专利名称：一种生产毛蕊花糖苷单体化合物的方法
技术领域：
本发明涉及一种利用新鲜肉苁蓉肉质茎及肉灰蓉饮片，通过生物催化转化生产毛蕊花糖苷单体化 合物的方法。
背景技术：
肉苁蓉素有沙漠"人参"的美誉，为著名的补益中药。分析表明，肉灰蓉的主要活性成分为苯乙醇 苷类、苯甲醇苷类、环烯醚萜苷类、木脂素苷类、低聚糖类衍生物、D-甘露醇和甜菜碱等。苯乙醇苷 类(Phenylethanoid Glycosides, Ph Gs)包括松果菊苷(Echinacoside)、毛蕊花糖苷(Acteoside)等活 性物质。体内药物学实验显示，苯乙醇苷类化合物的主要成分松果菊苷在胃肠道中运动过程需经大肠 内微生物酶催化转化为毛蕊花糖苷的代谢通道，是导致口服后苯乙醇苷类成分药物生物利用度与疗效 存在显著差异的主要因素。毛蕊花糖苷单体化合物具有小分子和低极性的特征，在药物吸收中展示良 好的吸收率和特殊的药理活性。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用新鲜肉苁蓉肉质茎或肉苁蓉饮片，通过生物催化转化生产毛蕊花糖 苷单体化合物的方法。
本发明的方法是，将新鲜肉苁蓉肉质茎或肉灰蓉饮片，通过高温灭酶、细胞破碎成为肉苁蓉细胞 破碎物，将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，再以p-葡萄糖苷酶工业酶制剂为生物催化剂，进行 生物催化反应，催化水解底物中松果菊苷使其葡萄糖基配体末端断裂(P-l，6-糖苷键)，定向转化为高 活性的毛蕊花糖苷单体化合物，催化反应温度为40'C 6(TC， pH为4.0 5.8，时间为4h llh，催化反 应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为2U/g 2000U/g;将催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物再经浆液 提取、分离提纯、浓縮、干燥处理，收获毛蕊花糖苷单体化合物。通过调整分离提纯工艺条件，收获 的毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量可达35. 8% 89.5%。
本发明方法的具体步骤包括
1、挑选新鲜肉苁蓉肉质茎或肉苁蓉饮片，进行高温灭酶，然后置于通常工业破碎碾磨装置中进行 破碎碾磨，使细胞碎裂成为肉苁蓉细胞破碎物；将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以(3-葡萄糖 苷酶工业酶制剂为生物催化剂，采用固态发酵反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡 萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为4(TC 60'C,最佳温度为42。C 50。C; pH为4.0 5.8,最佳pH为4.5 5.2;时间为4h llh，最佳时间为5h 6h，催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为2U/g 2000U/g，最佳酶活力为5U/g 200U/g;经测定，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷的转化率达70% 94%;
2、 将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物，采用通常工业压滤机压滤或工业离心机分离，获取肉苁 蓉细胞浆液；可再将滤渣经一次至数次(一般为1 3次)加入工业纯净水对压榨后的细胞破碎物进行 洗涤，并再经工业压滤机压滤或工业离心机分离进一步获取细胞洗涤液，合并在细胞浆液中；将得到 的肉苁蓉细胞桨液，通过通常工业超滤膜分离，选择性筛分及截留除去多糖、蛋白质等大分子杂质以 及微粒和亚微粒等杂质；或/和采用通常工业纳滤膜分离，选择性筛分及截留除去氨基酸、D-甘露醇、 甜菜碱等小分子杂质；或/和采用通常工业大孔树脂吸附分离工艺进行分离纯化；还可再采用通常工业 层析柱分离纯化工艺，或/和采用通常模拟移动床色谱分离系统或通常多功能色谱分离系统工艺，进一 步分离纯化；获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；
3、 将步骤2获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，通过通常工业真空浓縮工艺或工业薄膜蒸发浓 縮工艺，获得固形物含量为30% 50%的浓縮物；再通过工业喷雾干燥工艺或其他干燥方法，获得毛 蕊花糖苷单体化合物的粉状物或干燥物。收获的毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量可达35.8% 89.5%;
按照上述本发明方法，若采用肉灰蓉饮片为原料，在进行催化反应时可调节催化反应底物(肉苁 蓉细胞破碎物)的含水量为50% 卯％。
本发明方法涉及的新鲜肉苁蓉肉质茎，可以是新收获(未经冷藏或冷冻保鲜)的新鲜肉苁蓉肉质 茎，或者是置于工业冷藏库保鲜的新鲜肉灰蓉肉质茎或置于工业冷冻库冷藏的新鲜肉双蓉肉质茎，；或 者是上述新鲜肉苁蓉肉质茎的切片或碎料。
本发明所述的肉苁蓉，是符合《中华人民共和国药典》2005年版收载的列当科植物肉苁蓉C^wc^e <sfeseW!'co/a Y,C.Ma或管花肉双蓉C!'sfawc/ze f幽Zosa (Schrenk) Wight。
本发明方法涉及的采用工业冷藏库保鲜的库温一般为1'C 13'C,最佳的冷藏库保鲜库温为4'C l(TC;采用工业冷冻库冷藏的库温一般为-52'C -10'C，最佳的冷冻库冷藏的库温为-36。C -18'C。
