专利名称：一种富锌蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种富锌蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基， 属于生药学技术领域。
背景技术：
蛹虫草，又名北冬虫夏草，属子囊菌亚门核菌纲球壳目麦角菌科 虫草属，是我国名贵中药材之一。现代药学研究表明蛹虫草中含有核 苷类、多糖类、虫草素、甾醇类等成分含量基本与冬虫夏草相同，对 免疫系统，神经系统及心血管系统等疾病具有治疗效果，并有抗肿瘤 和抗癌作用，是冬虫夏草理想的替代品，有广阔的发展前景。
锌是微量元素的一种，在人体内的含量以及每天所需摄入量都很 少，但对机体的性发育、性功能、生殖细胞的生成却能起到举足轻重
的作用，故有"生命的火花"与"婚姻和谐素"之称。人体正常含锌 量为2-3克。绝大部分组织中都有极微量的锌分布，其中肝脏、肌肉 和骨骼中含量较高。锌是体内数十种酶的主要成分；锌还与大脑发育
和智力有关。人体的睾丸、前列腺、精液当中，都含有高浓度的锌。 当人体内锌的含量缺乏时，性功能会因此而低下，合成睾丸素酶发生 紊乱，男子将会引起阳痿和脸上生长痤疮。锌对激发精子活动有着特 殊的作用，缺锌会造成精子活动力的下降。长期处于缺锌状态而未能 及时补充，可出现精子数量明显减少、睾丸萎縮，最后导致不育。
锌在人体中虽为微量元素，但作用却非常之大。孩子缺锌，将直 接影响体格及大脑的发育，还会出现厌食、免疫力减退等现象。锌可 以提高人体免疫系统的敏感性，同时可以直接抑制病毒的活性，从而
增强人体抗病能力；还可促进大脑蛋白合成，帮助神经系统的发育和 完善。锌可促进味蕾细胞的发育，增强孩子的食欲，改善孩子厌食、 偏食的状况，保证营养的全面摄入。
世界卫生组织规定，成人每天锌的摄入量为15毫克，而我国对 成年人的日推荐量为12 15mg，而我国男子锌的摄入量大约才9 毫克左右。膳食补充剂可以日服量为日推荐量的1/3 1/2,即每天可 以通过食物以外的方式补充4mg 7. 5mg。
国内外目前关于富锌蛹虫草子实体产品及其培养方法没有相应的 报道。
发明内容
本发明的目的在于克服上述已有技术的不足而提供一种操作简 单，培养周期短，子实体产率高，无污染无废弃物，具有补锌功能， 可以进行工厂化生产的一种富锌蛹虫草子实体的人工培养方法及其
培养基o
本发明的目的可以通过如下措施来达到 一种用于培养富锌蛹虫 草子实体的培养基，其特征在于其配方组分按重量份为大米40— 65份，酵母提取物0. 5—2. 0份，水60—85份，硫酸锌0. 01—1. 0份。
为了进一步实现本发明的目的，其配方组分按重量份为大米 50份，酵母提取物1.0份，水75份，硫酸锌0.5份。
一种富锌蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于包括培养基制 备，灭菌，接种，培养，分离，粉碎步骤，具体工艺步骤为
(1) 富锌培养基制备-
其配方组分按重量份为大米40—65份，酵母提取物0. 5—2. 0 份，水60—85份，硫酸锌0.01—1.0份，自然pH值；
(2) 培养基分装，灭菌
将配制好的培养基分装于罐头瓶中，封口，在120—13(TC条件 下灭菌18—30分钟；
(3) 冷却，接种
灭完菌后取出培养基，自然冷却至2(TC-30°C，在无菌条件下， 接入蛹虫草菌种；
(4) 培养
将接好种的富锌蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-30°C培养 8-12天，菌丝充分生长后，转移到18-20 。C、相对湿度85-95%、每 天11-13小时散射光条件下培养50—90天；
(5) 采收子实体 将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基；
(6) 烘干，制粒
将子实体置于50—8(TC气流干燥箱烘至恒重，粉碎后过60_ 120目筛，乙醇制粒，50—80。C干燥，整理装胶囊，用钴60照射杀
菌后包装即得富锌蛹虫草子实体胶囊产品。
为了进一步实现本发明的目的，所述的步骤3中接入的蛹虫草菌 种为固体培养的蛹虫草菌种。
为了进一步实现本发明的目的，所述的步骤3中接入的蛹虫草菌 种为蛹虫草液体菌种，该蛹虫草液体菌种通过试管斜面菌种培养和三
角瓶液体种子培养而成，具体工艺步骤为 试管斜面菌种培养
配制培养基其重量比组分为葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0. 5%
一l. 0%，酵母提取物0.1%—1. 0%，琼脂粉1. 0%—2. 0%，水余量，其 pH值为5.0—7.0;将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，15~30 "C暗培养5—10天；
