抗hpvl2蛋白的广谱中和单克隆抗体或其抗原结合片段及它们的用途

抗hpvl2蛋白的广谱中和单克隆抗体或其抗原结合片段及它们的用途【专利摘要】本发明涉及能够结合人乳头瘤病毒(HPV)的L2蛋白并能够中和多个型别的HPV的广谱中和单克隆抗体及其抗原结合片段，以及编码它们的序列，产生它们的细胞株，和应用它们进行诊断、预防或治疗的方法和用途。本发明还涉及所述广谱中和单克隆抗体所针对的表位肽，包含此类表位肽的载体蛋白，以及此类表位肽和载体蛋白的用途。【专利说明】抗HPVL2蛋白的广谱中和单克隆抗体或其抗原结合片段及它们的用途【
技术领域：
】[0001]本发明涉及分子病毒学和免疫学领域。具体而言，本发明涉及能够结合人乳头瘤病毒(HPV)的L2蛋白并能够中和多个型别的HPV的广谱中和单克隆抗体及其抗原结合片段，以及编码它们的序列，产生它们的细胞株，和应用它们进行诊断、预防或治疗的方法和用途。本发明还涉及所述广谱中和单克隆抗体所针对的表位肽，包含此类表位肽的载体蛋白，以及此类表位肽和载体蛋白的用途。【
背景技术：
】[0002]人乳头瘤病毒(HPV)是一种无包膜病毒，它由病毒衣壳以及包裹在衣壳内的约8kbDNA构成。HPV的病毒衣壳是由主要衣壳蛋白LI和次要衣壳蛋白L2组成的直径为50-55nm的正二十面体颗粒。目前已经发现了100多种型别的HPV，其中，根据其与肿瘤发生的关系可以分为两类:低危型HPV—一包括HPV6和HPV11，其致癌风险低，主要引起尖锐湿疣；高危型HPV—一包括HPV16、18、31、33、35、39、45、52、58、59等，其是导致包括女性宫颈癌在内的多种肿瘤疾病的主要原因(CliffordGM,SmithJS,PlummerM,etal.BrJCancer,2003,88(1):63_73)。现有的研究结果表明，可以通过预防HPV感染来预防宫颈癌等疾病的发生。[0003]HPV的疫苗研究发现，体外表达的HPVLI蛋白能自组装成病毒样颗粒(VLP)，其结构与天然HPV高度相似，保留了天然病毒的绝大多数中和表位，可诱导高滴度的中和抗体。因此，现有的以及正在研发的HPV疫苗多以病毒样颗粒为主要疫苗成分。然而，研究发现，HPVVLP主要诱导针对同型HPV的中和抗体，产生针对同型HPV的保护性免疫，而仅在一些同源性高的型别之间存在交叉保护(GiroglouT,SappM，FliggeC，etal.Vaccine.2001;19(13-14):1783-93；OrozcoJJ,CarterJJ,KoutskyLA.JVirol[J].2005;79(15):9503-14;FleuryMJ,TouzeA,MaurelMC,etal.ProteinSc1.2009.18(7):1425-1438)。[0004]目前，扩大疫苗的保护范围的主要方法是增加疫苗的价数，开发多价疫苗。然而，随着疫苗价数的增加，不但加大了制备的难度，从而使疫苗的成本急剧增加，而且给疫苗的安全性带来极大的挑战。此外，多价疫苗之间可能存在着相互间的免疫干扰，使得各价疫苗难以充分发挥其诱导免疫的功能。因此，还需要研究一种制备方法简单，成本低并且能够产生针对多个型别的保护的HPV疫苗。[0005]在疫苗研究中，单克隆抗体是疫苗抗原质控的重要工具，抗体水平是评价疫苗效果的标准，而且，抗体及其表位(尤其是中和抗体对应的中和表位)以及相应的中和机制也是疫苗研发的重要指针。进一步，在应用研究中，中和抗体，特别是广谱中和抗体，在HPV的诊断，预防和治疗上也将具有特别的优势。然而，现有研究表明，HPVLI蛋白所诱导的抗体大多为型别特异性中和抗体，极少有跨型别的广谱中和抗体的报道。最近的研究发现，HPVL2蛋白上存在大量的广谱表位，能够诱导机体产生跨型别的交叉保护抗体。因此，本领域需要更多的针对L2蛋白的广谱中和抗体，以对L2蛋白上的表位进行检测与评价(从而鉴定有价值的广谱表位)，并将该抗体及其对应的表位应用于HPV的诊断，预防和治疗中。【
发明内容】[0006]本发明提供了能够结合人乳头瘤病毒(HPV)的L2蛋白并能够中和多个型别的HPV的广谱中和单克隆抗体及其抗原结合片段，以及编码它们的序列，产生它们的细胞株，和应用它们进行诊断、预防或治疗的方法和用途。本发明还涉及所述广谱中和单克隆抗体所针对的表位肽，包含此类表位肽的载体蛋白，以及此类表位肽和载体蛋白的用途。[0007]在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。[0008]如本文中所使用的，术语“HPVL2蛋白”是指，人乳头瘤病毒(HPV)的次要衣壳蛋白(L2蛋白)，其是本领域公知的。在本申请中，当提及HPV的L2蛋白时，其主要涉及选自以下11种型别的HPV的L2蛋白:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。然而，本领域技术人员理解，术语“HPVL2蛋白”还可以包括其他型别的HPV的L2蛋白。[0009]在本申请中，为了方便起见，当描述HPVL2蛋白的氨基酸序列时，除非上下文特别指出，否则，参照HPV16L2蛋白的氨基酸序列进行描述。