专利名称：：嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂及其应用方法
技术领域：
：本发明涉及一种嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂及利用该保护剂的嗜酸乳杆菌冻干保护方法。
背景技术：
：由于嗜酸乳杆菌的研究不断深入，嗜酸乳杆菌及其代谢产物对健康有益已经被证实。它可改善或调节肠道菌群平衡、增强机体免疫力、降低胆固醇水平、缓解乳糖不耐症、预防和治疗腹泻、降低过敏反应、防止霉菌感染等。因此，研制开发嗜酸乳杆菌制品，通过外源方式补充嗜酸乳杆菌在人体肠道定殖的数量，对于调整人体肠道微生态平衡，提高免疫力，促进健康，具有重要意义。现在已经被应用于食品、保健品、医药等行业中。由于微生物很难长期保存，导致产品活菌保藏期短。不利于产品的运输和销售。因此，提高嗜酸乳杆菌制品的活菌含量、延长活菌保藏期是目前嗜酸乳杆菌活菌制品研发过程中亟待解决的技术关键问题。现在采用最多的方法是冷冻保藏和冷冻干燥保藏。冷冻保藏制品在保存、运输和销售过程都需要冷冻存放。费用较高，运输不便。冷冻干燥保藏，不仅活菌含量高、保藏期长，而且保藏时不需冷冻、运输方便。因此，采用冷冻干燥保藏方法来制备微生物制品越来越受到人们的重视。冷冻干燥是将微生物细胞在低温环境冰冻，然后维持环境一定的真空度。使冰升华，最后达到干燥。在低温，干燥的条件下微生物将处于休眠状态，代谢相对减弱，利于长期保存活性。冷冻干燥过程的低温冷冻和真空干燥过程会使微生物细胞发生改变。不适当的冷冻干燥处理会降低微生物的活性。因此为了保护微生物制品活性，通常在冻干前添加一些有保护功能的物质，这些物质可以改变生物样品冷冻干燥时的物理、化学环境，减轻或防止冷冻干燥或复水时细胞的损害，尽可能保持原有的各种生理生化特性和生物活性。目前，已公开了一些嗜酸乳杆菌冻干保护剂，其中效果比较好的配方为脱脂乳(16.0%)、麦芽糊精(10.0%)、海藻糖(10.0%)、L-谷氨酸(1.0%)、维生素C(2.0X)、甘油(2.0%)、MnS04(0.8%)("嗜酸乳杆菌冻干菌粉保护剂选择的研究"，徐丽萍，食品工业科技，2007年05期)。以上括号内的数值表示配制成溶液的重量百分比。虽然利用该嗜酸乳杆菌冻干保护剂能够获得较高的冻干存活率，但是存活率在较低的时间内有明显降低，不能满足对嗜酸乳杆菌长时间储存的要求。
发明内容为了解决上述问题，本发明提供了一种嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂，其配方如下911重量份脱脂奶粉、1012重量份乳糖、0.30.6重量份甘油、1.52.5重量份谷氨酸钠和0.150.25重量份维生素C。较佳配方如下9.510.5重量份脱脂奶粉、1011重量份乳糖、0.40.5重量份甘油、22.5重量份谷氨酸钠和0.20.25重量份维生素C。最佳配方如下10重量份脱脂奶粉、10重量份乳糖、0.5重量份甘油、2重量份谷氨酸钠和0.2重量份维生素C。所述脱脂奶粉可以为普通的市售脱脂奶粉，脂肪含量为O.51%(重量)比较合适，主要成分的重量含量可以为蛋白质3040%，乳糖5060%，水份2.55%。利用本发明的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂的冻干保护方法可以为使嗜酸乳杆菌菌液中含有所述任一种嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂，得保护菌液，总重量为130180重量份，然后冷冻干燥。利用本发明的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂的冻干保护方法可以为将上述任一种嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂配制成保护剂水溶液，水的总量为7080重量份，然后将所述保护剂水溶液与嗜酸乳杆菌菌悬液以体积比1.52.5:1进行混合，然后冷冻干燥。较佳地，将所述的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂配制成保护剂水溶液的方法为将脱脂奶粉、乳糖和甘油加水并加热，溶解后调节pH值至6.97.l，灭菌后室温下加入谷氨酸钠和维生素C的过滤除菌水溶液，混匀即得保护剂水溶液。利用本发明的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂，特别是利用本发明的冻干保护方法，能够获得较高的嗜酸乳杆菌冻干存活率，且保藏期较长，存活率不易降低。具体实施例方式下面通过实例并结合对比例对本发明进行进一步说明。实例1复合保护剂溶液配方脱脂奶粉10%、乳糖10%、甘油0.5%、谷氨酸钠2%、维生素C0.2X。以上均为配成水溶液后的质量分数，下同。其中，脱脂奶粉为市售新西兰脱脂奶粉，重量百分比含量为脂肪0.8%，蛋白质33.4%，乳糖54.1%，水份3.5%。以下用到的脱脂奶粉同上。复合保护剂溶液制备①按量称取谷氨酸钠和维生素C加部分蒸馏水溶解，过滤除菌；②按量称取脱脂奶粉、乳糖和甘油加部分蒸馏水，加热溶解混匀，冷却至室温；③用NaOH溶液调节pH值至7.0左右；115"灭菌10min，冷却至室温；⑤加入上述经过过滤除菌的谷氨酸钠和维生素C，加入无菌水至100%，混匀即可。(各组分在溶液中的质量含量为脱脂奶粉10%、乳糖10%、甘油0.5%、谷氨酸钠2%、维生素C0.2%)实例2:复合保护剂溶液配方脱脂奶粉10%、乳糖10%、甘油0.3%、谷氨酸钠2%、维生素C0.2%、蒸馏水77.5%。按照实例1的方法制备复合保护剂溶液。实例3:复合保护剂溶液配方脱脂奶粉10%、乳糖12%、甘油0.6%、谷氨酸钠2.5%、维生素CO.2%、蒸馏水74.7%。