专利名称：存储稳定状态的核酸的新的皮肤取样试剂盒、通过使用该试剂盒的基因测试方法及其实 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于基因测试的新的皮肤基因卡、使用该基因卡获得DNA和RNA及进 行各种基因测试的方法及其实践应用。更具体地，本发明的发明人已开发能够简单、安全和 迅速地从人皮肤、毛发或粘膜获得样品并能够在室温下长期稳定存储和运送所得样品中包 括的DNA和RNA的皮肤基因卡。使用所得DNA和RNA进行各种基因测试，该基因测试包括 聚合酶链式反应(PCR)、逆转录(RT)-PCR、实时PCR、测序、杂交、DNA芯片分析、单核苷酸多 态性(SNP)分析、基因突变分析、启动子甲基化分析、基因表达分析等。该基因皮肤测试结 果可用于疾病预后、营养基因组测试(nutrigenomic test)、药物基因组测试、法医检验，例 如身份鉴定、基因疾病诊断、皮肤病诊断等。另外，通过客观评价皮肤或毛发状态，可以为美 容护理、美容学、皮肤病学和临床实践中的实践应用确立个性化的化妆品和皮肤护理系统。
背景技术：
包括人在内的多细胞有机体由众多细胞组成。细胞核具有存储遗传信息的DNA。 储藏遗传信息的基本单位称为基因。基因是DNA的一部分。蛋白质介导所有生物现象和细 胞功能。基因是引导和传递用于合成蛋白质的一系列命令的巨大信息单位。每个基因均具 有合成一种或多种特异蛋白所需的特异遗传密码。DNA具有双螺旋结构。每条螺旋链均由众多称为碱基的化学结构单位组成。有四 种类型的DNA碱基腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)和胸腺嘧啶(T)。这些碱基的序列 或碱基序列决定遗传信息。为了将DNA遗传信息物质化为细胞质中的蛋白质生产，需要中 间介体(intermediate mediator)，该介体称为RNA。DNA的遗传信息首先被复制到mRNA 中。这个过程称为转录。然后，在细胞质中，在tRNA和rRNA(翻译)的帮助下，核糖体对 mRNA的遗传信息解码成为蛋白质。三个碱基指定单个氨基酸。三核苷酸单位称为密码子。 核糖体生产的蛋白质通过翻译后修饰制备成活化蛋白。当细胞分裂时，DNA复制并完全相 同地转移到子细胞中。个体所有细胞中具有相同的DNA。所有细胞的类型、结构和功能， 及个体的身体状态和疾病发展可通过在细胞中被表达的蛋白质的类别和量确定，该类别和 量又可根据哪个RNA被转录到何种程度进行确定。也就是说，在每个细胞中被表达的基 因类别和量的差异起到重要作用。实际上，在个体细胞中被表达的基因百分比仅为3-5% (Aressns J, Armstrong Μ, Gilissen R, Cohen N. The human genome :an introduction. Oncologist. 2001 ；6 100-109)。有机体具有的全组基因称为基因组。相比，在个体中被表达的所有基因(即， mRNA)的组称为转录组，以及表达的蛋白质的全部补体(complement)称为蛋白质组。人基 因组占据总数超过30亿的碱基对，并据报道含有约30，000个基因。对于最近完成的人类 基因组计划，其主要目标是确定全人类基因组的碱基序列，在使用基因诊断和处理疑难病 症中取得显著发展，并打开了所谓个性化药物和预测药物的新纪元。生物现象通过(1)基因组DNA的遗传信息、(2)基因的转录和(3)表达的蛋白质确定。最近，研究人员积极进行研究，从而自动分析所有这些信息。对于这个目的，微 阵列或生物芯片是非常有用的。例如，使用如cDNA微阵列技术，试图研究生理学、病理学 和皮肤功能。而且，聚合酶链式反应(PCR)或其他技术可用于诊断皮肤感染和检测病原 体。尽管预期更好地理解皮肤病的诊断可通过经由基因测试准确评价皮肤状况实现，但实 际应用或确切的结果却很少。基因皮肤测试似乎可应用到个性化皮肤处理、美容护理和化 妆品中，但相关报道却很少(Fuller BR 等人.Gene array technology and the search for cosmeceutical actives.在Cosmoceuticals. Edited by Draelos ZD. Elsevier Saunders, 2005) 为了将基因皮肤测试投入实际应用，需要解决许多问题。特别地，大量研 究是关于怎样以非侵害的方式适当地获得皮肤样品，怎样分析基因，怎样诊断皮肤病和基 于结果评价皮肤状况，以及怎样将其实际应用于个性化皮肤护理中。本发明的目的在于解 决这些问题。使用DNA或RNA样品进行基因研究的其中一个最大问题是室温下核酸被迅速降 解。尤其，RNA可在几个小时内被核糖核酸酶(RNase A)降解，核糖核酸酶是在分离过程由 细胞分泌的且其在环境中是丰富的。本发明的发明人已开发使用壳聚糖在室温下长时间 以卡或液体形式稳定存储RNA和DNA的方法，并已获得专利或已申请相关专利。RNA和DNA 卡、PCR和逆转录(RT)-PCT试剂盒，和基于此的微阵列芯片用于存储、运送(carry)和分析 多DNA和RNA样品。在本发明中，RNA卡用于开发皮肤基因测试的试剂盒。皮肤是身体最大的器官，平均面积为1. 6m2并占成年人身体体重的约16%。它的 结构、功能和生理机能都非常复杂。最近，随着分子遗传学和蛋白组学的发展，已发现关于 皮肤结构、功能、生理机能、老化和疾病发展机制的新事实。皮肤保护身体免受外部刺激或危险的损害，并，例如通过体温调节使身体习惯于 环境变化。它的其他功能是感觉、分泌、排泄和内分泌荷尔蒙如维生素D和细胞因子等、免 疫和再生。进一步地，它在美容护理中发挥着关键作用。皮肤由外至内由三个主要层组成，表皮、真皮和皮下脂肪层(皮下组织)。皮肤附 件包括毛发、皮脂腺、汗腺(分泌腺)、毛细血管等。表皮是三个皮肤层中最薄的，但对皮肤保湿和皮肤保护发挥着重要作用。进一步 地，它可以阻止水分流失和组织损伤以及病原体的侵害。组成表皮的细胞的主要类型是角 质形成细胞，其中也存在黑素细胞、朗氏细胞和默克尔(Merkel)细胞。