例如，表述“HPVL2蛋白的第21-30位氨基酸残基”是指，HPV16L2蛋白的第21-30位氨基酸残基。然而，如本文中所使用的，术语“HPVL2蛋白”意欲包括所有型别的HPV(特别是上述11种型别)的L2蛋白。因此，表述“HPVL2蛋白的第21-30位氨基酸残基”不仅包括HPV16L2蛋白的第21-30位氨基酸残基，而且包括其他型别的HPVL2蛋白中的相应序列片段。[0010]如本文中所使用的，当提及HPV16L2蛋白的氨基酸序列时，其使用NCBI数据登录号:AAD33258.1所示的序列来进行描述。例如，表述“HPV16L2蛋白的第21-30位氨基酸残基”中的第21-30位氨基酸残基是指，AAD33258.1所对应的多肽的第21-30位氨基酸残基。然而，本领域技术人员理解，在HPV16L2蛋白的氨基酸序列中，可天然产生或人工引入突变或变异(包括但不限于置换，缺失和/或添加)，而不影响其生物学功能。因此，在本发明中，术语“HPV16L2蛋白”应包括所有此类序列，包括例如AAD33258.1所示的序列以及其天然或人工的变体。并且，当描述HPV16L2蛋白的序列片段时，其不仅包括AAD33258.1的序列片段，还包括其天然或人工变体中的相应序列片段。例如，表述“HPV16L2蛋白的第21-30位氨基酸残基”包括，AAD33258.1的第21-30位氨基酸残基，以及其变体(天然或人工)中的相应片段。根据本发明，表述“相应序列片段”或“相应片段”是指，当对序列进行最优比对时，即当序列进行比对以获得最高百分数同一性时，进行比较的序列中位于等同位置的片段。[0011]如本文中所使用的，术语“HPV16C50L2蛋白”是指，缺失了C端50个氨基酸残基的HPV16L2蛋白。[0012]如本文中所使用的，术语“HPVLI蛋白”是指，人乳头瘤病毒(HPV)的LI蛋白，其是本领域公知的(参见，例如NCBIGENBANK数据库序列号:DQ469930.1)。在本申请中，当提及HPV的LI蛋白或VLP时，其主要涉及选自以下11种型别的HPV的LI蛋白或VLP:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。然而，本领域技术人员理解，术语“HPVLI蛋白”还可以包括其他型别的HPV的LI蛋白。[0013]在本申请中，为了方便起见，当描述HPVLI蛋白的氨基酸序列时，除非上下文特别指出，否则，参照HPV16LI蛋白的氨基酸序列进行描述。例如，表述“HPVLI蛋白的第127-128位氨基酸残基”是指，HPV16L1蛋白的第127-128位氨基酸残基。然而，如本文中所使用的，术语“HPVLI蛋白”意欲包括所有型别的HPV(特别是上述11种型别)的LI蛋白。因此，表述“HPVLI蛋白的第127-128位氨基酸残基”不仅包括HPV16L1蛋白的第127-128位氨基酸残基，而且包括其他型别的HPVLI蛋白中的相应序列片段。[0014]如本文中所使用的，当提及HPV16LI蛋白的氨基酸序列时，参照SEQIDNO:55的氨基酸序列来进行描述。例如，表述“HPV16LI蛋白的第127-128位氨基酸残基”是指，SEQIDN0:55所示氨基酸序列的第127-128位氨基酸残基。然而，本领域技术人员理解，在HPV16LI蛋白的氨基酸序列中，可天然产生或人工引入突变或变异(包括但不限于，置换，缺失和/或添加)，而不影响其生物学功能。因此，在本发明中，术语“HPV16LI蛋白”应包括所有此类序列，包括例如SEQIDNO:55所示的序列以及其天然或人工的变体。并且，当描述HPV16LI蛋白的序列片段时，其不仅包括SEQIDNO:55的序列片段，还包括SEQIDNO:55的天然或人工变体中的相应序列片段。例如，表述“HPV16LI蛋白的第127-128位氨基酸残基”包括，SEQIDN0:55的第127-128位氨基酸残基，以及其变体(天然或人工)中的相应片段。根据本发明，表述“相应序列片段”或“相应片段”是指，当对序列进行最优比对时，即当序列进行比对以获得最高百分数同一性时，进行比较的序列中位于等同位置的片段。[0015]如本文中所使用的，术语“HBcore蛋白”是指，乙型肝炎病毒(HBV)的核心抗原蛋白，其是本领域公知的(参见，例如NCBIGENBANK数据库序列号:AAF82721.1)。[0016]如本文中所使用的，当提及HBcore蛋白的氨基酸序列时，其使用NCBI数据登录号:AAF82721.1所示的序列来进行描述。例如，表述“HBcore的第79-81位氨基酸残基”是指，AAF82721.1所对应的多肽的第79-81位氨基酸残基。然而，本领域技术人员理解，在HBcore的氨基酸序列中，可天然产生或人工引入突变或变异(包括但不限于，置换，缺失和/或添加)，而不影响其生物学功能。因此，在本发明中，术语“HBcore”应包括所有此类序列，包括例如AAF82721.1所对应的序列以及其天然或人工的变体。并且，当描述HBcore的序列片段时，其不仅包括AAF82721.1的序列片段，还包括其天然或人工变体中的相应序列片段。例如，表述“HBcore蛋白的第79-81位氨基酸残基”包括，AAF82721.1的第79-81位氨基酸残基，以及其变体(天然或人工)中的相应片段。