本发明方法涉及的高温灭酶工艺温度一般为80。C 10(TC,时间为3min 10min。
本发明方法涉及的(3-葡萄糖苷酶工业酶制剂，包括卩-葡萄糖苷酶，富含卩-葡萄糖苷酶的纤维素酶、 植物提取复合酶或/和植物水解复合酶。
本发明方法涉及的固态发酵反应器，包括通常工业固态发酵反应器，也可采用恒温培养箱。
本发明方法涉及的将滤渣经一次至数次加入工业纯净水的每次加水量为滤渣的100% 400% (重量 比)，最佳添加量为200% 300% (重量比)。
本发明方法涉及的超滤膜的相对分子质量为1000 4500，最佳的相对分子质量为1500 3500;纳 滤膜相对分子质量为200 300，最佳的相对分子质量为250 280;超滤膜选用CA或CTA、 PAN、 PS、 PSA、 PES、 PVDF、 PEK、 SPS的系列膜型号；纳滤膜选用4040-UHT-ESNA或8540-UHY-ESNA、 ESNA-FREE650、 ESNA-FREE 1700、 NTR7450HG、 NTR729HG、 NF-CA膜、NF-CA巻式元件及中空 纤维件的系列膜型号；大孔吸附树脂选用XAD、 Diaion、 SP、 Posapak及Chromosorb及非离子型高分 子吸附剂AB-8、 CHA-III、 CAD-40、 DlOl、 D301、 D296、 D396R、 D4006、 D4020、 D3520、 DA201、DM301 、 D130、 GDX104、 HPD亂HPD450、 HPD500、 HPD600、 HPD8、腦7、 JD-KW、 LD601、 LD605、 ME-1、 ME-2、 ME-3、 NKA-2、 NKA-9、 R-A、 S8、 SIP、 WLD及X-5系列型号；模拟移动床 色谱分离系统及多功能色谱分离系统，可以选用MB、 MD、 ME、 MF制备型色谱分离层析仪、SMBC 实验型、SMBC中试型、XZ12E-4L型、XZ20Z-2L型及SMBC工业化连续制备色谱型的色谱分离系统。 本发明方法涉及的超滤膜、纳滤膜、大孔吸附树脂、非离子型高分子吸附剂、工业层析柱、移动床色 谱分离系统、多功能色谱分离系统，可选用通常国外及国内商品。
本发明方法涉及的通常工业真空浓縮工艺或工业薄膜蒸发浓縮工艺的温度为48。C 8(TC，最佳温 度为5(TC 65'C;采用的工业喷雾干燥工艺，干燥塔进风温度为125。C 285。C，最佳进风温度为 135。C 185。C。
本发明方法涉及的其它工业干燥的方法包括通常工业滚筒干燥、气流干燥、流化床干燥、微波真 空干燥、微波干燥、真空干燥或热风循环干燥。
本发明方法生产的毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物或干燥物，可直接用于医药原料，或作为化妆 品原料，也可作为原料或复方原料生产口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂、冲剂、丸剂或袋泡茶等功能 性保健食品。本发明方法的推广实施，将使肉苁蓉这一名贵的中药更好地造福于人类的健康。
本发明方法中涉及的各种量的百分比(％)，除了另有说明外，均为重量百分比。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例一
1、 挑选工业冷藏库13'C保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎，通过通常工业微波加热装置将新鲜肉欢蓉肉质 茎进行高温灭酶，灭酶的温度为IO(TC，时间为4min;然后置于通常工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉 质茎破碎碾磨成为肉苁蓉细胞破碎物，将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以P-葡萄糖苷酶为生 物催化剂，采用固态发酵反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一 个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为46.5'C， pH为4.1，时间为5h， 催化反应过程反应物中的(3-葡萄糖苷酶活力为80U/g;经测定，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷的 转化率达98.5%;
2、 将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物，采用通常工业压滤机压滤，获取肉苁蓉细胞浆液，将滤 渣再分别经三次加入工业纯净水对压搾后的细胞破碎物进行洗涤，每次加水量为滤渣重量的100%，并 经工业压榨机压滤，获取肉苁蓉细胞洗涤液并合并在细胞桨液中；采用相对分子质量为3500的超滤膜 对细胞浆液进行超滤，再通过相对分子质量为250的纳滤膜进行纳滤，然后采用AB-8型的工业大孔吸 附树脂进行吸附分离，并经XZ12E-4L型多功能色谱分离系统工艺进一步提纯，获得毛蔬花糖苷单体 化合物提取液；3、将上述获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，通过通常工业真空浓縮工艺，温度为50'C，获得 固形物含量为30%的浓縮物；进一步通过通常工业喷雾干燥，千燥塔进风温度为125°C，获得毛蕊花 糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的粉状物中(以干物质计)，毛蕴花糖苷单体化合物纯 度百分比含量为89.5%。
实施例二
