专利名称：制备同分异构纯的经取代的环己醇的制作方法
制备同分异构纯的经取代的环己醇本发明涉及从顺式/反式经取代的环己醇的混合物开始，制备基本上同分异构纯的经取代的环己醇的方法。可以通过使用本领域技术人员已知的多种技术，例如，蒸馏、色谱、结晶，来实现分离顺式/反式同分异构物的混合物。WO 2005/073215描述了生产对映异构纯的氨基醇类的方法。其公开了在存在脂肪酶的条件下用琥珀酸酐对外消旋醇进行对映选择性酰基化产生琥珀酸半酯，所述琥珀酸半酯能够与未反应的对映异构体分离。EP 1069183 A2教导了在固定化的来自伯克氏假单胞杆菌(Pseudomonasburkholderia)脂肪酶的存在下用琥珀酸酐对外消旋的反式_2_甲氧基环己醇进行对映选择性酰基化。通常，蒸馏分离用于分离顺式/反式异构体。然而，在经取代的环己醇的情况下，由于经取代的环己醇的升华特征，此方法是不令人满意的。因此，待解决的技术问题是发现用于分离顺式/反式经取代的环己醇的混合物的方法。本发明通过提供用于分离处于基本同分异构纯的形式的经取代的环己醇的方法解决了该问题，所述方法包括:(i)在存在具有如SEQ ID No:2中所展示的蛋白质序列的脂肪酶，或者具有与SEQID No:2中所显示的整个氨基酸序列至少75%相同的蛋白质序列并且具有SEQ ID No:2的至少50%的酶促活性的脂肪酶的条件下，将经取代的环己醇的顺式/反式混合物与二羧酸酸酐反应，产生反式半酯，(ii)从未反应的经取代的环己醇顺式同分异构体中分离反式半酯，(iii)分离同分异构纯的经取代的顺式或反式环己醇。令人惊讶地，在发明方法中使用的脂肪酶以高选择性引发二羧酸酸酐对反式形式的经取代的环己醇的酰基化。本发明方法的结果是获得处于基本同分异构纯的形式的经取代的环己醇的顺式或反式同分异构体。“基本同分异构纯的”意指顺式或反式产物基本不被另一种同分异构体污染。因此，“基本同分异构纯的”意指获得至少80%，优选地至少90%，更优选地至少95%，特别地至少96、97、98、99%的同分异构体。发明方法的第一步骤:
在存在具有如SEQ ID No:2中所展示的蛋白质序列的脂肪酶，或者具有与SEQ IDNo:2中所显示的整个氨基酸序列至少75%相同的蛋白质序列并且具有SEQ ID No:2的至少50%的酶促活性的脂肪酶的条件下，将经取代的环己醇的顺式/反式混合物(下式Al至A3)与二羧酸酸酐反应，产生半酯(下式Cl至C3)和未反应的同分异构体(下式BI至B3)。
应注意，通过使用所述脂肪酶选择性地酰基化反式同分异构体。
权利要求
1.制备基本同分异构纯的经取代的环己醇的方法，所述方法包括: i)在存在具有如SEQ ID No:2中所展示的蛋白质序列的脂肪酶，或者具有与SEQ IDNo:2中所显示的整个氨基酸序列至少75%相同的蛋白质序列并且具有SEQ ID No:2的至少50%的酶促活性的脂肪酶的条件下，将经取代的环己醇的顺式/反式混合物与二羧酸酸酐反应，产生反式半酯， )从未反应的经取代的环己醇顺式同分异构体中分离反式半酯， iii)分离经取代的顺式或反式环己醇。
2.根据权利要求1的方法，其中步骤(i)中使用的脂肪酶是由a)如SEQID No:1中所定义的多核苷酸，b)在SEQ ID No:1的序列编码区的全长上与SEQ ID No:1的序列至少75%相同的多核苷酸所编码的。
3.根据权利要求2的方法,其中脂肪酶在植物伯克氏菌(Burkholderiaplantarii)中表达。
4.根据前述权利要求中任一项的方法，其中在步骤(i)中使用C2-Cltl二羧酸酸酐。
5.根据权利要求4的方法，其中使用琥珀酸酐。
6.根据前述权利要求中任一项的方法，其中步骤(i)中的脂肪酶是固定化的。
7.根据前述权利要求中任一项的方法，其中步骤(i)的反应在作为溶剂的烃、醚，或醇中进行。
8.根据权利要求7的方法，其中溶剂选自甲苯、石油醚、MTBE、四氢呋喃，或环己烷组成的组。
9.根据前述权利要求中任一项的方法，其中步骤(ii)中的分离是通过在8-10的pH提取进行的。
10.根据前述权利要求中任一项的方法，其中使用的经取代的环己醇的混合物是在相对于OH-基团的4位被取代的。
11.根据权利要求10的方法，其中使用4-叔丁基环己醇。
12.用于在固体支持物上固定化蛋白质的方法，其中通过喷雾干燥固定化发酵液。
13.根据权利要求12的方法，其中使用Na2SO4作为固体支持物。
全文摘要
公布了从经取代的环己醇的顺式/反式混合物开始制备同分异构纯的经取代的环己醇的方法，所述方法包括在存在脂肪酶的条件下将经取代的环己醇的顺式/反式混合物与二羧酸酸酐反应以产生反式半酯，将所述半酯从未反应的经取代的环己醇顺式同分异构体中分离。
文档编号C12N11/14GK103221370SQ201180056293
公开日2013年7月24日 申请日期2011年11月21日 优先权日2010年11月26日
发明者M·博奈克塞尔, K·迪特里希, J·道韦尔, A·索尔格, W·拉德纳, B·库珀, R·贝克斯 申请人:巴斯夫欧洲公司