根据本发明，表述“相应序列片段”或“相应片段”是指，当对序列进行最优比对时，即当序列进行比对以获得最高百分数同一性时，进行比较的序列中位于等同位置的片段。[0017]如本文中所使用的，术语“抗体”是指，是指通常由两对多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为K和λ轻链。重链可分类为μ、δ、Y、α或ε,并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“D”区。各重链由重链可变区(Vh)和重链恒定区(Ch)组成。重链恒定区由3个结构域((^、(^和^^)组成。各轻链由轻链可变区(VJ和轻链恒定区(Cl)组成。轻链恒定区由一个结构域Q组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)的结合。Vh和'区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(CDR))，其间散布有较保守的称为构架区(FR)的区域。各Vl由按下列顺序:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个⑶R和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区(Vh和Vl)分别形成抗体结合部位。氨基酸至各区域或结构域的分配遵循KabatSequencesofProteinsofImmunologicalInterest(NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.(1987and1991))，或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917;Chothia等人(1989)Nature342:878-883的定义。术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，特别地，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgGl,IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgAl,IgA2，IgD,IgE或IgM抗体。[0018]如本文中所使用的，术语抗体的“抗原结合片段”是指包含全长抗体的片段的多肽，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合，其也被称为“抗原结合部分”。通常参见，FundamentalImmunology,Ch.7(Paul,ff.,ed.,第2版，RavenPress,N.Y.(1989),其以其全文通过引用合并入本文，用于所有目的。可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗体的抗原结合片段。在一些情况下，抗原结合片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如，scFv)、嵌合抗体、双抗体(diabody)和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。[0019]如本文中所使用的，术语“Fd片段”意指由VdPChI结构域组成的抗体片段；术语“Fv片段”意指由抗体的单臂的\和Vh结构域组成的抗体片段；术语“dAb片段”意指由Vh结构域组成的抗体片段(Ward等人，Nature341:544-546(1989));术语“Fab片段”意指由\、VH、(^和ChI结构域组成的抗体片段；术语“F(ab’)2片段”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的抗体片段。[0020]在一些情况下，抗体的抗原结合片段是单链抗体(例如，scFv)，其中\和Vh结构域通过使其能够产生为单个多肽链的连接体配对形成单价分子(参见，例如,Bird等人,Science242:423-426(1988)和Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883(1988))。此类scFv分子可具有一般结构=NH2-Vf接头-Vh-COOH或NH2-Vh-接头-'-C00H。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(GGGGS)4的接头，但也可使用其变体(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:6444-6448)。