1、 采用工业冷冻库-2(TC冷冻保藏的速冻肉苁蓉肉质茎，通过通常工业蒸汽加热装置将新鲜肉苁 蓉肉质茎进行高温灭酶，灭酶的温度为l(XTC，时间为10min;然后置于通常工业破碎碾磨装置中将肉 苁蓉肉质茎破碎碾磨成为肉灰蓉细胞破碎物，将肉灰蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以p-葡萄糖苷 酶为生物催化剂，采用固态发酵反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末 端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为48'C， pH为5.0,时间 为6h,催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为2U/g;经测定，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖 苷的转化率达89.8%;
2、 将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物，采用通常工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液；采用 相对分子质量为3000的超滤膜对细胞浆液进行超滤，再通过相对分子质量为300的纳滤膜进行纳滤， 然后采用D396R型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离；并经XZ20Z-ZL型多功能色谱分离系统进一步 分离提纯，获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；
3、 将上述获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，再通过通常工业真空浓縮工艺，温度为6(TC，获 得固形物含量为38%的浓縮物；进一步通过通常热风循环干燥工艺，温度为65'C,获得毛蕊花糖苷单 体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分 比含量为73. 9%。
实施例三
1、 挑选肉苁蓉饮片，通过通常工业微波加热装置将新鲜肉苁蓉肉质茎进行高温灭酶，灭酶的温度
为卯'C，时间为5min;然后置于通常工业破碎碾磨装置中进行破碎碾磨成为肉苁蓉细胞破碎物，将肉 苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，调节催化反应底物含水量为80%，以p-葡萄糖苷酶为生物催化剂， 采用固态发酵反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、 定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为45'C， pH为5.8，时间为3h，催化反应过程 反应物中的(3-葡萄糖苷酶活力为100U/g。经测定，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷的转化率达65.8%
2、 将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物，釆用通常工业压滤机压滤，获取肉苁蓉细胞浆液，将滤 渣再加入工业纯净水，添加量为滤渣重量的150%,并经工业压榨机压滤，获取肉苁蓉细胞洗涤液并合 并在细胞浆液中；采用相对分子质量为4500的超滤膜对细胞浆液进行超滤；并经工业层析分离纯化工 艺进一步提纯，获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；
3、 将上述获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，通过通常工业薄膜蒸发工艺，温度为56'C，获得 固形物含量为36%的浓縮物；进一步通过通常工业喷雾干燥，干燥塔进风温度为182t:，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的粉状物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为61.2%。
实施例四-
1、 采用工业冷冻库-35'C冷冻保藏的速冻肉苁蓉肉质茎，通过通常工业蒸汽加热装置将新鲜肉苁蓉肉质茎进行高温灭酶，灭酶的温度为IO(TC，时间为10min;然后置于通常工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨成为肉苁蓉细胞破碎物，将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以p-葡萄糖苷酶为生物催化剂，采用固态发酵反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为44'C， pH为4.9，时间为6h，催化反应过程反应物中的P-葡萄糖苷酶活力为20U/g;经测定，底物中松果菊苷转化为毛驟花糖苷的转化率达80.2%;
2、 将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物，采用通常工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液；采用相对分子质量为300的纳滤膜对细胞桨液进行纳滤，获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；
