专利名称：新霉素菌种选育快速筛选方法
新霉素菌种选育快速筛选方法本发明涉及一种新霉素菌种选育快速筛选方法，尤其涉及一种将新霉素优良菌种 快速鉴别出来的方法。
背景技术：
新霉素菌种筛选是提高菌种质量，稳定发酵水平的关键环节。长期以来，新霉素菌 种选育一直采用抗生素微生物检定法来测定不同单菌落的生产能力，从中选择生产能力高 的菌株，淘汰生产能力低下的菌株。由于菌种选育要经过初筛和复筛两个阶段，筛选的单菌 落众多，一般在150-200，加之抗生素微生物检定法操作繁琐，测定时间约需20小时，且每 次测定数量有限，故要分数批进行测定，这不但大大降低了菌种筛选效率，还因不同条件、 不同操作人等因素的变化，增加了生物检定法测定的误差，降低了选育优良菌种的准确性。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种新霉素菌种选育快速筛选方法，该方法能 够缩短菌种选育的周期，提高菌种筛选效率和选育优良菌种的准确性，为新霉素发酵生产 提供优良的菌种，从而提高和稳定新霉素发酵生产水平。本发明的目的是这样实现的一种新霉素菌种选育快速筛选方法，包括以下步 骤
(1)接种发酵瓶在无菌室内采用挖块接种法将新霉素单菌落斜面接于发酵瓶，将发酵 瓶放入摇床上振摇，摇床转速250转/分；温度35士2度；培养时间135-140小时，完成发酵 瓶接种；
(2)发酵液过滤将发酵到终点的发酵瓶进行过滤，取其过滤液；
(3)平板的培养基的准备将生物检定培养基预热融化，在无菌室内倒入平板内，待培 养基凝固后，再倒入内含敏感菌的检定培养基；
(4)直接点样将多个用滤纸制作成圆形纸片放置于平板培养基上，用进样器吸取发酵 液的过滤液直接点在圆形纸片上，所有样品点完后，将平板培养基放入培养箱中进行培养， 培养时间14-16小时，培养温度36-38度；
(5)抑菌圈的测量将培养24小时的平板从培养箱中取出，对每个抑菌圈进行测量，根 据菌种选育确定的数量，优先选择抑菌圈大的菌株进行生物效价确认，完成新霉素菌种选 育快速筛选。控制培养基厚度在2_3mm之间。控制检定培养基的厚度在2_3mm之间。本发明提供的新霉素菌种选育快速筛选方法，由于发明了菌种选育中的快速简化 的筛选方法，从而缩短菌种选育的周期，以前菌种选育周期要用5周时间，现在仅用一周时 间，菌种筛选效率提高的80% ；本发明提高菌种筛选效率和选育优良菌种的准确性，从而为 新霉素发酵生产提供优良的菌种，为提高和稳定发酵生产水平提供了可靠保证。
具体实施例方式实施例
(1)接种发酵瓶在无菌室内采用挖块接种法将新霉素单菌落斜面接于发酵瓶，将发酵 瓶放入摇床上振摇，摇床转速250转/分；温度35士2度；培养时间135-140小时，完成发酵 瓶接种；
(2)滤液的制备将发酵到终点的发酵液IOOml进行过滤，用滤纸过滤，获取过滤液；
(3)平板的准备用不锈钢薄板制作35X25X4cm尺寸的平板(带盖)，将生物检定培养 基预热融化，在无菌室内倒入平板内，倒入量以培养基厚度控制在2-3mm为宜，待培养基 凝固后，再倒入内金黄色葡萄球菌作含敏感菌的检定培养基，倒入量以培养基厚度控制在 2-3mm为宜；
(4)直接点样用滤纸制作成直径为5mm的圆形纸片，将纸片按适当距离放置于平板培 养基上，后用5微升进样器吸取发酵液的过滤液直接点在圆形纸片上，样品点完后，将平板 培养基放入培养箱中进行培养，培养时间14 - 16小时，培养温度36 - 38度。(5)抑菌圈的测量将培养后的平板从培养箱中取出，用游标卡尺对每一个抑菌圈 进行测量，根据菌种选育确定的数量，优先选择抑菌圈大的菌株进行下一步的生物效价确 认。实施例试验数据一