三角瓶液体种子培养
配制培养基其重量比组分为葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0. 5%
_1. 0%，酵母提取物0. 0%，水余量，其pH值为5. 0—7. 0，将
配制好的培养基分装入锥形瓶中，封口后在120 13(TC条件下灭菌 18~30分钟，取出培养基，自然冷却至2(TC 3(TC，在无菌条件下接 入培养后的斜面菌种，15 3(TC培养5天 10天。
本发明同已有技术相比可产生如下积极效果和显著的进步申请 人通过对蛹虫草子实体对锌离子富集规律的研究，了解到蛹虫草子实 体的富集锌的能力高，本发明培养周期短，子实体产率高，无污染无 废弃物，具有补锌功能。本发明采用特定的培养基以及培养方法培养 的富锌蛹虫草子实体，可以增加产品的功效。并且富锌子实体在培养 的过程中加入无机锌，通过蛹虫草菌在生长过程中对锌元素的吸收和 转化，降低了锌对胃肠道的刺激，使锌能够更高效、更安全地被人体 吸收利用。
药理实验和临床实验数据表明，蛹虫草每天服用3g可以有显著 的免疫调节作用。在蛹虫草子实体的培养过程中，采用本发明的培养 基不仅原料易得且成本低，而且富锌蛹虫草产率高，达到每百克富锌 8至11克，比天然蛹虫草富锌率高出8000至10000倍，可以使蛹虫 草产品除了发挥虫草本身的药理作用之外，还能起到补充锌的作用。
本发明可以通过设计培养基中的锌加入量，控制产品中的锌含 量，获得所需要的锌含量的蛹虫草子实体。
具体实施例方式
下面对本发明的具体实施方式
作详细说明 实施例l:
(一) 菌种准备
低温保藏蛹虫草菌种:蛹虫草菌种蛹虫草5.701,来源于中国普通 微生物菌种保藏管理中心。
蛹虫草液体菌种按下述工艺步骤培养-
(1) 试管斜面菌种培养(活化)
配制培养基葡萄糖10g，蛋白胨10g，酵母提取物10g，琼脂 粉10g，水960g，其pH值为5.0,分装于试管中；将低温保藏菌种 在无菌条件下接入试管斜面，15 3(TC暗培养5—10天。
(2) 三角瓶液体种子培养
配制培养基葡萄糖10g，蛋白胨10g，酵母提取物10g,水970g， 其pH值为5. 0，将配制好的培养基分装入500ml锥形瓶中，每瓶装 200ml，封口后在120 130。C条件下灭菌18 30分钟，取出培养基， 自然冷却至20~30°C;在无菌条件下每瓶接入10ml—20ml培养好的 试管液体菌种，15~30°C，搅拌转速120rpm，培养5天~10天。
(二) 富锌培养基制备
其配方组分按重量份为大米40g，酵母提取物0.5g，水60g， 硫酸锌0.01g，自然pH值；
(三) 培养基分装，灭菌
将配制好的培养基分装于500ml罐头瓶中，食用菌专用封口膜 封口 ，在120—130。C条件下灭菌18—30分钟；
(四) 冷却，接种
灭完菌后取出培养基，自然冷却至2(TC-3(TC，在无菌条件下， 接入蛹虫草菌种；每瓶接入2—10ml培养好的蛹虫草液体菌种；
(五) 培养
将接好种的富锌蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-30°C培养 8-12天，菌丝充分生长后，转移到18-20 °C、相对湿度85-95%、每 天11-13小时散射光条件下培养50—90天；
(六) 采收子实体
将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基；
(七) 烘干，制粒
将子实体置于50—8(TC气流干燥箱烘至恒重，粉碎后过60—120 目筛，乙醇制粒，50—8(TC干燥，整理装胶囊，用钴60照射杀菌后 包装即得富锌蛹虫草子实体产品。
实施例2:
(一) 菌种准备-
蛹虫草菌种蛹虫草5.701,来源于中国普通微生物菌种保藏管 理中心。
(二) 富锌培养基制备-
其配方组分按重量份为大米65g，酵母提取物2.0g，水85g， 硫酸锌lg，自然pH值；
(三) 培养基分装，灭菌
将配制好的培养基分装于500ml罐头瓶中，食用菌专用封口膜 封口，在120—130。C条件下灭菌18_30分钟；
(四) 冷却，接种
灭完菌后取出培养基，自然冷却至2(TC-3CrC，在无菌条件下， 接入固体培养的蛹虫草菌种；
(五) 培养
将接好种的富锌蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-3(TC培养 8-12天，菌丝充分生长后，转移到18-20 °C、相对湿度85-95%、每 天11-13小时散射光条件下培养50—90天；
(六) 采收子实体 将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基；