3、 将上述获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，再通过通常工业真空浓縮工艺，温度为60。C，获得固形物含量为38%的浓縮物；进一步通过通常真空干燥工艺，温度为65'C，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蔬花糖苷单体化合物纯度百分比含量为50. 8%。
实施例五
1、 采用工业冷藏库5'C保鲜的精选的肉苁蓉肉质茎，通过通常工业微波加热装置将新鲜肉灰蓉肉质茎进行高温灭酶，灭酶的温度为99'C，时间为3min;然后置于通常工业破碎碾磨装置中将肉灰蓉肉质茎破碎碾磨成为肉苁蓉细胞破碎物，将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以p-葡萄糖苷酶为生物催化剂，采用固态发酵反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为6(TC， pH为4.5，时间为3.5h,催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为80U/g。经测定，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷的转化率达89.3%;
2、 将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物，釆用通常工业压滤机压滤，获取肉灰蓉细胞桨液，将滤渣分别再经二次加入工业纯净水，每次加水量为滤渣重量的200%，并经工业压榨机压滤，获取肉苁蓉细胞洗涤液并合并在细胞浆液中；采用相对分子质量为2000的超滤膜对细胞浆液进行超滤，再通过相对分子质量为300的纳滤膜进行纳滤，获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；
3、 将上述获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，通过通常工业薄膜蒸发浓縮工艺，温度为58'C，获得固形物含量为31%的浓縮物；进一步通过通常工业喷雾干燥，干燥塔进风温度为165°C,获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的粉状物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为66.4%。实施例六
1、 采用工业冷冻库-18'C冷冻保藏的速冻肉灰蓉肉质茎，再通过工业高温灭酶，温度为10(TC，时间为6min;然后置于通常工业破碎碾磨装置中将肉灰蓉肉质茎破碎碾磨成为肉双蓉细胞破碎物，将将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以植物提取复合酶工业酶制剂为生物催化剂，采用固态发酵反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为48'C， pH为5.2,时间为8h，催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为20U/g;经测定，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷的转化率达88.2%;
2、 将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物，采用通常工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液；采用相对分子质量为300的超滤膜对细胞浆液进行超滤；然后釆用HPD8型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离；并经工业层析分离纯化工艺进一步分离提纯，获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；
3、 将上述获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，再通过通常工业真空浓縮工艺，温度为53。C，获得固形物含量为40%的浓縮物；进一步通过通常流化床干燥，温度为60'C，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为62.3%。
实施例七
1、 采用新鲜肉苁蓉肉质茎，通过通常工业微波加热装置将新鲜肉苁蓉肉质茎进行高温灭酶，灭酶
的温度为9(TC，时间为5min;然后置于通常工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨成为肉苁蓉细胞破碎物，将将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以P-葡萄糖苷酶为生物催化剂，采用固态发酵反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为45'C， pH为4.2，时间为5h,催化反应过程反应物中的卩-葡萄糖苷酶活力为100U/g;经测定，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷的转化率达88.5%;
2、 将经催化反应后的细胞破碎物采用通常工业压滤机压滤，获取肉苁蓉细胞浆液，将滤渣分别再经二次加入工业纯净水，每次加水量为滤渣重量的110%,并经工业压搾机压滤，获取肉苁蓉细胞洗涤液并合并在细胞浆液中；采用相对分子质量为4500的超滤膜对细胞浆液进行超滤；并经工业层析分离纯化工艺进一步提纯，获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；