角质形成细胞在分 化时从基底层向上移动，从而形成最外面的角化层(角质层)。死的角质形成细胞在皮肤表 面脱落。角质层是防御皮肤的第一屏障。黑素细胞具有在角质形成细胞中延伸(extend) 的长树突。黑色素被运送到角质形成细胞并吸收或分散UV，从而保护皮肤免受损伤。在功能方面，皮肤可以看作是提供保护以免受有害物质或外部刺激影响的屏障。 它对理解这种皮肤屏障机制，及生理和病理学都非常重要。皮肤屏障功能中最重要的是表 皮的角质层。角质层由角层细胞(corneocytes)和脂质结构组成。角质层由蛋白质(40%)、 水(40% )和脂质(10-20% )组成。若将皮肤层比作砖墙，角层细胞类似于砖，而脂质结构 起灰泥的作用。皮肤保湿是健康皮肤的先决条件。它主要通过角质层实现。角质层通过(1)角层 细胞产生的天然保湿因子(NMF)、(2)角层细胞之间的脂质层、(3)细胞桥粒和(4)皮脂腺 分泌的皮脂保持皮肤湿润。表皮的脂质层主要由神经酰胺、胆固醇和游离脂肪酸组成。
真皮厚度是表皮的约15-40倍，并占据皮肤的最大体积。它由两层组成，乳头状 真皮层(papillary dermis)和网状真皮层。真皮的结构性组分(Structural component) 是细胞、结缔组织和细胞外基质。真皮中存在的细胞包括成纤维细胞、组织细胞、肥大 细胞、朗氏细胞、淋巴细胞和浆细胞。除此之外，还存在皮肤附件，例如血管、淋巴管、神 经、立毛肌(arrector pili)、分泌腺、顶泌汗腺、小汗腺管(eccrine duct)、毛皮脂单位 (pilosebaceous unit)、指甲(nail)等。真皮向表皮提供营养物，支撑表皮，保护身体免 受皮肤损伤，通过与表皮配合再生皮肤，存储水分，调节体温，并可用作感觉受体(receptor of sensation)0真皮的结缔组织富含纤维，例如胶原纤维、弹性纤维、网状纤维等。主要组分是胶 原和弹性蛋白。特别地，胶原是丰富的。皮肤中有五种胶原型，型1、3、4、7和8。其中，型 1是最丰富的，占80-85%。胶原和弹性蛋白形成表皮下的纤维结缔组织，从而支撑表皮和 提供弹性和柔性。存在分解胶原的酶，其中最重要的是基质金属蛋白酶1 (MMP1，胶原酶1)。 组织中还存在抑制MMPl的物质。它称为金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)。皮肤中胶原含 量通过胶原合酶、MMP和TIMP维持恒定。然而，当因减少的胶原合成、过度的MMPl作用、减 少的TIMP或类似情况造成平衡破坏时，皮肤将失去弹性并因胶原减少而形成皱纹。除了自 然老化过程之外，诸如UV、炎症和超氧化物基团等不良因素可加速MMPl的生成，从而加速 皮肤老化和恶化皱纹。真皮基质由糖胺聚糖或粘多糖组成。主要组分是透明质酸(也称为透明质多糖 (hyaluronan))和硫酸软骨素。也包括硫酸乙酰肝素。这些物质具有非常强的保湿能力。 皮肤中存在数种类型的透明质酸合成酶(HAS)。其中，HAS3存在于表皮角层细胞中，而HAS2 存在于真皮成纤维细胞中。最近，观测到水通道蛋白水通道蛋白3 (water channel protein aquaporin 3) (AQP3)在皮肤中被表达。该蛋白质在调节皮肤补水中发挥着重要作用。皮下组织也称为皮下脂肪层，其由脂肪组织组成。它向表皮和真皮提供营养物，决 定体形，维持体温，并用作身体的绝热体。它位于真皮下面，由血管、淋巴管、神经和脂肪细 胞组成，并用作抵抗外压的垫层(cushion)。根据皮脂和水分的含量，人的皮肤通常分为4种类型(1)正常型、(2)油型、(3) 干型和(4)混合型。最近，添加了作为第5种皮肤类型的敏感型，且老化程度与皮肤类型一 起被评价。然而，皮肤类型可不断地变化，因为它受各种因素影响，这些因素包括年龄、性 别、荷尔蒙状态、营养状态、生活模式、环境等。皮肤类型的分类对适当的皮肤护理和化妆品 的选择非常重要。皮肤护理和化妆品是关于皮肤的最重要的事项。化妆品的定义在不同国家有所 不同。在韩国和日本，化妆品被定义为涂、喷洒或其他方式施用到皮肤或毛发上从而保持 人体洁净、美丽或健康并对人体作用小的物质。相比之下，在美国，化妆品被定义为用于 漂洗、美化或增强人体外观而不改变结果或功能的物质。在欧洲，牙齿或口腔粘膜也被包 括。相对地，具有药学效果或结构上或功能上改变人体的物质则归类为药物。最近，生产了 许多属于在二者之间的对人皮肤的结构或功能产生效果的化妆品。它们称为药用化妆品 (cosmeceutical)(Sung-ku Ahn, Seung-Hun Lee. Skin aesthetics. Korea Medical Book Publisher. 2002 ；Cosmeceuticals. Edited by Draelos ZD.Elsevier Saunders，2005)。基本上，化妆品必须是稳定、安全、有效和舒适的。在此，有效指的是在物理化学、生理学和心理学方面的有效。例如，它是指补水、抗皱、抗老、皮肤增白、软化、染色或清 洁(cleanse)效果。因为不同的人皮肤类型和状况有所不同，因此选择合适的化妆品是 重要的。进一步地，确定在使用化妆品之前和之后准确和客观评价效果的标准是重要的 (Sung-ku Ahn,Seung-Hun Lee. Skin aesthetics. Korea Medical Book Publisher· 2002)。用于评价人皮肤状况和化妆品或药用化妆品效果的方法包括(1)形态测试(成 像研究)，⑵皮肤颜色分析，⑶皮肤柔软度和弹性测试，⑷皮肤温度和血流测试，(5)经 皮水分流失(TEWL)测试，(6)皮肤水化测试(skin hydration test), (7)脂质含量评价， (8) UV阻断效果测试，(9)毛发保湿和损伤评价和(10)超声测试(Sung-ku Ahn, Seung-Hun Lee. Skin aesthetics. Korea Medical Book Publisher. 