按照实例1的方法制备复合保护剂溶液。4实例4:复合保护剂溶液配方脱脂奶粉10%、乳糖10%、甘油0.6%、谷氨酸钠2.5%、维生素CO.25%、蒸馏水76.65%。按照实例1的方法制备复合保护剂溶液。实例5:复合保护剂溶液配方脱脂奶粉10%、乳糖10%、甘油0.6%、谷氨酸钠2.5%、维生素CO.15%、蒸馏水76.75%。按照实例1的方法制备复合保护剂溶液。对比例配方(依照"嗜酸乳杆菌冻干菌粉保护剂选择的研究"，徐丽萍，食品工业科技，2007年05期)脱脂奶粉(16.0%)、麦芽糊精(10.0%)、海藻糖(10.0%)、L-谷氨酸(1.0%)、维生素C(2.0%)、甘油(2.0%)、MnS04(0.8%)。其中，麦芽糊精为河北华辰淀粉糖有限公司MD150(11<=DE<16)。按照实例1的方法制备复合保护剂溶液。下面说明上述各保护剂的使用效果。首先，制备嗜酸乳杆菌菌悬液将嗜酸乳杆菌由固体斜面培养基接入液体培养基中，在37t:下培养24h，进行活化。活化三次后，以2%的接种量接种至锥形瓶进行扩大培养。取出少量培养好的菌液进行镜检，确定无杂菌污染后，再将培养好的菌液置于离心机中，在4800r/min的转速下离心15min，取出离心管，排出上清液，在管底部用移液枪收集菌悬液。然后，分别加入各复合保护剂溶液(复合保护剂溶液与嗜酸乳杆菌菌悬液的体积比为2:l)，混匀后进行冻干干燥。冻干前的活菌水平为4.41X10fu/mL。冻干后取样加水复溶(使得保护剂的浓度与冻干前相同)，测活菌水平，然后分别fC保藏1个月、3个月、6个月、12个月后，再分别测活菌水平。其中，冻干干燥的方法为将添加有不同冷冻保护剂的菌悬液分装于小安瓿瓶中，每瓶O.5mL，在-35t:中冻lh之后抽气3分钟，真空度10.6712.OOPa条件下干燥。冻干56h后逐渐升高温度至15°C，以排出剩余的水分，使冻干制品的水分含量为1.50%2.50%，然后用于测定菌落总数。测活菌水平的方法为分别将冻干后的菌样用10%的灭菌无抗脱脂牛奶补充到0.5mL。用稀释液进行10梯度稀释，择适当的稀释梯度，吸取10iiL菌悬液置于MRS琼脂平板上，每个稀释梯度做3个平行，将菌悬液均匀涂开，然后将平板移入培养箱中37t:恒温培养48h，待长出菌落后进行计数。测得的数据如下保护剂溶液<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由上表可以看出，利用本发明的冻干保护剂能够获得较高的嗜酸乳杆菌冻干存活率，且保藏期较长，存活率不易降低。权利要求嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂，其特征在于，配方如下9～11重量份脱脂奶粉、10～12重量份乳糖、0.3～0.6重量份甘油、1.5～2.5重量份谷氨酸钠和0.15～0.25重量份维生素C。2.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂，其特征在于，配方如下9.510.5重量份脱脂奶粉、1011重量份乳糖、0.40.5重量份甘油、22.5重量份谷氨酸钠和0.20.25重量份维生素C。3.根据权利要求l所述的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂，其特征在于，配方如下10重量份脱脂奶粉、10重量份乳糖、0.5重量份甘油、2重量份谷氨酸钠和0.2重量份维生素C。4.嗜酸乳杆菌冻干保护方法，其特征在于，使嗜酸乳杆菌菌悬液中含有权利要求13任一项所述的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂，得保护菌液，总重量为130180重量份，然后冷冻干燥。5.嗜酸乳杆菌冻干保护方法，其特征在于，将权利要求13任一项所述的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂配制成保护剂水溶液，水的总量为7080重量份，然后将所述保护剂水溶液与嗜酸乳杆菌菌悬液以体积比1.52.5:l进行混合，然后冷冻干燥。6.根据权利要求4所述嗜酸乳杆菌冻干保护方法，其特征在于，将权利要求13任一项所述的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂配制成保护剂水溶液的方法为将脱脂奶粉、乳糖和甘油加水并加热，溶解后调节pH值至6.97.1，灭菌后室温下加入谷氨酸钠和维生素C的过滤除菌水溶液，混匀即得保护剂水溶液。7.权利要求5所述的保护剂水溶液。全文摘要本发明提供了一种嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂，其配方如下9～11重量份脱脂奶粉、10～12重量份乳糖、0.3～0.6重量份甘油、1.5～2.5重量份谷氨酸钠和0.15～0.25重量份维生素C。利用本发明的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂的冻干保护方法可以为在嗜酸乳杆菌菌液中添加所述任一种嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂，得到保护菌液，总重量为130～180重量份，然后冷冻干燥。利用本发明的嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂能够获得较高的嗜酸乳杆菌冻干存活率，且保藏期较长，存活率不易降低。文档编号C12N1/20GK101693882SQ20091023617公开日2010年4月14日申请日期2009年10月29日优先权日2009年10月29日发明者王豫田申请人:北京博益众科技有限公司;