(七) 烘干，制粒
将子实体置于50—8(TC气流干燥箱烘至恒重，粉碎后过60— 120目筛，乙醇制粒，50—8(TC干燥，整理装胶囊，用钴60照射杀 菌后包装即得富锌蛹虫草子实体产品。 实施例3:
(一)菌种准备
蛹虫草菌种蛹虫草5.701，来源于中国普通微生物菌种保藏管
理中心。
蛹虫草液体菌种按下述工艺步骤培养 (1)试管斜面菌种培养(活化)
配制培养基葡萄糖20g，蛋白胨6g,酵母提取物9g，琼脂粉15g，水950g，其pH值为6.0，分装于试管中；将低温保藏菌种在无 菌条件下接入试管斜面，15 3(TC暗培养5—10天。 (2)三角瓶液体种子培养 配制培养基葡萄糖20g，蛋白胨6g，酵母提取物9g，水965g， 其pH值为6. 0，将配制好的培养基分装入500ml锥形瓶中，每瓶装 200ml，封口后在120 130'C条件下灭菌18~ 30分钟，取出培养基， 自然冷却至20~30°C;在无菌条件下每瓶接入10ml—20ml培养好的 试管液体菌种，15~30°C，搅拌转速120rpm，培养5天 10天。
(二) 富锌培养基制备
其配方组分按重量份为:大米45g,酵母提取物l.Og，水65g 份，硫酸锌0.5g，自然pH值；
(三) 培养基分装，灭菌
将配制好的培养基分装于500ml罐头瓶中，食用菌专用封口膜 封口，在120—13(TC条件下灭菌18—30分钟；
(四) 冷却，接种
灭完菌后取出培养基，自然冷却至2(TC-3(TC，在无菌条件下， 接入蛹虫草菌种；每瓶接入2—10ml培养好的蛹虫草液体菌种；
(五) 培养
将接好种的富锌蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-3CTC培养 8-12天，菌丝充分生长后，转移到18-20 。C、相对湿度85-95%、每 天11-13小时散射光条件下培养50—90天；
(六) 采收子实体 将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基；
(七) 烘干，制粒
将子实体置于50—8(TC气流干燥箱烘至恒重，粉碎后过60— 120目筛，乙醇制粒，50—80。C干燥，整理装胶囊，用钴60照射杀 菌后包装即得富锌蛹虫草子实体产品。 实施例4:
(一) 菌种准备
蛹虫草菌种蛹虫草5.701，来源于中国普通微生物菌种保藏管
理中心。
(二) 富锌培养基制备
其配方组分按重量份为大米60g，酵母提取物1.5g，水80g，硫酸锌0.2g，自然pH值；
(三) 培养基分装，灭菌-
将配制好的培养基分装于500ml罐头瓶中，食用菌专用封口膜 封口，在120—13(TC条件下灭菌18—30分钟；
(四) 冷却，接种
灭完菌后取出培养基，自然冷却至20'C-30°C，在无菌条件下， 接入蛹虫草菌种；
(五) 培养
将接好种的富锌蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-30°C培养 8-12天，菌丝充分生长后，转移到18-20 °C、相对湿度85-95%、每 天11-13小时散射光条件下培养50—90天；
(六) 采收子实体 将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基；
(七) 烘干，制粒
将子实体置于50—8(TC气流干燥箱烘至恒重，粉碎后过60— 120目筛，乙醇制粒，50—8(TC干燥，整理装胶囊，用钴60照射杀 菌后包装即得富锌蛹虫草子实体产品。 实施例5:
(一) 菌种准备
低温保藏蛹虫草菌种蛹虫草菌种蛹虫草5.701 ，来源于中国普通 微生物菌种保藏管理中心。
蛹虫草液体菌种按下述工艺步骤培养
(1) 试管斜面菌种培养(活化)
配制培养基葡萄糖30g，蛋白胨5g，酵母提取物5g，琼脂粉 20g，水940g，其pH值为7.5，分装于试管中；将低温保藏菌种在无 菌条件下接入试管斜面，15 3(TC暗培养5—10天。
(2) 三角瓶液体种子培养
配制培养基葡萄糖30g，蛋白胨5g，酵母提取物5g，水960g， 其PH值为7. 5，将配制好的培养基分装入500ml锥形瓶中，每瓶装 200ml，封口后在120 13(TC条件下灭菌18 30分钟，取出培养基， 自然冷却至20 30°C;在无菌条件下每瓶接入10ml—20ml培养好的 试管液体菌种，15~30°C，搅拌转速120rpm,培养5天 10天。
(二) 富锌培养基制备
其配方组分按重量份为大米50g，酵母提取物1.5g，水70g, 硫酸锌0.5g，自然pH值；
(三) 培养基分装，灭菌
将配制好的培养基分装于500ml罐头瓶中，食用菌专用封口膜 封口，在120—130。C条件下灭菌18—30分钟；.