可用于本发明的其他接头由Alfthan等人(1995)，ProteinEng.8:725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.1mmunol.31:94-106，Hu等人(1996)，CancerRes.56:3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293:41-56和Roovers等人(2001),CancerTmmunol.描述。[0021]在一些情况下，抗体的抗原结合片段是双抗体，即，双价抗体，其中V1^P\结构域在单个多肽链上表达，但使用太短的连接体以致不允许在相同链的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并且产生两个抗原结合部位(参见，例如，HolligerP.等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:6444-6448(1993),和PoljakR.J.等人，Structure2:1121-1123(1994))。[0022]可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组DNA技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体(例如本发明提供的单克隆抗体14H6)获得抗体的抗原结合片段(例如，上述抗体片段)，并且以与用于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。[0023]在本文中，除非上下文明确指出，否则当提及术语“抗体”时，其不仅包括完整抗体，而且包括抗体的抗原结合片段。[0024]如本文中所使用的，术语“单抗”和“单克隆抗体”是指，来自一群高度同源的抗体分子中的一个抗体或抗体的一个片断，也即除可能自发出现的自然突变外，一群完全相同的抗体分子。单抗对抗原上的单一表位具有高特异性。多克隆抗体是相对于单克隆抗体而言的，其通常包含至少2种或更多种的不同抗体，这些不同的抗体通常识别抗原上的不同表位。单克隆抗体通常可采用Kohler等首次报道的杂交瘤技术获得(Nature,256:495,1975)，但也可采用重组DNA技术获得(如参见U.S.P4，816，567)。[0025]如本文中所使用的，以编号提及的单克隆抗体与从相同编号的杂交瘤获得的单克隆抗体相同。例如，单克隆抗体14H6是与从杂交瘤细胞株14H6或其亚克隆或后代细胞获得的抗体相同的抗体。[0026]如本文中所使用的，术语“嵌合抗体”是指这样的抗体，其轻链或/和重链的一部分源自一个抗体(其可以源自某一特定物种或属于某一特定抗体类或亚类)，且轻链或/和重链的另一部分源自另一个抗体(其可以源自相同或不同的物种或属于相同或不同的抗体类或亚类)，但无论如何，其仍保留对目标抗原的结合活性(U.S.P4，816，567toCabillyetal.;Morrisonetal.,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,81:68516855(1984))。[0027]如本文中所使用的，术语“人源化抗体”是指，人源免疫球蛋白(受体抗体)的全部或部分CDR区被一非人源抗体(供体抗体)的CDR区替换后得到的抗体或抗体片段，其中的供体抗体可以是具有预期特异性、亲和性或反应性的非人源(例如，小鼠、大鼠或兔)抗体。此外，受体抗体的构架区(FR)的一些氨基酸残基也可被相应的非人源抗体的氨基酸残基替换，或被其他抗体的氨基酸残基替换，以进一步完善或优化抗体的性能。关于人源化抗体的更多详细内容，可参见例如，Jonesetal.,Nature,321:522525(1986);Reichmannetal.,Nature,332:323329(1988);Presta,Curr.0p.Struct.Biol.,2:593596(1992);和Clark,Tmmunol.Today21:397402(2000)。[0028]如本文中所使用的，“中和抗体”是指，能清除或显著降低目标病毒的毒力(例如，感染细胞的能力)的抗体或抗体片段。[0029]如本文中所使用的，术语“表位”是指，抗原上被免疫球蛋白或抗体特异性结合的部位。“表位”在本领域内也称为“抗原决定簇”。表位或抗原决定簇通常由分子的化学活性表面基团例如氨基酸或碳水化合物或糖侧链组成并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。例如，表位通常以独特的空间构象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个连续或非连续的氨基酸，其可以是“线性的”或“构象的”。参见，例如，EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology,第66卷，G.E.Morris,Ed.(1996)。在线性表位中，蛋白质与相互作用分子(例如抗体)之间的所有相互作用的点沿着蛋白质的一级氨基酸序列线性存在。在构象表位中，相互作用的点跨越彼此分开的蛋白质氨基酸残基而存在。[0030]如本文中所使用的，术语“表位肽”是指，抗原上能够用作表位的肽段。