2002 ；Grove GL等人· Evaluating cosmeceutical efficiency.在Cosmeceuticals. Edited by Draelos ZD. Elsevier Saunders,2005)。然而，这些测试中大部分聚焦皮肤结构、形状、生理学或病理学之一，并因缺少客 观性和再现性而局限于实际应用。因此，需要一种能够准确和客观评价人皮肤状况的新测 试方法，从而有助于分类皮肤类型，选择个性化化妆品或药用化妆品，并在其应用后评价效 果。这也是本发明所致力于的。当今，美化和清洁人体和保持皮肤或毛发健康的化妆品的传统概念，随着积极改 变和改进皮肤的功能化妆品的到来而改变。也就是说，可用作化妆品和药物的药用化妆品 变成主流。化妆品工业是综合性工业，包括化学、生物、药物学和皮肤病学的基础应用技术。 当前，因为在其中引入了分子遗传学，试图更准确地理解皮肤生理活性和分子病理学，并开 发个性化皮肤护理、化妆品和药用化妆品。皮肤患上的多种疾病具有多种症状和征象。皮肤病包括遗传病、精神皮肤病 (psychocutaneous disorder)、光敏性皮肤病、物理因素诱导的皮肤病、职业性皮肤病、 荨麻疹、红斑、药疹、湿疹、牛皮癣、免疫病症、感染病、性传播疾病、色素病症(pigmentary disorder)、血管病、结缔组织病症、皮下组织病症、皮脂腺和汗腺疾病、毛发病、指甲病、良 性和恶性肿瘤、癌前病变和粘膜病。由诸如内分泌病或新陈代谢紊乱等全身疾病引起的皮 肤病是罕见的。感染可通过细菌、肺结核菌、真菌、病毒、寄生虫等引起。性传播感染也可引 起皮肤病。皮肤中发生的病症包括痒(搔痒症)、灼热(scorching)、灼痛(burning)、疼 痛(pain)、感觉减退(hypoesthesia)、麻木等。皮肤病相关的征象包括初始原发性损害 和由原发性损害发展的继发性损害。原发性损害包括斑点(macule)、斑片(patch)、丘疹 (papule)、斑块(plaque)、节瘤(nodule)、月中瘤(tumor)、风疫块(wheal)、小泡(vesicle) 等，而继发性损害包含鳞屑(scale)、结皮(crust)、表皮脱落(excoriation)、糜烂 (erosion)、溃荡(ulcer)、症痕(scar)、开裂(fissure)和苔藓样硬化(Iichenification)。皮肤的诊断似乎容易，因为可直接看到。然而，不同皮肤病可展现出相似病症和 征象，且对于相同的患者，和对于相同的疾病，根据阶段可观测到不同外观。因此，仅用经 面谈病症的主观检查或征象的体格检查很难诊断。甚至皮肤科医生都会发现很难诊断一 些疾病。诊断皮肤病的测试包括用于检测细菌感染的革兰氏染色和培养(Gram staining and culturing)、用于检测真菌感染的KOH染色和培养、用于检测单纯性疱疹和带状疱 疹(herpes zoster)的Tzanck测试、用于检测挤疫的刮伤挤疫(scabies scraping)、用于检测梅毒的暗场检验(dark-field examination)、斑贴测试(patch test)、通过注 射刺激皮肤、刺(pricking)或刮伤(scratching)并监测反应、皮肤划痕现象测试、玻片 压诊(diascopic examination)、伍氏灯检查(Wood ‘ s lamp examination)等。除非 通过上面测试作出诊断，否则皮肤活组织检查是必要的，在该皮肤活组织检查中，皮肤组 织在通过免疫组织化学染色或免疫荧光测试染色之后在光学显微镜下进行观测，或使用 MitHiiif^lIlJ (Sung-ku Ahn, Seung-Hun Lee. Skin aesthetics. Korea Medical Book Publisher. 2002 ；Korean Dermatological Association Textbook Publishing Committee. Dermatology.第 4 版· Ryo Moon Gak. 2001)。然而，所有前述测试仅在显微镜下监测皮肤损害的结构变化，而未能监测生理、功 能、生物化学，及其分子和遗传性改变。因此，它们在准确性和效果上都有局限性。因此，迫 切需要能够鉴定皮肤病的根本原因和发展及确定最佳的个性化治疗的新测试方法。可通过在皮肤中被表达的基因、从而产生的蛋白质、碳水化合物、脂质等的组合物 的变化，和组成皮肤的细胞的状态，确定皮肤状况和类型。不仅继承的遗传因素，还有后天 的因素，例如环境因素、饮食和生活模式都可影响它们。因而，调查继承的遗传因素和检查 皮肤中被表达的基因将提供对皮肤状况最准确和根本的认识。这也是本发明目的所致力于 的。
发明内容
[技术问题]目前，在皮肤病诊所、化妆品和整容整形诊所、美容护理店，和全世界化妆品公司 中，都进行经面谈的医学检查、体格检查、理化检查，和使用各种仪器的形态检查，以评价皮 肤状况和诊断皮肤病。然而，已有的测试方法在从根本上和客观上评价所有个体皮肤方面 是有限的。进一步地，迄今为止，还没有科学上标准的测试方法。现在可获得的最客观的测 试方法是在活组织检查之后监测皮肤微结构的变化。然而，该方法是非侵害的，不能监测生 理、功能或生物化学变化。因此，需要能够准确和客观评价人皮肤状况，从而有助于皮肤类 型分类，选择个性化化妆品或药用化妆品，和评价应用后的效果的新方法。本发明目的在于 提供此种方法。在这个方面，最有前途的方法是基因测试。通过皮肤中表达的基因，从而产生的蛋 白质、碳水化合物、脂质等的组合物的变化，和组成皮肤的细胞的状态可确定皮肤状况及类 型和皮肤病的发病。不仅继承的遗传因素，还有后天的因素，例如环境因素、饮食和生活模 式都可影响它们。因而，调查继承的遗传因素和检查皮肤中表达的基因将提供对皮肤状况 最准确和根本的认识。然而，为了实际应用皮肤基因，许多问题仍待解决。首先，安全获得 适于测试和运送的皮肤样品的方法未确立。其次，从所得皮肤样品中获得特异基因和进行 包括形态、突变和表达的各种基因测试的方法未确立。