(四) 冷却，接种-
灭完菌后取出培养基，自然冷却至2(TC-3(TC,在无菌条件下， 接入蛹虫草菌种；每瓶接入2—10ml培养好的上述蛹虫草液体菌种；
(五) 培养
将接好种的富锌蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-30°C培养 8-12天，菌丝充分生长后，转移到18-20 °C、相对湿度85-95%、每 天11-13小时散射光条件下培养50—90天；
(六) 采收子实体 将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基；
(七) 烘干，制粒
将子实体置于50—8(TC气流干燥箱烘至恒重，粉碎后过60— 120目筛，乙醇制粒，50—8(TC干燥，整理装胶囊，用钴60照射杀 菌后包装即得富锌蛹虫草子实体产品。
权利要求
1.一种用于培养富锌蛹虫草子实体的培养基，其特征在于其配方组分按重量份为大米40—65份，酵母提取物0.5—2.0份，水60—85份，硫酸锌0.01—1.0份。
2. 根据权利要求1所述的一种用于培养富锌蛹虫草子实体的培 养基，其特征在于其配方组分按重量份为大米50份，酵母提取物 l.O份，水75份，硫酸锌0.5份。
3. —种富锌蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于包括培养基 制备，灭菌，接种，培养，分离，粉碎步骤，具体工艺步骤为(1) 富锌培养基制备-其配方组分按重量份为大米40—65份，酵母提取物0. 5—2. 0 份，水60—85份，硫酸锌0.01—1.0份，自然pH值；(2) 培养基分装，灭菌将配制好的培养基分装于罐头瓶中，封口，在120—13(TC条件 下灭菌18—30分钟；(3) 冷却，接种灭完菌后取出培养基，自然冷却至2(TC-3(TC，在无菌条件下， 接入蛹虫草菌种；(4) 培养将接好种的富锌蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-30°C培养 8-12天，菌丝充分生长后，转移到18-20 °C、相对湿度85-95%、每 天ll-13小时散射光条件下培养50—90天；(5) 采收子实体 将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基；(6) 烘干，制粒将子实体置于50—8(TC气流干燥箱烘至恒重，粉碎后过60— 120目筛，乙醇制粒，50—8(TC干燥，整理装胶囊，用钴60照射杀 菌后包装即得富锌蛹虫草子实体胶囊产品。
4. 根据权利要求3所述的一种富锌蛹虫草子实体的培养方法， 其特征在于所述的步骤3中接入的蛹虫草菌种为固体培养的蛹虫草 菌种。
5. 根据权利要求3所述的一种富锌蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于所述的步骤3中接入的蛹虫草菌种为蛹虫草液体菌种，该 蛹虫草液体菌种通过试管斜面菌种培养和三角瓶液体种子培养而成，具体工艺步骤为试管斜面菌种培养配制培养基其重量比组分为葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0. 5%一1.0%，酵母提取物0.1%—1. 0%，琼脂粉1.0%—2.0%，水余量，其 pH值为5.0—7.0;将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，15~30°。暗培养5—10天；三角瓶液体种子培养配制培养基其重量比组分为葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0. 5% 一l. 0%,酵母提取物0. 0%，水余量，其pH值为5. 0—7. 0，将配制好的培养基分装入锥形瓶中，封口后在120 13(TC条件下灭菌 18~30分钟，取出培养基，自然冷却至20。C 30。C，在无菌条件下接 入培养后的斜面菌种，15 3(TC培养5天 10天。
全文摘要
本发明公开了一种富锌蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基，其培养基配方组分按重量份为大米40-65份，酵母提取物0.5-2.0份，水60-85份，硫酸锌0.01-1.0份，自然pH值；其人工培养方法包括培养基制备，分装，灭菌；冷却，接种；培养；采收子实体；烘干，制粒步骤；其操作简单，培养周期短，子实体产率高，无污染无废弃物，具有补锌功能，可以进行工厂化生产。
文档编号C12R1/645GK101372671SQ20081015738
公开日2009年2月25日 申请日期2008年9月28日 优先权日2008年9月28日
发明者娟 丁, 冯志彬, 刘林德, 孙慧涌, 林 朱, 盖宇鹏, 程显好 申请人:鲁东大学