣壳 蛋白是乳头瘤病毒或者多瘤病毒的衣壳蛋白，或者其任意片段、肽、突变体 以及混合物和组合，或者包括所述衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段 中的VLP。
39. 如权利要求38所述的用途，其特征在于所述病毒衣壳蛋白是SV40 VP1、 VP2、 VP3,以及其任意肽、突变体、片段、混合物和组合，或者包括 所述衣壳蛋白或者其任意肽、突变体或者片段中的VLP。
40. 如权利要求39所述的用途，其特征在于所述病毒衣壳蛋白是SV40 VP1或者其任意肽、突变体或者片段，或者包括所述SV40VP1或者其任意 肽、突变体或者片^:的VLP。
41. 如权利要求40所述的用途，其特征在于所述SV40VP1突变体在其 羧基端臂有缺失，被命名为VP1AC。
42. 如权利要求40所述的用途，其特征在于所述免疫相关的失调是自身 免疫病、恶性和非恶性增生性失调，移植排斥疾病和移植抗宿主疾病，以及 病原体诱导的失调中的任意一种。
43. 如权利要求42所述的用途，其特征在于所述病理性失调是AKI。
全文摘要
本发明涉及病毒衣壳蛋白作为治疗病理性失调的药物。更特别的，本发明涉及病毒衣壳蛋白VP1、VP2和VP3，优选的，SV40 VP1或者其任意肽、片段、突变体、衍生物和混合物，或者包含相同物质的病毒样粒子(VLP)，作为治疗病理性失调的组合物的活性成分，所述失调优选的是与参与质量控制过程的细胞蛋白尤其是伴侣蛋白的失活有关的疾病。本发明还提供治疗这类失调的方法以及SV40衣壳蛋白在制备药物组合物中的用途。
文档编号C12N7/01GK101506357SQ200780022745
公开日2009年8月12日 申请日期2007年6月18日 优先权日2006年6月18日
发明者阿里拉·奥本海姆 申请人:基因载体技术(Gvt)公司