第三，将测试结果应用于实际临床诊 断或化妆品目的的方法和标准未确立。如果可以安全和简单地获得，皮肤可能是用于各种 基因测试的最佳样品。[技术方案]如上所述，人皮肤由数层组成。在真皮和表皮中，甚至在相同表皮中，不同的细胞， 即，角质形成细胞、黑素细胞、朗氏细胞等表达不同基因。因此，确保稳定并具有统一厚度的皮肤取样的标准化和规范化是先决条件。除此之外，对于不仅适用于临床目的，而且适用于 化妆品或其他目的的皮肤取样方法，该方法必须安全、非侵害且简单。如果可以，优选公众可 以使用的“(自制(DIY)) ”方法。为了克服现有基因皮肤测试方法的不足，需要能够进行安全 和稳定的皮肤取样的方法。除此之外，要保证从皮肤样品中获得优质和适量的DNA和RNA。进一步地，利用皮肤基因卡获得包括在样品中的DNA和RNA，进行复杂和各种基因 测试应当是可能的。此种测试的实施例如下用于扩增特异基因的一些或所有DNA的聚合 酶链式反应(PCR)，用于扩增特异表达的基因的一些或所有DNA的逆转录(RT)-PCR，用于量 化基因表达水平的实时RT-PCR，使用质粒载体和E. coli克隆通过PCR和RT-PCR获得的基 因，PCR之后的限制性片段长度多态性(RFLP)分析，经由自动测序分析或寡聚核苷酸微阵 列(寡DNA芯片)和随后单核苷酸多态性和突变的分析的特异基因的碱基测序，经由cDNA 微阵列的基因表达差异的同步分析，和经由甲基化特异性PCR(MSP)和亚硫酸氢盐基因组 测序的启动子甲基化作用的分析。第三，所确立的基因测试方法应当适用于现行的临床实践、美容护理和其他领域。 例如，需要通过准确评价皮肤保护身体、保湿、再生等功能更准确地和客观地分类皮肤类 型，以便该结果可用于选择个性化皮肤护理、化妆品和药用化妆品。特别地，该测试方法应 当对确定干燥、老化、光老化或敏感皮肤和治疗它们有帮助。除此之外，它应当可以准确诊 断包括炎症、湿疹、免疫相关疾病、感染、牛皮癣等的疑难皮肤病，和应当可以选择适当的治 疗。进一步地，该测试方法应当可应用于各种基因测试中，这些基因测试包括诊断遗传性基 因疾病、身份鉴定和亲子认定、在器官移植之前的基因分型等等。本发明旨在提供这些问题的解决方法。[有益效果]根据本发明的皮肤基因卡试剂盒能够从来自人体皮肤、毛发、粘膜等的各种样品 中非侵害地和简单地取样，并能够在使得样品中包括的DNA和RNA甚至在室温下长时期安 全的情况下存储和运送该样品。DNA和RNA可容易地和稳定地从样品中获得，且它们可应 用于各种基因测试，这些基因测试包括聚合酶链式反应(PCR)、逆转录(肌)寸0 、实时？0 、 PCR-限制性片段长度多态性(RFLP) ,Northern杂交、克隆、碱基测序、寡聚核苷酸微阵列分 析、甲基化特异性PCR(MSP)、亚硫酸氢盐基因组测序等。因而，它可应用于单核苷酸多态性 (SNP)分析、突变分析、基因表达分析等。可利用通过本发明确立的皮肤基因卡试剂盒和基 因测试方法，通过检查在皮肤功能、生理和病理方面发挥关键作用的30个基因的表达更准 确地评价皮肤状况，和更准确地和客观地分类皮肤类型。进一步地，该结果在选择个性化皮 肤护理、化妆品和药用化妆品中有帮助。特别地，在美容护理和化妆品领域中，它将有助于 诊断干燥、老化或敏感皮肤及护理和治疗它们。使用通过本发明确立的皮肤基因卡试剂盒 和基因测试方法，可更准确地诊断包括肿瘤、炎症、湿疹、免疫相关性疾病、感染等多种皮肤 病，和可为个体皮肤病选择个性化治疗。另外，本发明皮肤基因卡和基因测试方法可用于各 种基因测试，这些基因测试包括简单和安全地诊断遗传性基因疾病、身份鉴定和亲子认定、 在器官移植之前的基因分型等。
以下结合附图进行详细说明，所披露示例性实施方式的上述和其他方面、特征和优势将由此更加明显，其中
图1示出本发明的流程图；图2示出通过将纸质绷带(3M)附着在RNA卡(Goodgene公司)上制备的皮肤基 因卡，其作为本发明的一种实施方式。图3示出关于是否可从皮肤基因卡中获得DNA的测试结果(泳道1 阴性对照，泳 道2 存储一天后从皮肤基因卡中获得的样品，泳道3 存储3天后从皮肤基因卡中获得的 样品，泳道4 存储7天后从皮肤基因卡中获得的样品)；图4示出聚合酶链式反应(PCR)分析结果，该分析结果是关于在室温下长期存储 后DNA是否没有降解地保持在利用皮肤基因卡获得的皮肤细胞中，并且是关于它是否可以 被扩增和分析(泳道1 存储5天后从皮肤基因卡中获得的样品，泳道2 存储15天后从皮 肤基因卡中获得的样品，泳道3 存储30天后从皮肤基因卡中获得的样品)；图5示出利用EasySpin试剂盒(Intron)，从利用皮肤基因卡获得的皮肤样品中分 离RNA的结果(泳道1 :lKbp大小的标记物，泳道2 :1 μ g样品，泳道3 :0. 5 μ g样品)。图6示出对β-肌动蛋白基因进行的逆转录(RT)-PCR的结果，该逆转录是通过使 用利用试剂盒取样1天、1周和1月之后获得的RNA进行的，以便调查在室温下长期存储之 后RNA是否没有降解地保持在利用皮肤基因卡获得的皮肤细胞中(泳道1 100bp DNA标记 物，泳道2 阴性对照，泳道3 存储1天的样品，泳道4 存储1周的样品，泳道5 存储1月 的样品)；图7示出关于在采集带有根部的毛发样品之后，是否可从皮肤基因卡中分离出 DNA的测试结果(泳道1 :40Kbp T7DNA,泳道2 存储1天的样品，泳道3 存储1月的样品， 泳道4:存储1年的样品)；图8示出关于在采集带有根部的毛发样品之后，是否可从皮肤基因卡中分离出 RNA的测试结果(泳道1 :RNA标记物，泳道2 存储1天的样品，泳道3 存储1月的样品，泳 道4:存储1年的样品)；图9示出关于特异基因的PCR是否可以在没有从皮肤基因卡分离DNA的情况下进 行的测试结果(泳道M:100bp标记物，泳道1 阴性对照，泳道2 阳性对照(HaCaT细胞系)， 泳道3:来自正常成年人的皮肤样品)；图10示出关于特异基因的RT-PCR是否可以在没有从皮肤基因卡分离RNA的情况 下进行的测试结果(泳道M:100bp标记物，泳道1 阳性对照(HaCaT细胞系)，泳道2:来自 正常成年人的皮肤样品)；图11示出关于是否可以使用从皮肤基因卡分离的RNA进行实时PCR的测试结果 (泳道2 在300ng的β -肌动蛋白，泳道3 在2000ng的β -肌动蛋白，泳道4 在30，000ng 的β -肌动蛋白，泳道M 100bp DNA标记物，泳道5 =MMPl基因的样品，泳道6 =COLlAl基因 的样品，泳道7 弹性蛋白基因的样品，泳道8 弹性蛋白酶基因的样品，泳道9 :ΤΙΜΡ基因的 样品，泳道10 抑弹性酶蛋白(elafin)基因的样品)；图12示出用于克隆从皮肤基因卡获得的基因的基因扩增结果(泳道1 :100bp DNA 标记物，泳道2 =MMPl基因产物)；图13示出用于克隆通过PCR扩增的基因的载体图谱；图14示出在将MMPl基因克隆进pGEM-T Easy载体的测序结果；