在一些情况下，单独的表位肽即能够被针对所述表位的抗体特异性识别/结合。在另一些情况下，可能需要将表位肽与载体蛋白融合，以便表位肽能够被特异性抗体识别。如本文中所使用的，术语“载体蛋白”是指这样的蛋白，其可以充当表位肽的载体，即，其可以在特定位置处插入表位肽，以便该表位肽能够呈现出来，从而该表位肽能够被抗体或免疫系统识别。此类载体蛋白是本领域技术人员熟知的，包括例如，HPVLI蛋白(可以将表位肽插入在所述蛋白的第127-128位氨基酸之间或在第423-424位氨基酸之间，参见Slupetzky,K.等ChimericpapiIlomavirus-1ikeparticlesexpressingaforeignepitopeoncapsidsurfaceloops[J].JGenVirol,2001,82:2799-2804；Varsani,A.等Chimerichumanpapillomavirustype16(HPV-16)LIparticlespresentingthecommonneutralizingepitopefortheL2minorcapsidproteinofHPV-6andHPV-16[J].JVirol,2003,77:8386-8393)，HBV核心抗原(可以用表位肽替换所述蛋白的第79-81位氨基酸，参见Koletzki,D.，etal.HBVcoreparticlesallowtheinsertionandsurfaceexposureoftheentirepotentiallyprotectiveregionofPuumalahantavirusnucleocapsidprotein[J].BiolChem,1999，380:325_333)，CRM197蛋白(可以将表位肽连接至该蛋白或其片段的N末端或C末端)。任选地，可以在表位肽与载体蛋白之间使用连接体(例如柔性或刚性连接体)，以促进二者各自的折叠。[0031]在本发明中，CRM197(Cross-ReactingMaterials197)是指，白喉毒素(DT)的一种无毒突变体(Uchida,T.，K.M,Pappenheimer,Jr.，R.Gregory,etal.,J.Biol.Chem.1973.248:3838-3844)，其与编码DT的野生型基因相比存在单个核苷酸突变，导致第52位的氨基酸残基由Gly变为Glu(G.Giannini,R.Rappuoli,G.Rattietal.,NucleicAcidsResearch.1984.12:4063-4070)。[0032]可使用本领域技术人`员已知的常规技术，就与相同表位的结合竞争性筛选抗体。例如，可进行竞争和交叉竞争研究，以获得彼此竞争或交叉竞争与抗原(例如，HPVL2蛋白)的结合的抗体。基于它们的交叉竞争来获得结合相同表位的抗体的高通量方法描述于国际专利申请WO03/48731中。因此，可使用本领域技术人员已知的常规技术，获得与本发明的单克隆抗体(例如，单克隆抗体14H6)竞争结合L2蛋白上的相同表位的抗体及其抗原结合片段(即，抗原结合部分)。[0033]如本文中所使用的，术语“分离的”或“被分离的”指的是，从天然状态下经人工手段获得的。如果自然界中出现某一种“分离”的物质或成分，那么可能是其所处的天然环境发生了改变，或从天然环境下分离出该物质，或二者情况均有发生。例如，某一活体动物体内天然存在某种未被分离的多聚核苷酸或多肽，而从这种天然状态下分离出来的高纯度的相同的多聚核苷酸或多肽即称之为分离的。术语“分离的”或“被分离的”不排除混有人工或合成的物质，也不排除存在不影响物质活性的其它不纯物质。[0034]如本文中所使用的，术语“大肠杆菌表达系统”是指由大肠杆菌(菌株)与载体组成的表达系统，其中大肠杆菌(菌株)来源于市场上可得到的菌株，例如但不限于:GI698，ER2566，BL21(DE3)，B834(DE3)，BLR(DE3)。[0035]如本文中所使用的，术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于:质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或Pl来源的人工染色体(PAC);噬菌体如λ噬菌体或Μ13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疫病毒(如单纯疱疫病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。一种载体可以含有多种控制表达的元件，包括但不限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。[0036]如本文中所使用的，术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如S2果蝇细胞或Sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，CHO细胞，COS细胞，NSO细胞，HeLa细胞，BHK细胞，HEK293细胞或人细胞等的动物细胞。