3、 将上述获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，通过通常工业薄膜蒸发工艺，温度为65'C，获得固形物含量为36%的浓縮物；进一步通过通常工业喷雾干燥，干燥塔进风温度为16(TC，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的粉状物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为65.2%。
实施例八
1、采用工业冷冻库-35'C冷冻保藏的速冻肉灰蓉碎料，通过通常工业蒸汽加热装置进行高温灭酶，灭酶的温度为IO(TC，时间为10min;然后置于通常工业破碎碾磨装置中破碎碾磨成为肉灰蓉细胞破碎物，将将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以p-葡萄糖苷酶为生物催化剂，采用固态发酵反应器
8进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蔬花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为48。C, pH为4.9，时间为6h，催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为3U/g;经测定，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷的转化率达80.2%;
2、 将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物，采用通常工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液；然后采用ME-3型的工业大孔吸附树脂对细胞浆液进行吸附分离，获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；
3、 将上述获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，再通过通常工业真空浓縮工艺，温度为6(TC，获得固形物含量为38%的浓縮物；进一步通过通常真空干燥工艺，温度为65'C，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为35. 8%。
实施例九
1、 采用工业冷藏库5'C保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎，通过通常工业微波加热装置将新鲜肉苁蓉肉质茎进行高温灭酶，灭酶的温度为99'C，时间为3min;然后置于通常工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨成为肉苁蓉细胞破碎物，将将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以p-葡萄糖苷酶工业酶制剂为生物催化剂，采用恒温培养箱进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为6(TC， pH为4.5，时间为3.5h，催化反应过程反应物中的P-葡萄糖苷酶活力为1500U/g;经测定，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷的转化率达89.3%;
2、 将经催化反应后的细胞破碎物采用通常工业压滤机压滤，获取肉灰蓉细胞浆液；采用相对分子质量为1000的超滤膜对细胞浆液进行超滤，再通过相对分子质量为300的纳滤膜进行纳滤，获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；
3、 将上述获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，通过通常工业真空浓縮工艺，温度为58'C，获得固形物含量为42%的浓縮物；进一步通过通常工业喷雾干燥，干燥塔进风温度为165°C,获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的粉状物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为46.3%。
实施例十
1、 采用工业冷冻库-18'C冷冻保藏的速冻肉苁蓉肉质茎，再通过通常工业蒸汽高温灭酶，温度为IOO'C，时间为8min;然后置于通常工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨成为肉苁蓉细胞破碎物，将将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以植物水解复合酶工业酶制剂为生物催化剂，采用固态发酵反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为48'C， pH为5.2，时间为8h，催化反应过程反应物中的P-葡萄糖苷酶酶活力为150U/g;经测定，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷的转化率达98.5%;
2、 将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物，采用通常工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液，将滤180%,并经工业离心机分离，获取肉灰蓉细胞洗涤液并合并在细胞浆液中；采用相对分子质量为2500的超滤膜对细胞浆液进行超滤；然后采用CHA-III型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离；并经工业层析分离纯化工艺进一步分离提纯，获得毛蔬花糖苷单体化合物提取液；