图15示出利用皮肤基因卡提取皮肤基因组DNA，和进行PCR以对心血管病相关基 因的单核苷酸多态性(SNP)进行分析，及随后将产物在1. 5%琼脂糖凝胶上电泳的结果(泳 道1和13 IOObpDNA大小标记物，泳道2和3 :eN0S基因，泳道4和5 :MTHFR基因，泳道6和 7 :AGT基因，泳道8 :ACE基因，泳道9和10 :AT1R基因，泳道11和12 ApoE基因)；图16示出利用皮肤基因卡提取皮肤基因组DNA，和进行PCR以对心血管病相关基 因进行SNP分析，及随后在用表3中给出的限制酶处理之后将产物在1. 5%琼脂糖凝胶上 电泳的结果(泳道1、12和13 IOObp DNA大小标记物，泳道2和3 :eN0S基因，泳道4和5 AGT基因，泳道6和7 :ACE基因，泳道8 :AT1R基因，泳道9和10 :ApoE基因，泳道11和14 MTHFR 基因)；图17示出利用皮肤基因卡提取皮肤基因组DNA，和对在癌发生中发挥重要作用 的P53肿瘤抑制基因进行PCR，及随后将产物在1. 5%琼脂糖凝胶上电泳的结果(泳道1 IOObp DNA大小标记物，泳道2 阴性对照，泳道3 阳性对照，泳道4和6 测试样品)；图18示出将图17的PCR产物在1. 5%琼脂糖凝胶上电泳、分离和纯化该产物和使 用ABI 3130测序仪分析碱基序列以鉴定p53肿瘤抑制基因的突变(175C — A)的结果；图19示出在利用皮肤基因卡获得鳞状细胞癌皮肤样品和存储之后，经由寡聚核 苷酸微阵列对RNA样品的基因分型结果(使用CanScan DNA芯片(Goodgene)鉴定鳞状细 胞癌患者的P53基因(外显子7、密码子282CGG —TGG)的突变)；图20示出用于使用从皮肤基因卡获得的RNA鉴定特异基因表达的northern印迹 测试结果(泳道M:RNA标记物，泳道1 来自正常成年人的样品1，泳道2 来自正常成年人 的样品2，泳道3 来自正常成年人的样品3，泳道4 来自正常成年人的样品4)；图21示意性示出仅位于DNA的CpG 二核苷酸的5’ -位上的胞嘧啶残基上的甲基 化；图22示出特异基因上的甲基化发生的测试结果，其中该特异基因来自从皮肤基 因卡获得的DNA (泳道1 :100bp DNA标记物，泳道2 阴性对照，泳道3 从皮肤基因卡获得 的样品)；图23示出化学修饰步骤，该步骤是用于使用从皮肤基因卡获得的DNA样品证实C 碱基在基因的特定部分甲基化(当用亚硫酸氢钠处理DNA样品时，碱基序列中CpG岛的未 甲基化的胞嘧啶碱基被尿嘧啶(胸腺嘧啶)取代)；图24示出使用图23中的亚硫酸氢钠处理的DNA样品对MYOD基因进行PCR，和随 后将产物在1. 5%琼脂糖凝胶上电泳的结果(泳道1 :100bp DNA大小标记物，泳道2 =MYOD 基因PCR产物)；图25示出图24中的MYOD PCR产物的碱基测序结果，该测序通过使用ABI 3130 测序仪进行，用以鉴定DNA是否被图23中的亚硫酸氢钠处理准确甲基化(如箭头所示，CpG 岛的未甲基化的胞嘧啶碱基被尿嘧啶(胸腺嘧啶)取代)；图 26 示出使用 AmpFl STR Profiler Plus PCR扩增试剂盒(Applied Biosystem) 进行 9 个短串联重复(STR)基因座(D3S1358、D5S818、D7S820、D8S 1179、D13S317、D18S51、 D21S11、FGA和vWA)的多重PCR，并随后通过在1. 5%琼脂糖凝胶上电泳的结果，用以利用 皮肤基因卡提取的皮肤基因组DNA进行身份鉴定(亲子鉴定)(泳道1 :500bp DNA大小标 记物，泳道2和4 卡样品，泳道5 阴性对照，泳道6 IOObp DNA大小标记物)
图27示出进行两个VNTR基因座(D1S80、D17S30)的PCR和随后在1. 5%琼脂糖 凝胶上电泳的结果，用以利用皮肤基因卡提取的皮肤基因组DNA进行身份鉴定(亲子鉴定) (泳道1-5 :D1S80,泳道1 =IOObp DNA大小标记物，泳道2和4 卡样品，泳道5 阴性对照， 泳道6-10 :D17S30,泳道6 IOObp DNA大小标记物，泳道7、8和9 卡样品，泳道10 阴性对
照)；图 28 示出使用 ABI 3130 基因分析仪(Applied Biosystem)和 GeneMapper ID 程 序(Human Identification Detection,Applied Biosystems) (A :STR标记物D3S1358 内部 控制大小标记物(internal control size marker)，B和C 测量来自卡样品的STR标记物 D3S1358PCR产品的标准)分析图26和27的PCR产物的结果；图29示出进行代表性药物代谢基因，CYP2D6基因的PCR，和通过PCR-限制性片段 长度多态性(RFLP)调查CYP2D6多态性，和对利用皮肤基因卡提取的皮肤基因组DNA测序 的结果；图30示出基于图29的结果计算CYP2D6等位基因频率的结果；图31示出进行代表基因的单个和多重PCR，随后将利用皮肤基因卡提取的皮肤基 因组DNA在1. 