[0037]如本文中所使用的，术语“同一性”用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时(例如，两个DNA分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据，或两个多肽的每一个中的某个位置都被赖氨酸占据)，那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的“百分数同一性”是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目XlOO的函数。例如,如果两个序列的10个位置中有6个匹配，那么这两个序列具有60%的同一性。例如，DNA序列CTGACT和CAGGTT共有50%的同一性(总共6个位置中有3个位置匹配)。通常，在将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用，例如，可通过计算机程序例如Align程序(DNAstar,Inc.)方便地进行的Needleman等人(1970)J.Mol.Biol.48:443-453的方法来实现。还可使用已整合入ALIGN程序(版本2.0)的E.Meyers和ff.Miller(Comput.ApplBiosc1.,4:11-17(1988))的算法，使用PAMl20权重残基表(weightresiduetable)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一'I"生。此外，可使用已整合入GCG软件包(可在www.gcg.com上获得)的GAP程序中的Needleman和Wunsch(JMoIBiol.48:444-453(1970))算法，使用Blossum62矩阵或PAM250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重(gapweight)和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。[0038]如本文中使用的，术语“保守置换”意指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白/多肽的必要特性的氨基酸置换。例如，可通过本领域内已知的标准技术例如定点诱变和PCR介导的诱变引入保守置换。保守氨基酸置换包括用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的置换，例如用在物理学上或功能上与相应的氨基酸残基相似(例如具有相似大小、形状、电荷、化学性质，包括形成共价键或氢键的能力等)的残基进行的置换。已在本领域内定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，优选用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代相应的氨基酸残基。鉴定氨基酸保守置换的方法在本领域内是熟知的(参见,例如，Brummell等人，Biochem.32:1180-1187(1993);Kobayashi等人ProteinEng.12(10):879-884(1999);和Burks等人Proc.NatlAcad.SetUSA94:412-417(1997)，其通过引用并入本文)。[0039]如本文中使用的，术语“免疫原性(immunogenicity)”是指,能够刺激机体形成特异抗体或致敏淋巴细胞的能力。其既指，抗原能刺激特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分化，最终产生免疫效应物质如抗体和致敏淋巴细胞的特性，也指抗原刺激机体后，机体免疫系统能形成抗体或致敏T淋巴细胞的特异性免疫应答。免疫原性是抗原最重要的性质，一种抗原能否成功地诱导宿主产生免疫应答取决于三方面的因素:抗原的性质、宿主的反应性和免疫方式。[0040]如本文中使用的，术语“特异性结合”是指，两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。在某些实施方式中，特异性结合某抗原的抗体(或对某抗原具有特异性的抗体)是指，抗体以小于大约10_5m，例如小于大约10_6M、10_7M、10_8M、10_9M或IO^10M或更小的亲和力(Kd)结合该抗原。[0041]如本文中所使用的，术语“KD”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数，其用于描述抗体与抗原之间的结合亲和力。平衡解离常数越小，抗体-抗原结合越紧密，抗体与抗原之间的亲和力越高。通常,抗体(例如,本发明的单克隆抗体14H6)以小于大约10_5M，例如小于大约10_6M、10_7M、10_8M、10_9M或KTkiM或更小的解离平衡常数(Kd)结合抗原(例如，L2蛋白)，例如，如使用表面等离子体共振术(SPR)在BIAC0RE仪中测定的。