专利名称：艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群的制作方法
技术领域：
本发明涉及艾滋病病毒靶细胞⑶4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA 群。具体的讲是在人microRNA组范围内筛选艾滋病相关miRNA，利用细胞模型和基因芯 片技术相结合的方法建立的艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达 miRNA群，属生物医学领域。
背景技术：
microRNA(miRNA)是新近发现的一类约有18-24个核苷酸的内源性非编码小分 子单链RNA，通过不完全互补的方式与编码蛋白mRNA的3’端非编码区结合，引起靶mRNA 的降解、活性降低或翻译受抑，从而在转录后水平对基因表达进行调控。miRNA在细胞的 个体发育、增殖、凋亡、分化和应激中扮演着重要的角色，与肿瘤、心脏病、糖尿病和艾滋病 等多种疾病都有着密切联系，某些miRNA的产生过程与HIV-1 (human immunodeficiency virus-type 1，人类免疫缺陷病毒)的生活周期相关联。因此推测在艾滋病的发生过程中， 存在特征性的miRNA表达谱。HIV-1天然的靶细胞⑶4+T细胞的活化和增殖是HIV-1得以大量繁殖和广泛播散 的先决条件，1996年Levine等人意外发现，经同时包被在磁珠上的⑶3、⑶28抗体(“⑶3/ CD28 beads")刺激后，活化、增殖的CD4+T细胞，反而获得了既能抵抗感染又能清除病毒 的能力——来自HIV-1感染者的CD4+T细胞活化后，能逐渐清除已感染的病毒，来自健康成 人的CD4+T细胞活化后，能抵抗HIV-1而不被感染。我们以此特殊效应为基础，同时以高度 易感并促进病毒增殖的PHA/IL-2活化细胞为反证，构建细胞模型并筛选出艾滋病相关的 miRNA表达图谱，用以直接筛选安全有效的抗艾滋细胞药物。
发明内容
本发明的目的在于提供艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表 达miRNA群。本发明采用高通量的人microRNA芯片，通过比较未刺激、⑶3/⑶28磁珠刺激及 PHA/IL-2刺激三种状态的⑶4+T细胞miRNA表达差异，筛选得到一组艾滋病病毒靶细胞 ⑶4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群，共包含5个miRNA，其部分或全部组合 作为筛查抗艾滋细胞药物的标志；该群miRNA在CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1状态时高表 达，miRNA群中的5个miRNA的名称及序列见表1 ；表1抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群(共5个miRNA)microRNA名字 序列
权利要求
一组艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV 1的特异表达miRNA群，其特征在于该特异表达miRNA群包含的miRNA名称分别为hsa mir 130b、hsa mir 18a、hsa mir 19b、hsa mir 34a、hsa mir 363，其部分或全部组合作为筛查抗艾滋细胞药物的标志；该群miRNA在CD4+T细胞抵抗和清除HIV 1状态时高表达。
2.权利要求1所述的艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达 miRNA群，其特征在于5个miRNA由SEQ ID NO :1_5所示的核苷酸序列组成。
全文摘要
本发明涉及艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群，属生物医学领域。本发明通过采用高通量的人miRNA芯片，比较未刺激、CD3/CD28磁珠刺激及PHA/IL-2刺激三种状态的CD4+T细胞miRNA表达差异，筛选得到艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群，该特异表达miRNA群共包含5个miRNA，由SEQ ID NO1-5所示的核苷酸序列组成。本特异表达miRNA群中的各miRNA所调控的靶基因均参与了造成不同生物学效应的显著功能(Gene Ontology，GO)和信号转导通路(pathway)，同时在信号转导网络(Signal-Net)和基因的调控网络(GeneRelNet)中处于关键结点或重要地位，并有望基于其中单个、多个或全部miRNA建立芯片、分子杂交和RT-PCR的方法检测样本中这些miRNA的表达水平，根据这些miRNA的表达水平诊断艾滋病及筛选抗艾滋细胞药物。
文档编号C12Q1/68GK101974530SQ201010293220
公开日2011年2月16日 申请日期2010年9月27日 优先权日2010年9月27日
发明者张华堂, 徐雯雯, 郭彦, 陈玲, 韩妙君 申请人:中国科学院昆明动物研究所