5%琼脂糖凝胶上电泳的结果(使用TNF-α基因进行单个PCR ；泳道M =IOObp DNA大小标记物，泳道9和10 卡样品，常规泳道(lane conventional)从血液提取的DNA。 使用 5 个基因(C0MT、CYPlAl-I、CYPlBl、IL-6 和 VDR)进行多重 PCR ；泳道 M IOObp DNA 大 小标记物，泳道9和10 卡样品，常规泳道从血液提取的DNA)；图32示出将图31的PCR产物在1. 5%琼脂糖凝胶上电泳并分离和纯化产物之后 使用ABI 3130测序仪进行碱基测序的结果，从而证实TNF-α基因的PCR结果不是假阳性；图33示出在如图31中所述的多重-PCR之后使用ABI 3130基因分析仪 (GeneMapper 程序)分析，并用 SNaPshot Multiplex 试剂盒(Applied Biosystem)处理的 结果，用以鉴定利用皮肤基因卡提取的皮肤基因组DNA的SNP，；图34示出对18个营养基因组基因(涉及肥胖、抗氧化应激、解毒、心血管病、激素 代谢、过敏症和骨代谢的基因)进行多重-PCR，并接着使用用于利用皮肤基因卡提取的皮 肤基因组DNA的AW(抗老化和保持良好状态(Well-being))芯片(Goodgene)进行成像分 析的结果(该结果表明激素代谢相关的CYPlAl基因的-3826A被G取代。)；图35示出针对利用皮肤基因卡提取的皮肤基因组DNA，对引起基因疾病的其中一 个基因APC基因进行PCR，接着将产物在1.5%的琼脂糖凝胶上电泳的结果(泳道1 :100bp DNA标记物，泳道2 来自卡样品的APC PCR产物)；图36示出在将图35的APC PCR产物在1. 5%琼脂糖凝胶上电泳和随后分离和纯 化该产物之后，使用ABI 3130测序仪，对APC基因的突变(1493G — A)的碱基测序的结果；图37示出使用如实施例5中的皮肤基因卡获得皮肤样品、从其中合成cDNA、使用 对皮肤癌相关的基因MAGE特异的引物进行PCR，和将产物在1. 5%琼脂糖凝胶上电泳的结 果(泳道1和9 IOObp DNA标记物，泳道2和3 阴性对照，泳道4 阳性对照，泳道5和8 卡样品)；图38示出从皮肤基因卡分离DNA和使用金黄色葡萄球菌(Staphylacoccus aureus) PCR试剂盒(Goodgene)分析葡萄球菌感染的结果(使用自动碱基测序仪对PCR产 物的分析结果表明受金黄色葡萄球菌的感染)；
图39示出从使用皮肤基因卡获得的样品(肛门周围)中分离DNA和使用12STD 多重PCR试剂盒(Goodgne)检测性传播疾病的结果(该结果表明受HPV的感染。泳道1 IOObp大小的标记物，泳道2 来自样品的PCR产物，泳道3 =STD B组(set)阳性对照)；图40示出使用GG HPV基因分型芯片(Goodgene)对HPV阳性PCR产物成像分析 的结果，其中该PCR产物来自实施例26中使用皮肤基因卡获得的样品(肛门周围)(该结 果表明受HPV型11的感染)；图41示出对DNA进行的巢式PCR的结果，该DNA是通过传统的结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis) ^, ^ffli^^Sia^ZA^W^^SE (wart-like patch) 的皮肤样品中获得的(泳道1 :100bp DNA大小标记物，泳道2 阴性对照，泳道3 阳性对照， 泳道4:来自从患者中获得的样品的PCR产物)；图42示出使用利用皮肤基因卡获得的样品对MMPl基因(涉及皮肤状况和健康的 一个基因)进行实时PCR的结果；图43示出使用利用皮肤基因卡获得的样品对AQP3基因(涉及皮肤状况和健康的 一个基因)进行实时PCR的结果；图44示出使用利用皮肤基因卡获得的样品对Has3基因(涉及皮肤状况和健康的 一个基因)进行实时PCR的结果；图45示出使用利用皮肤基因卡获得的样品对酪氨酸酶(涉及皮肤状况和健康的 一个基因)进行实时PCR的结果；图46示出使用利用皮肤基因卡获得的样品对TRPl基因(涉及皮肤状况和健康的 一个基因)进行实时PCR的结果；和图47示出创建为年龄数据库(database for ages)的MMPl基因的表达谱。
具体实施例方式[最佳方式]下文参考其中示出示例性实施方式的附图，更全面地描述示例性实施方式。然而， 本披露内容可以以多种不同形式体现，而不应当理解为限制于在此提出的示例性实施方 式。相反地，为了使本披露内容彻底且完全，提供了这些示例性实施方式，并向本领域中的 技术人员全面表达了本披露内容的范围。在本说明书中，为了避免掩盖示出的实施方式，省 略了众所周知的特征和技术的详述。在此使用的术语仅是为了描述特定实施方式的目的，而不是要限制本披露内容。 如在此使用的，单数形式“一”、“一个”和“该”也倾向于包括复数形式，除非上下文中另外 明确指出。而且，术语，一、一个等的使用不表示对量的限制，而是表示存在至少一个所提及 的术语(item)。术语“第一”、“第二”等不暗示任何特定顺序，而是包括它们以识别单个元 件。此外，术语第一、第二等的使用不表示任何顺序或重要性，而是术语第一、第二等可用于 区分一个元件与另一个。应当进一步理解，当本说明书中使用术语“包含”或“包括”时，它 们具体指存在所述特征、区域、整体、步骤、操作、元件，和/或组件，但不排除存在或添加一 个或多个其他特征、区域、整体、步骤、操作、元件、组件，和/或其组。除非另外限定，在此使用的所有术语(包括技术和科学术语)与本领域技术人员 通常理解的意思相同。应当进一步理解，诸如通常使用的字典中定义的那些术语应当解释为具有与它们在相关领域和本披露内容上下文中的意思一致的意思，而不应当按理想化或 过度正式的意义进行理解，除非本文中有明确定义。本发明涉及能够获得、运送和检查处于最佳状况的人皮肤样品以便可以充分保存 包括在其中的基因的试剂盒(以下称为皮肤基因卡)、使用该试剂盒进行基因测试的方法、 将该试剂盒应用于不同领域，例如医学、美容护理、整容术、遗传学等中的方法。