发酵时实际效 间 价 抑菌,直径 平均值
丄2Hmm
140小吋 20356u/ml 2“ 23,58i_ 23.42mm
1 2 丄 l:5inm 87小时 11708u/ml 2._21.29min 21.22mm
试验数据一中采用的是两个效价差别大的样进行对比，是在不同批次，不同发酵时间 的完成的取样，从表中数据显示，效价高的其抑菌圈直径大，效价低的其抑菌圈直径小。实施例试验数据二
样品序样品效平均直
号 价 圈1直径圈2直径径
1号样 11946u^ml 22.52mm 22.86mm22.69mm
2号样 9233u/ml 22.39mm 22.26mm22.32mm 3号样-8273uM ■ 22.IOmrn Tl.85mm"207η τη 4号样‘11979'j/ml~2J3mm ~58mm22.45mm ？号祥 10674u/ml 22.24mm 22.21mm22.22mm 石号样 9134ii/ml 21.86mm 21.38mm21.62mm
从试验数据二可以看到不同效价的样，其效价高的抑菌圈直径大，效价低的抑菌圈直 径小。规律性较强，通过这一规律，可完成新霉素菌种选育快速筛选。
权利要求
一种新霉素菌种选育快速筛选方法，其特征在于包括以下步骤(1)接种发酵瓶在无菌室内采用挖块接种法将新霉素单菌落斜面接于发酵瓶，将发酵瓶放入摇床上振摇，摇床转速250转/分；温度35±2度；培养时间135 140小时，完成发酵瓶接种；(2)发酵液过滤将发酵到终点的发酵瓶进行过滤，取其过滤液；(3)平板的培养基的准备将生物检定培养基预热融化，在无菌室内倒入平板内，待培养基凝固后，再倒入内含敏感菌的检定培养基；(4)直接点样将多个用滤纸制作成圆形纸片放置于平板培养基上，用进样器吸取发酵液的过滤液直接点在圆形纸片上，所有样品点完后，将平板培养基放入培养箱中进行培养，培养时间14 16小时，培养温度36 38度；(5)抑菌圈的测量将培养24小时的平板从培养箱中取出，对每个抑菌圈进行测量，根据菌种选育确定的数量，优先选择抑菌圈大的菌株进行生物效价确认，完成新霉素菌种选育快速筛选。
2.根据权利要求1所述的新霉素菌种选育快速筛选方法，其特征在于控制培养基厚 度在2-3mm之间。
3.根据权利要求1所述的新霉素菌种选育快速筛选方法，其特征在于控制检定培养 基的厚度在2-3mm之间。
4.根据权利要求1所述的新霉素菌种选育快速筛选方法，其特征在于检定培养基中 的敏感菌为金黄色葡萄球菌。
全文摘要
一种新霉素菌种选育快速筛选方法，通过接种发酵瓶、发酵液过滤、平板的培养基的准备、直接点样和抑菌圈的测量的步骤，根据菌种选育确定的数量，优先选择抑菌圈大的菌株进行生物效价确认，完成新霉素菌种选育快速筛选。本发明提供的新霉素菌种选育快速筛选方法，从而缩短菌种选育的周期，以前菌种选育周期要用5周时间，现在仅用一周时间，菌种筛选效率提高的80%；本发明提高菌种筛选效率和选育优良菌种的准确性，从而为新霉素发酵生产提供优良的菌种，为提高和稳定发酵生产水平提供了可靠保证。
文档编号C12N1/00GK101974435SQ201010545450
公开日2011年2月16日 申请日期2010年11月16日 优先权日2010年11月16日
发明者何连明 申请人:宜昌三峡制药有限公司