[0042]如本文中所使用的，术语“广谱”是指，本发明的单克隆抗体能够中和多种型别(例如,至少3种，例如至少4种，至少5种，至少6种，至少7种，至少8种，至少9种，至少10种，或11种型别)的HPV。例如，本发明的单克隆抗体14H6能够中和下列11种型别的HPV:HPV6、HPVlUHPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。由广谱(中和)单克隆抗体所识别的L2蛋白的表位被称为“广谱(中和)表位”。[0043]如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”和“单抗”具有相同的含义且可互换使用；术语“多克隆抗体”和“多抗”具有相同的含义且可互换使用；术语“多肽”和“蛋白质”具有相同的含义且可互换使用。并且在本发明中，氨基酸通常用本领域公知的单字母和三字母缩写来表示。例如，丙氨酸可用A或Ala表示。[0044]如本文中所使用的，术语“杂交瘤”和“杂交瘤细胞株”可互换使用，并且当提及术语“杂交瘤”和“杂交瘤细胞株”时，其还包括杂交瘤的亚克隆和后代细胞。例如，当提及杂交瘤细胞株14H6时，其还指杂交瘤细胞株14H6的亚克隆和后代细胞。[0045]如本文中所使用的，术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如Remington’sPharmaceuticalSciences.EditedbyGennaroAR,19thed.Pennsylvania:MackPublishingCompany,1995),并且包括但不限于:pH调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂。例如，pH调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液；表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如Tween-80;离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。[0046]如本文中所使用的，术语“佐剂”是指非特异性免疫增强剂，当其与抗原一起或预先递送入机体时，其可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。佐剂有很多种，包括但不限于铝佐剂(例如氢氧化铝)、弗氏佐剂(例如完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂)、短小棒状杆菌、脂多糖、细胞因子等。弗氏佐剂是目前动物试验中最常用的佐剂。氢氧化铝佐剂则在临床实验中使用较多。[0047]如本文中所使用的，术语“HPVVLP”是指，由体外表达的HPVLI蛋白自组装形成的病毒样颗粒。[0048]如本文中所使用的，术语“HPV假病毒”是指，利用HPVVLP可非特异性包装核酸的特性，通过在细胞内表达HPV的LI和L2蛋白，且包裹细胞内的游离体病毒DNA或外源导入的报告质粒，而形成的HPV假病毒(Yeager,M.D,Aste-Amezaga,M.etal(2000)Virology(278)570一7)。用于形成假病毒的方法包括例如，重组病毒表达系统法及多质粒共转染方法。本发明中所指的HPV假病毒主要包括11个型别的HPV假病毒，分别是HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58、HPV59假病毒。[0049]如本文中所使用的，术语“有效量”是指足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如，预防疾病(例如HPV感染或与HPV感染相关的疾病)有效量是指，足以预防，阻止，或延迟疾病(例如HPV感染或与HPV感染相关的疾病)的发生的量；治疗疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如，对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。[0050]因此，在一个方面，本发明提供了能够特异性结合HPVL2蛋白并且能够中和多个型别的HPV的单克隆抗体及其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体包括:[0051]包含氨基酸序列为SEQIDNO:5-7的⑶R的重链可变区(VH);和/或[0052]包含氨基酸序列为SEQIDN0:8_10的⑶R的轻链可变区(VL)。[0053]在一个优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包括，如SEQIDNO:2所示的VH。[0054]在一个优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包括，如SEQIDNO:4所示的VL。