本发明的发明人已注意到通过充分获得皮肤样品和检查与皮肤功能、生理和病理 相关的关键基因的表达或突变，可确切地了解个体皮肤状况。因而，他们旨在确立获得能够 进行此种基因测试的处于最佳状况的皮肤样品的方法。为此，1)基于本发明的发明人申请专利权的RNA卡和DNA卡来设计皮肤基因卡，并确立 其制备方法。2)确定使用该卡的最佳皮肤取样方法。3)确立存储和递送皮肤样品的条件。4)确立从所得皮肤样品中充分分离DNA和RNA的方法和cDNA合成条件。5)确立重要的皮肤相关基因的基因测试方法，例如聚合酶链式反应(PCR)、逆转 录(RT)-PCR、实时PCR、PCR-限制性片段长度多态性(RELP)、自动化碱基测序、DNA微阵列、 甲基化特异性PCR(MSP)等。6)确立系统，以便通过利用皮肤基因卡和5)的测试方法检查基因可准确地和客 观地分类皮肤类型，且个性化皮肤护理、化妆品和药用化妆品可基于该结果进行选择。特别 地，集中于检测和治疗干燥、老化、光老化和敏感皮肤。7)确立系统，以便利用皮肤基因卡和5)的测试方法可诊断多种疑难皮肤病，例如 炎症、湿疹、免疫相关性疾病、感染、牛皮癣等，且可选择最佳疗法。8)确立系统，以便皮肤基因卡和5)的测试方法可用于检测遗传性基因疾病和各 种基因测试，这些基因测试包括个体鉴定、亲子认定、器官移植之前的基因分型等。这些总结在图1中。根据本发明的皮肤基因卡的示意图在图2中示出。本发明的皮肤基因卡包含带部 分和卡(衬底)部分。通过将带附于人体和从人体分离带，该带被用于获得人体组织，该卡 部分用于保护、存储和运送带。该带可以是任何类型的胶带。在一种实施方式中，可使用 对人体无害且允许医学用途的绷带(bandage tape)，特别是柔软的、低粘性纸质绷带。尤 其，可使用3M的低粘性纸质绷带1500、1522或9874。衬底(卡)部分是用焦碳酸二乙酯 (DEPC)处理的合成树脂、纸卡或薄膜、载玻片、塑料制品(plastic)、或纤维(fiber)制品， 该衬底部分可与DNA和RNA形成稳定化合物，以便阻止DNA和RNA分别被脱氧核糖核酸酶 和核糖核酸酶降解，及以便在室温下稳定地存储它们。进一步地，可将衬底部分浸入在适当 形式和浓度的裂解缓冲液或水溶性壳聚糖溶液中。优选地，人体样品可以是人皮肤。该皮肤样品可取自身体的任何部分。进一步地， 人体样品可以是取自皮肤-粘膜界面(skin-mucosa interface)的毛发或粘膜，如嘴或肛 门周围，或嘴里面。虽然用于根据本发明的基因测试的人皮肤样品可使用本发明皮肤基因卡获得时， 但是用于获得少量皮肤样品的任何其他凝胶或带型装置或卡可用于根据本发明的基因测试。
样品中靶物质组分可以是包括DNA在内的指示基因的任何物质。从皮肤样品中分 离DNA可使用洗脱缓冲液(elution buffer)进行。然而，任何方法都可用于此目的。更优选地，样品中靶物质组分可以是RNA。从皮肤样品中分离RNA和mRNA可使用 洗脱缓冲液进行。然而，任何洗脱法都可用于此目的。[本发明的方式]现描述实施例和实验。以下实施例和实验仅用于示例目的，而不是要限制本披露 内容的范围。实施例的修改和应用包括在本发明的范围内。〈步骤1>获得皮肤样品的皮肤基因卡的制备及其性能测试在这个步骤中，制备了皮肤基因卡并确立了它的制备方法。进一步地，确立了使用 该卡获得最佳皮肤样品的方法及存储和运送该样品的条件。进一步地，确立了从皮肤样品 分离DNA和RNA的条件，和合成CDNA的条件。另外，验证了分离的DNA和RNA的质量和数量。详细情况如下。实施例1.制备皮肤基因卡本发明的皮肤基因卡包含带部分和衬底(卡)部分。该带用于通过附于人体和从 人体移去来获得人体的组织，且卡部分用于保护、存储和运送带。该带可以是任何类型的 胶带。在一种实施方式中，可使用对人体无害且允许医学用途的绷带，特别是柔软的、低粘 性纸质绷带。尤其，可以使用3M的低粘性纸质绷带1500、1522或9874。衬底(卡)部分 可以是用焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的合成树脂、纸卡或薄膜、载玻片、塑料制品、或纤维制 品，该衬底部分可与DNA和RNA形成稳定化合物，以便阻止DNA和RNA分别被脱氧核糖核酸 酶和核糖核酸酶降解，并在室温下稳定存储它们。进一步地，可将衬底部分浸入在适当形式 和浓度的裂解缓冲液或水溶性壳聚糖溶液中。使用高压釜(autoclave)将该卡在120°C和 2大气压下浸入在用DEPC处理的水、壳聚糖和裂解缓冲液中30分钟，并在使用前对该卡进 行灭菌和干燥。这是为了阻止DNA和RNA在分离期间被DNase和RNase污染。并且，壳聚 糖、裂解缓冲液，及DNA和RNA卡可长时间保护核酸(图2)。下表示出皮肤基因卡的组成和材料。
权利要求
一种皮肤基因卡，包含带部分，通过将所述带部分附着于人体并从人体分离而获得来自人体的组织；和卡部分，用于保护、存储和运送所述获得的组织。
2.根据权利要求1所述的皮肤基因卡，其中所述带是对人体无害且允许用于医学用途 的低粘性纸质绷带。
3.根据权利要求1所述的皮肤基因卡，其中所述卡部分包括选自由纸质卡、载玻片、 OHP薄膜、塑料、聚酯、纤维和金属组成的组的材料。
4.根据权利要求3所述的皮肤基因卡，其中所述卡部分包括纸质卡，并且所述纸质卡 是通过使用高压釜灭菌，随后浸入分别用焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的细胞裂解缓冲液、尿 酸和/或壳聚糖中并干燥而制得的。
5.根据权利要求4所述的皮肤基因卡，其中所述纸质卡浸入在浓度为0.02%(w/v)到 0. 25% (w/v)的水溶性壳聚糖溶液中。
6.根据权利要求1所述的皮肤基因卡，其中所述来自人体的组织是毛发或粘膜，所述 毛发或粘膜取自皮肤_粘膜界面，如嘴或肛门周围、或嘴里。
7.一种利用皮肤基因卡获得人体组织的方法，包括将根据权利要求1所述的皮肤基因卡的带部分附着于人体取样部分的皮肤上；和 从所述皮肤分离所述带部分。
8.根据权利要求7所述的利用皮肤基因卡获得人体组织的方法，在所述附着之前，进 一步包括，使用脱皮凝胶除去取样部分的皮肤上或周围的角质。
