专利名称：转基因小麦b102-1-2的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种转基因小麦品系的鉴定方法。
背景技术：
转基因小麦是利用基因工程技术，将外源基因导入小麦基因中，经过筛选得到的能够表达目的基因的小麦。在基因转移和表达研究中，需要对经转化处理的幼苗进行分子检测，以淘汰非转化植株。选择标记基因(如新霉素磷酸转移酶基因、氯霉素乙酰转移酶基因和潮霉素转移酶基因等)和报告基因(如B2葡萄糖苷酸酶基因和荧光素酶基因等)已被广泛用于转化植株和组织的筛选，但在某些情况下，这种筛选效果不可靠。PCR是用于此目的检测的常用技术之一，具有灵敏、快速的优点。对于此技术的应用在于寻找恰当的、特异性强的标记性基因片段，并以此为基础设计相匹配的引物及扩增条件。
发明内容
本发明的目的在于提供能准确快速地鉴定转基因小麦B102-1-2的方法，所述的转基因小麦B102-1-2的检测方法，是通过PCR的方法检测序列为SEQ ID NO :13的基因组件，该基因组件中包括序列为SEQ ID NO: 17的边缘序列。上述本发明的方法所述及的PCR扩增的弓I物对是SEQ ID NOS 7/8 B102-F1(SEQ ID NO 7) :GCGAGAGCCGCTGTATGTTCB102-R1(SEQ ID NO :8) :CGAGTAAATAATGCCAGCCTGT。容易理解，采用上述方法进行PCR扩增，如果扩增结果为阳性，则待测的小麦为转基因小麦B102-1-2 ；如果扩增结果为阴性，则待测的小麦不是转基因小麦B102-1-2。更为优选的技术方案中，PCR反应条件是94°C，lmin，1 个循环；980C 10s，62°C 30s，72°C 30s，35 个循环；72°C，7min，1 个循环。本发明的转基因小麦B102-1-2的检测方法的最优技术方案是采用50 μ LPCR反应体系，其中含有待测样品DNA，其浓度优选5ng/μ L，10XLA PCR BufferII (Mg2+Plus) 5ul, dNTP 各 0. 4mM，碱基序列为 SEQ ID NOS :7 8 的 PCR 引物各 0. 2 μ M，Taq DNA 聚合酶 0. 05U/ul。采用本发明的方法可以快速、灵敏地实现对转基因小麦B102-1-2的品系鉴定，该方法特异性强，灵敏度高，快速准确。
本发明附图3幅，图1是实施例1以样品C基因组DNA为模板扩增的1 %琼脂糖凝胶电泳图，其中 M 是 DL2，000 DNA Marker ； 1 6 分别是 ubiquitin、NOS、barl、bar2、uidA 和 GAG56D。
图2是实施例1以样品A、B、C基因组DNA为模板扩增的1 %琼脂糖凝胶电泳图，其中Ml 是 λ -Hind III digest, M2 是 DL2, 000 DNA Marker, 1 6 分别是 C-ubiquitin F/ Nos R,C-ubiquitin F/bar Rl,C-ubiquitin F/uidA R,A-ubiquitin F/Nos R,A-ubiquitin F/bar Rl和 A-ubiquitin F/uidA R。图3是实施例1的1 %琼脂糖凝胶电泳图，其中M :DL2, 000 DNA Marker。
具体实施例方式本申请的发明人经过大量研究，成功地克隆出包括转基因小麦B102-1-2中特异性外源序列的基因组件C，该基因组件C中包括头尾两段的小麦基因组部分序列，以及这两段序列中的 ubi, vector pBANF-bar, vector pUbiGUSPlus, vector HSP, reporter vestor pUbiGUSPlus，ubiquitin以及coli DHl。该基因组件C的全序列如SEQ ID NO :13所示。在所获得的上述基因组件C全序列的基础上，发明人进一步获得转基因成分的边缘序列，即 SEQ ID NO 17所示的序列，位于SEQ ID NO 13序列的第10214 14042位。针对SEQ ID NO :13所示的基因组件的检测可以通过PCR来实现，使用特异性的引物对SEQ ID NOS :7/8 在一定条件下扩增，如扩增出目标序列，即可判定所检测样品源自转基因小麦B102-1-2。下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1.转基因小麦特异性基因组件A、B、C全序列及相应边缘序列的获取1、转基因样品基因组DNA提取分别选取转基因小麦B72-8_llb、转基因小麦B73_6_l和转基因小麦B102_l_2， 分别标记为样品A、样品B和样品C。各个样品粉碎后在液氮中研成细末，然后使用DNA Extraction Kit for GMO Detection Ver. 2. 0 (TaKaRa Code No. D9093)进行基因组DNA提取。以1 %琼脂糖凝胶电泳检测DNA样品质量，并使用超微量分光光度计(Nanodrop) 对检测样品基因组DNA质量和浓度，检测结果显示基因组DNA质量符合后续实验要求，样品 A、B 和 C 的平均基因组 DNA 浓度是 162. 69ng/ μ L、125. 80ng/ μ L、203. 75ng/ μ L，也符合后续实验要求。2、转基因小麦特异性基因组件A、B、C全序列获取以及元件分析(1)根据从GenBank获取的小麦内、外源基因相关信息设计引物如表1所示表1定性PCR检测小麦内源基因、外源基因所需的引物序列
权利要求
1.转基因小麦B102-1-2的检测方法，是通过PCR的方法检测序列为SEQID N0:13的基因组件，该基因组件中包括序列为SEQ ID N0:17的边缘序列。
2.权利要求1所述的方法，其特征在于所述的PCR扩增的引物对是SEQIDNOS 7/80
3.权利要求2所述的方法，其特征在于所述的PCR反应条件是 94°C，Imin，1 个循环；980C 10s，62°C 30s, 72°C 30s，35 个循环； 72°C，7min，l 个循环。
4.权利要求3所述的方法，其特征在于所述的PCR反应体系为50μ L体系，含有待测样品 DNA 5ng/y L, 10XLA PCR BufferII (Mg2+Plus) 5ul，dNTP 各 0. 4mM，引物对各 0. 2 μ M， Taq DNA 聚合酶 0. 05U/ul。
全文摘要
一种转基因小麦B102-1-2的检测方法，是通过PCR的方法检测序列为SEQ IDNO13的基因组件，该基因组件中包括序列为SEQ ID NO17的边缘序列。采用本发明的方法可以快速、灵敏地实现对转基因小麦B102-1-2的品系鉴定，该方法特异性强，灵敏度高，快速准确。
文档编号C12Q1/68GK102344963SQ20111032145
公开日2012年2月8日 申请日期2011年10月20日 优先权日2011年10月20日
发明者徐君怡, 曹际娟 申请人:徐君怡, 曹际娟