3、将上述获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，再通过通常工业真空浓縮工艺，温度为53'C，获得固形物含量为48%的浓缩物；进一步通过通常真空干燥工艺，温度为65'C，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为89%。
权利要求
1.一种生产毛蕊花糖苷单体化合物的方法，将新鲜肉苁蓉肉质茎或肉苁蓉饮片，通过高温灭酶、细胞破碎成为肉苁蓉细胞破碎物，将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，再以β-葡萄糖苷酶工业酶制剂为生物催化剂，进行生物催化反应，催化水解底物中松果菊苷使其葡萄糖基配体末端断裂，定向转化为高活性的毛蕊花糖苷单体化合物；再经浆液提取、分离提纯、浓缩、干燥处理，收获毛蕊花糖苷单体化合物。
2. 按照权利要求1所述的方法，其特征是该方法的具体步骤包括(1) 挑选新鲜肉苁蓉肉质茎或肉苁蓉饮片，进行高温灭酶，然后置于通常工业破碎碾磨装置中进行破碎碾磨，使细胞碎裂成为肉苁蓉细胞破碎物；将肉苁蓉细胞破碎物作为催化反应底物，以p-葡萄糖苷酶工业酶制剂为生物催化剂，采用固态发酵反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为40'C 60°C， pH为4.0 5.8，时间为4h llh，催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为2U/g 2000U/g;(2) 将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物采用通常工业压滤机压滤或工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液；将得到的肉苁蓉细胞浆液，通过通常工业超滤膜，或/和通常工业纳滤膜，或/和通常工业大孔树脂吸附分离工艺，进行分离纯化；获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；(3) 将步骤2获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，通过通常工业真空浓縮工艺或工业薄膜蒸发浓縮工艺，获得固形物含量为30°/。 50%的浓縮物；再通过工业喷雾干燥工艺或其他干燥方法，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物或干燥物。
3. 按照权利要求1或2所述的方法，其特征是反应过程温度为42'C 50'C; pH为4.5 52;时间为5h 6h，催化反应过程反应物中的P-葡萄糖苷酶活力为5U/g 200U/g。
4. 按照权利要求1或2所述的方法，其特征是所述的新鲜肉苁蓉肉质茎为新收获的新鲜肉苁蓉肉质茎，或者是置于工业冷藏库保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎或置于工业冷冻库冷藏的新鲜肉苁蓉肉质茎，或者是上述新鲜肉苁蓉肉质茎的碎料或切片。
5. 按照权利要求6.按照权利要求1或2所述的方法，其特征是所述的高温灭酶的温度为80'C IOO"C,时间为3min 10min。
6. 按照权利要求1或2所述的方法，其特征是所述的卩-葡萄糖苷酶工业酶制剂，包括p-葡萄糖苷酶、纤维素酶、植物提取复合酶或/和植物水解复合酶。
7. 按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(2)中将经催化反应后的肉苁蓉细胞破碎物采用通常工业压滤机压滤或工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液后，再将滤渣经一次至数次加入工业纯净水对压榨后的细胞破碎物进行洗涤，并再经工业压滤机压滤或工业离心机分离获取细胞洗涤液，合并在细胞浆液中；每次加入工业纯净水的量为滤渣重量的100% 400%。
8. 按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(2)中再采用通常工业层析柱分离纯化工艺，或/和采用通常模拟移动床色谱分离系统或通常多功能色谱分离系统工艺，进一步分离纯化。
9. 按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(3)中所述的工业真空浓縮工艺或工业薄膜蒸发浓縮工艺的温度为48r 80'C,工业喷雾干燥的进风温度为125°C 285°C。
全文摘要
本发明涉及一种生产毛蕊花糖苷单体化合物的方法。本发明方法是将新鲜肉苁蓉肉质茎或肉苁蓉饮片，通过高温灭酶、细胞破碎，再以β-葡萄糖苷酶工业酶制剂为生物催化剂，采用固态发酵反应器进行生物催化反应，催化水解底物中松果菊苷使葡萄糖基配体末端断裂(β-1，6-糖苷键)，定向转化为高活性的毛蕊花糖苷单体化合物；再经浆液提取、分离提纯、浓缩及干燥等系统工艺处理；，收获毛蕊花糖苷单体化合物。通过调整分离提纯工艺条件，收获的毛蕊花糖苷单体化合物粉状物或干燥物纯度百分比含量可达35.8％～89.5％。毛蕊花糖苷单体化合物具有小分子和低极性的特征，在药物吸收中展示良好的吸收率和特殊的药理活性。
文档编号C12P19/44GK101654692SQ20091004164
公开日2010年2月24日 申请日期2009年8月4日 优先权日2009年8月4日
发明者昕 刘, 刘小卓, 彭青云, 招淑燕, 李国富, 田晓玲, 欣 钟, 桅 雷, 黄晓霓 申请人:中山大学;深圳学者健康工程有限公司;广州绿色盈康生物工程有限公司