9.根据权利要求7所述的利用皮肤基因卡获得人体组织的方法，其中，将附着于人体 皮肤的所述带部分在1分钟至12小时之后分离。
10.一种用于从人体组织分离DNA的方法，包括使用根据权利要求1所述的皮肤基因卡获得人体组织；和 使用DNA提取方法分离DNA。
11.一种用于从人体组织分离RNA的方法，包括使用根据权利要求1所述的皮肤基因卡获得人体组织；和 使用RNA提取方法分离RNA。
12.一种在没有对分离的DNA进一步纯化的情况下使用根据权利要求1所述的皮肤基 因卡进行聚合酶链式反应(PCR)的方法。
13.一种在没有对分离的DNA进一步纯化的情况下使用根据权利要求1所述的皮肤基 因卡进行逆转录(RT)-PCR的方法。
14.一种利用皮肤基因卡进行身份鉴定的方法，包括使用根据权利要求1所述的皮肤基因卡获得人体组织并从获得的组织中分离基因组DNA ；对使用分离的基因组DNA选择的展现短串联重复(STR)多态性的基因进行多重PCR;和鉴定通过PCR扩增的基因信息。
15.一种利用皮肤基因卡进行药物基因组测试的方法，包括使用根据权利要求1所述的皮肤基因卡获得人体组织并从获得的组织中分离基因组DNA ；对使用分离的基因组DNA选择的药物代谢相关的基因进行多重PCR ；和 鉴定通过PCR扩增的基因信息。
16.一种用于营养基因组测试的试剂盒，包含 根据权利要求1所述的皮肤基因卡；和用于基因的多重PCR的正向和反向引物，所述基因选自由肥胖、抗氧化应激、解毒、心 血管病、激素代谢、过敏和骨代谢相关的基因组成的组。
17.一种用于诊断疾病的试剂盒，包含 根据权利要求1所述的皮肤基因卡；和 靶向疾病相关的基因的正向和反向引物。
18.根据权利要求17所述的用于诊断疾病的试剂盒，其中所述疾病是皮肤癌且所述基 因是黑素瘤抗体。
19.根据权利要求17所述的用于诊断疾病的试剂盒，其中所述疾病是皮肤传染病且所 述基因是病原体特异性基因。
20.根据权利要求19所述的用于诊断疾病的试剂盒，其中所述病原体是金黄色葡萄球 胃(Staphylococcus aureus)0
21.根据权利要求17所述的用于诊断疾病的试剂盒，其中所述疾病是性传播疾病且所 述基因是病原体特异性基因。
22.根据权利要求21所述的用于诊断疾病的试剂盒，其中所述病原体选自由淋病奈瑟 菌(N. gonorrhea)、砂眼披衣菌(C. trachomatis)、生殖支原体(M，genitalum)、人型支原体 (M.hominis，)、解脲脲原体(U. urealyticum)、和阴道毛滴虫(T. vaginalis)组成的组。
23.根据权利要求21所述的用于诊断疾病的试剂盒，其中所述病原体选自由杜克雷 嗜血杆菌(H. ducreyi)、阴道加德纳菌(G. vaginalis)、梅毒螺旋体(T. pallidum)、单纯 疱疫病毒(Herpes simplex virus)、白色念珠菌(Candida albicans)和人乳头状瘤病毒 (humanpapi 1 lomavirus) (HPV) 白勺 。
24.根据权利要求17所述的用于诊断疾病的试剂盒，其中所述病原体是肺结核菌 (Tubercle bacillus)特异性基因。
25.一种利用皮肤基因卡的皮肤基因表达测试的方法，包括使用根据权利要求1所述的皮肤基因卡获得人体组织并从获得的组织中分离基因组RNA ；对使用分离的基因组RNA选择的皮肤状况和健康相关的基因进行逆转录PCR ；和 鉴定通过PCR扩增的基因的表达水平。
26.根据权利要求25所述的皮肤基因表达测试的方法，其中所述基因是选自由基质 金属蛋白酶1(MMP1)、原胶原Al、金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)、弹性蛋白、弹性蛋白 酶、抑弹性酶蛋白、超氧化物岐化酶l(MnS0D、S0D1)、谷胱甘肽S-转移酶、p53、端粒酶、透 明质酸合成酶3 (HAS3)、水通道蛋白3 (AQP3)、丝聚合蛋白原、酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白 1 (TRP-I)、内皮素-1、肿瘤坏死因子_ α (TNF- α )、I-CAM、主要组织相容性复合体2 (MHC2)、 3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A(HMG-CoA)、脂肪酸合酶、乙酰辅酶A羧化酶、转化生长因子-β 1、表皮生长因子(EGF)、角质形成细胞生长因子(KGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、 5-α还原酶和雄激素受体或管家基因组成的组的基因。
27.根据权利要求25所述的皮肤基因表达测试的方法，其中所述基因的表达水平通过 实时PCR鉴定。
全文摘要
本发明涉及用于基因测试的新的皮肤基因卡、使用该基因卡获得DNA和RNA及进行各种基因测试的方法及其实践应用。更具体地，本发明人已开发能够简单、安全和迅速地从人皮肤、毛发或粘膜获得样品并能够在室温下长期稳定存储和运送所得样品中包括的DNA和RNA的皮肤基因卡。使用所得DNA和RNA可以进行各种基因测试，该基因测试包括聚合酶链式反应(PCR)、逆转录(RT)-PCR、实时PCR、测序、杂交、DNA芯片分析、单核苷酸多态性(SNP)分析、基因突变分析、启动子甲基化分析、基因表达分析等。该基因皮肤测试结果可用于疾病预后、营养基因组测试、药物基因组测试、法医检验如身份鉴定、基因疾病诊断、皮肤病诊断等。此外，通过客观评价皮肤或毛发状态，可以为美容护理、美容学、皮肤病学和临床实践中的实践应用确立个性化的化妆品和皮肤护理系统。
文档编号C12Q1/68GK101990578SQ200880128393
公开日2011年3月23日 申请日期2008年4月4日 优先权日2008年4月4日
发明者文宇哲, 朴根良, 李振荣, 申贞植 申请人:固德基因公司