专利名称：一种稳定的过氧化物酶组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种稳定的过氧化物酶组合物。
背景技术：
过氧化物酶是由微生物或植物所产生的一类氧化还原酶，是以过氧化氢为电子受 体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化 氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。由于酚类和胺 类氧化后多能产生有色类物质，因此过氧化物酶被广泛用于检验领域，是一种重要的工具 酶。过氧化物酶通常来源于植物，如辣根、大豆、萝卜等，是临床检验试剂中的常用酶， 广泛用于多个生化检测项目以及酶联免疫类(ELISA)试剂盒。作为检测试剂盒显色体系的 关键成分，过氧化物酶对试剂盒的质量有重要影响。过氧化物酶作为蛋白酶的一类，容易受 温度、酸碱度、金属离子等影响而失去活性，特别是在溶液中更容易失活。通常，干粉状态的 HRP能够保存数年，而在溶液中很不稳定，但是作为诊断试剂的组分，过氧化物酶需要在溶 液中保持稳定。一般认为液体溶液中的酶在一定PH范围内是稳定的，超过范围容易失活变 性，因此可用缓冲液保存酶试剂。但是缓冲液本身含有大量离子，或影响酶蛋白的构型，或 影响底物的解离程度，其本身对酶的稳定性产生很多影响，因此发明一种稳定的过氧化物 酶组合物配方，可以提高过氧化物酶特别是在溶液中的稳定性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种稳定的过氧化物酶组合物的配方，使过氧化物酶在溶 液体系下能够长期稳定。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种稳定的过氧化物酶组合物是含 有过氧化物酶、pH7. 0 9. 0的缓冲液、非离子型表面活性物质、糖类以及金属离子，所述稳 定的过氧化物酶组合物中各成分及含量为过氧化物酶的浓度为0. 1 50U/mL、非离子型 表面活性物质浓度0. 1 10mg/mL、糖类浓度0. 1 10mg/mL、金属离子浓度0. 1 IOmg/ mL,所述糖类为单糖或二糖或寡糖，所述金属离子为钙离子。进一步的所述缓冲液优选为Tris-HCl缓冲液或磷酸盐缓冲液，优选pH为7. 5 8. 5，所述过氧化物酶的优选浓度为1 10U/mL，所述糖类优选浓度为1 10mg/mL。进一步的所述金属离子还包括二价铁离子。为了使具有更好的稳定性，进一步的所述过氧化物酶组合物中还含有浓度1 10mg/mL的一价可溶性盐、浓度20 100IU/mL的抗生素，浓度1 20mg/mL的保护性蛋白质。更进一步的所述一价可溶性盐的优选浓度为3 5mg/mL，所述保护性蛋白质优 选浓度为5 10mg/mL。本发明提供的稳定的过氧化物酶组合物配方为溶液体系，可用于检验试剂盒，比未添加组合物的过氧化物酶具有更好的稳定性。
具体实施例方式本发明目的是为了提供一种具有稳定的过氧化物酶组合物，所述的过氧化物酶为 植物来源的过氧化物酶，具体为辣根过氧化物酶、大豆过氧化物酶、萝卜过氧化物酶。一般 的过氧化物酶溶液(溶液1)的成分为含有3 30U/mL的浓度的过氧化物酶的Tris-HCl 缓冲液(PH7. 5)。下面提供本发明的两种具体实施例
