专利名称：改良的鸡白介素2蛋白及其制备方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，尤其是改良的鸡白介素2蛋白及其制备方法。
背景技术：
1976年Morgan等发现小鼠脾细胞培养上清中含有一种刺激胸腺细胞生长的因子，由于这种因子能促进和维持τ细胞长期培养，称为T细胞生长因子(T cell growthfactor, TCGF)，1979 年统一命名为白介素 2 (interleukin 2，IL-2)。白细胞介素2主要是由T淋巴细胞或T淋巴细胞系产生的一类最有力的T细胞生长因子，属于Thl型细胞因子，在抗肿瘤、抗毒素、免疫调节及感染性疾病的治疗中具有重要作用，它能够有效地提高免疫功能，促进τ、B淋巴细胞的增殖、分化并可增强NK细胞、单核细胞等的杀伤活性，也可促进其他细胞因子的分泌以及刺激T细胞在体外的生长。在免疫应答系统中起着极其重要的调节作用，是一种天然的免疫增强佐剂和治疗剂。自1983年人类IL-2基因被首次克隆和测序以来，目前已有几十个物种的IL-2基因被发现。鸡白介素的研究相对于其它哺乳动物来说比较滞后，是由Simdick等1997年首次克隆了鸡IL-2 的基因，目前已实现了鸡IL-2基因在大肠杆菌、C0S、CH0-K和人肾成纤维细胞中成功表达， 且表达产物具有生物活性，为基因工程重组白介素的规模化生产和应用提供了依据。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供改良的鸡白介素2(ChIL_2/A)蛋白。本发明所要解决的另一技术问题在于提供所述改良的鸡白介素2(ChIL_2/A)蛋白的制备方法。为解决上述技术问题，本发明的技术方案是改良的鸡白介素2(命名为ChIL-2/A)蛋白，为天然的鸡白介素2 (命名为ChIL_2/ N)蛋白的改良蛋白，该蛋白具有ChIL-2/N蛋白的生物活性，其氨基酸序列为序列表中 <400>3所示的序列，由121个氨基酸残基组成。优选的，上述改良的鸡白介素2(ChIL_2/A)蛋白经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有ChIL-2/N蛋白活性的ChIL-2/A蛋白的衍生蛋白质。优选的，上述改良的鸡白介素2 (ChIL-2/A)蛋白，为了使鸡白介素2 (ChIL-2/A) 蛋白或其衍生蛋白质分泌到细胞周质或培养基中，可在所述蛋白质的N端连接上信号肽序列。优选的，上述改良的鸡白介素2(ChIL-2/A)蛋白，为了使鸡白介素2 (ChIL_2/A)蛋白或其衍生蛋白质便于纯化，可在氨基酸残基序列组成的蛋白质的N端或C端连接上如表 1所示的标签。表1 标签的序列
权利要求
1.改良的鸡白介素2蛋白，其特征在于其氨基酸序列为序列表中<400>3所示的序列，由121个氨基酸残基组成，该蛋白具有天然的鸡白介素2蛋白的生物活性。
2.根据权利要求1所述的改良的鸡白介素2蛋白经过一个或几个氨基酸残基的取代和 /或缺失和/或添加且具有天然的鸡白介素2蛋白活性的由ChIL-2/A蛋白的衍生蛋白质。
3.根据权利要求1或2所述的改良的鸡白介素2蛋白，其特征在于为了使该改良的鸡白介素2蛋白或其衍生蛋白质分泌到细胞周质或培养基中，可在所述蛋白质的N端连接上信号肽序列。
4.根据权利要求1或2所述的改良的鸡白介素2蛋白，其特征在于为了使该改良的鸡白介素2蛋白或其衍生蛋白质便于纯化，可在氨基酸残基序列组成的蛋白质的N端或C端连接上标签，所述标签为 Poly-Arg、Poly-His、FLAG、Strep-tag II 或 c_myc。
5.一种编码权利要求1所述改良的鸡白介素2蛋白的优化基因，其特征在于所述优化基因的核苷酸序列为序列表中<400>1所示的序列。
6.根据权利要求5所述的改良的鸡白介素2蛋白的优化基因，其特征在于是在严格条件下杂交且编码改良的鸡白介素2蛋白的核酸序列，所述严格条件为在0. 1 X SSPE或 0. IXSSC以及0. S DS的溶液中，在65°C下杂交，并用该溶液洗膜。
7.含有权利要求5所述改良的鸡白介素2蛋白的优化基因的重组表达载体和重组表达细胞。
8.—种权利要求1所述改良的鸡白介素2蛋白的制备方法，其特征在于将所述蛋白的优化基因插入到表达载体中，得到含有该蛋白优化基因的重组表达载体，然后将该重组表达载体导入宿主细胞，筛选得到含有重组表达载体的阳性重组细胞，发酵培养该重组细胞，表达得到所述蛋白。
9.根据权利要求8所述改良的鸡白介素2蛋白的制备方法，其特征在于所述表达载体为pBV220、pET载体、pQE载体或pPIC9K，所述宿主细胞为大肠杆菌DH5 α、TBl或 BL21(DE3)。
10.根据权利要求8所述改良的鸡白介素2蛋白的制备方法，其特征在于所述表达为诱导表达，诱导物为异丙基-β -D-硫代吡喃半乳糖苷，诱导浓度为lmmol/L，诱导表达时间为3-5小时。
全文摘要
本发明提供的改良的鸡白介素2(命名为ChIL-2/A)蛋白，为天然的鸡白介素2(命名为ChIL-2/N)蛋白的改良蛋白，该ChIL-2/A蛋白具有ChIL-2/N蛋白的生物活性，其氨基酸序列为序列表中3所示的序列，由121个氨基酸残基组成；所述改良的ChIL-2/A蛋白与ChIL-2/N蛋白相比，其稳定性大大增加，且活性有明显增强；该改良蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式高效表达，表达后重组蛋白占菌体总蛋白的50％以上，复性回收率达70％以上，且生产周期短，成本低，为该鸡白介素2的大规模生产应用提供了良好的研究基础。
文档编号C12N1/19GK102180959SQ201110065038
公开日2011年9月14日 申请日期2011年3月17日 优先权日2011年3月17日
发明者张树伟, 范文辉, 陈业金, 马彦娜 申请人:天津康莱森生物科技集团有限公司