实施例1——溶液2 过氧化物酶浓度(3 30U/mL)，去氧胆酸钠(0. 1 IOmg/ mL)，海藻糖(0. 1-lOmg/mL)，氯化钙(0. 1 10mg/mL)，溶于 Tris-HCl 缓冲液(ρΗ7· 5)。实施例2——溶液3 过氧化物酶浓度(3 30U/mL)，去氧胆酸钠(0. 1 IOmg/ mL)，海藻糖(0. 1 10mg/mL)，氯化钙(0. 1 10mg/mL)，庆大霉素(20 100单位/mL)，牛 血清白蛋白(2 20mg/mL)，溶于Tris-HCl缓冲液(ρΗ7· 5)。上述实施例中溶液分别定容至lOOmL。为了便于观察比较出本发明的优点，下面给出上述三种溶液在常温避光保存一定 天数后，根据紫外分光光度计的检测结果计算酶活的保留度，如下表所示 通过比较可看出溶液2和溶液3相对于溶液1来说大大提高了酶稳定性，其中溶 液3为最优。而其主要原因是非离子型表面活性物质，如去氧胆酸钠可以抑制酶蛋白的聚 集从而使蛋白离开界面来抑制蛋白质的变性；单糖、二糖以及寡糖类，如海藻糖，具有非特 异性蛋白质稳定作用；保护性蛋白质，如牛血清白蛋白，通过其表面活性、蛋白质-蛋白质 相互作用的空间隐蔽以及提高粘度来限制酶蛋白质运动以起到稳定作用，如氯化钙，能使 过氧化物酶空间结构稳定的离子以及抗生素如庆大霉素，除此以外，还可以添加一价可溶 性盐，使其具有较好的稳定性。
权利要求
一种稳定的过氧化物酶组合物，其特征是所述稳定的过氧化物酶组合物是含有过氧化物酶、pH7.0～9.0的缓冲液、非离子型表面活性物质、糖类以及金属离子，所述稳定的过氧化物酶组合物中各成分及含量为过氧化物酶的浓度为0.1～50U/mL、非离子型表面活性物质浓度0.1～10mg/mL、糖类浓度0.1～10mg/mL、金属离子浓度0.1～10mg/mL，所述糖类为单糖或二糖或寡糖，所述金属离子为钙离子。
2.根据权利要求1所述的稳定的过氧化物酶组合物，其特征是所述缓冲液优选为 Tris-HCl缓冲液或磷酸盐缓冲液，优选pH为7. 5 8. 5。
3.根据权利要求1所述的稳定的过氧化物酶组合物，其特征是所述过氧化物酶的优 选浓度为1 10U/mL。
4.根据权利要求1所述的稳定的过氧化物酶组合物，其特征是所述糖类优选浓度为 1 10mg/mLo
5.根据权利要求1所述的稳定的过氧化物酶组合物，其特征是所述金属离子还包括二价铁离子。
6.根据权利要求1所述的稳定的过氧化物酶组合物，其特征是所述过氧化物酶组合 物中还含有浓度1 10mg/mL的一价可溶性盐、浓度20 100IU/mL的抗生素，浓度1 20mg/mL的保护性蛋白质。
7.根据权利要求6所述的稳定的过氧化物酶组合物，其特征是所述一价可溶性盐的 优选浓度为3 5mg/mL，所述保护性蛋白质的优选浓度为5 10mg/mL。
全文摘要
本发明涉及一种稳定的过氧化物酶组合物。一种稳定的过氧化物酶组合物是含有过氧化物酶、pH7.0～9.0的缓冲液、非离子型表面活性物质、糖类以及金属离子，所述稳定的过氧化物酶组合物中各成分及含量为过氧化物酶的浓度为0.1～50U/mL、非离子型表面活性物质浓度0.1～10mg/mL、糖类浓度0.1～10mg/mL、金属离子浓度0.1～10mg/mL，所述糖类为单糖或二糖或寡糖，所述金属离子为钙离子。本发明提供的稳定的过氧化物酶组合物配方为溶液体系，可用于检验试剂盒，比未添加组合物的过氧化物酶具有更好的稳定性。
文档编号C12N9/08GK101864402SQ20101012523
公开日2010年10月20日 申请日期2010年3月16日 优先权日2010年3月16日
发明者徐华良, 肖洁瑾, 邹丽萍, 顾瑜 申请人:苏州市玮琪生物科技有限公司