[0055]在一个优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包括:[0056]包含氨基酸序列为SEQIDNO:5-7的CDR的VH，和包含氨基酸序列为SEQIDNO:8-10的CDR的VL0[0057]在一个优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包括:如SEQIDNO:2所示的VH，和如SEQIDNO:4所示的VL0[0058]在一个优选的实施方案中，所述的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株14H6产生的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株14H6保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏号CCTCC—C201268。[0059]在一个优选的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体(例如，scFv)、人源化抗体、嵌合抗体或双抗体。[0060]在一个优选的实施方案中，所述的单克隆抗体以小于大约10_5M，例如小于大约10-6Μ、10-7Μ、10-8Μ、I(T9M或I(T10M或更小的Kd结合HPV的L2蛋白。[0061]在一个优选的实施方案中，所述L2蛋白是源自HPV16的L2蛋白。[0062]在一个优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包括非-CDR区，且所述非-CDR区来自不是鼠类的物种，例如来自人抗体。[0063]在一个优选的实施方案中，所述的单克隆抗体是中和抗体，其能够中和至少3种，例如至少4种，至少5种，至少6种，至少7种，至少8种，至少9种，至少10种，或11种型别的HPV。在一个优选的实施方案中，所述的单克隆抗体能够中和下列11种型别的HPV:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。[0064]在另一个方面，本发明提供了能够特异性结合HPVL2蛋白并且能够中和多个型别的HPV的单克隆抗体及其抗原结合片段，其能够阻断所述L2蛋白与由杂交瘤细胞株14H6产生的单克隆抗体的结合的至少50%，优选至少60%，优选至少70%，优选至少80%，优选至少90%，优选至少95%或优选至少99%，所述杂交瘤细胞株14H6保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏号CCTCC-C201268。[0065]此类单抗所识别的表位与单抗14H6识别的表位相同，或者在空间上存在重叠，从而此类单抗能够降低单抗14H6与HPV的L2蛋白的结合至少50%，优选至少60%，优选至少70%，优选至少80%，优选至少90%，优选至少95%或优选至少99%。[0066]可以米用常规方法如Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,EdHarlowandDavidLane(1988)中描述的方法,测定某一待测单抗降低某一已知单抗结合HPVL2蛋白的能力。一个示例性的方法包括:先把抗原预包被在微孔板上，然后把系列稀释的未标记的待测抗体以及特定浓度的经标记的已知单抗共同加入上述预包被后的微孔板中进行孵育，然后在洗涤后测定在不同稀释度的待测抗体下，已知抗体结合到板上的数量。待测抗体竞争已知抗体结合抗原的能力越强，已知抗体结合抗原的能力就越弱，结合到板上的已知抗体就越少。通常，将抗原预包被在96孔微孔板上，并利用放射标记法或酶标记法测定待测单抗阻断经标记的已知单抗的能力。[0067]可以米用Kohler等在Nature256:495(1975)中报道的杂交瘤制备方法来制备单抗。首先用免疫原(必要时候添加佐剂)免疫注射小鼠或其它合适的宿主动物。免疫原或佐剂的注射方式通常为皮下多点注射或腹腔注射。将免疫原预先偶联到某些已知蛋白(如血清白蛋白)上，可能会有助于增强抗原在宿主内的免疫原性。佐剂可以利用弗氏佐剂或MPL-TDM等。动物在接受免疫后，体内会产生分泌特异性结合免疫原的抗体的淋巴细胞。收集目的淋巴细胞，并用合适的融合剂(如PEG)将其与骨髓瘤细胞融合，从而获得杂交瘤细胞(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103,AcademicPress,1996)。[0068]将上述制备的杂交瘤细胞接种到合适的培养基中进行生长，所述培养基中含有一种或多种能够抑制未融合的、母体骨髓瘤细胞生长的物质。例如，对于缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶(HGPRT或HPRT)的母体骨髓瘤细胞，在培养基中添加次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶(HAT培养基)等物质将可以抑制HGPRT-缺陷细胞的生长。[0069]优选的骨髓瘤细胞应该具有融合率高，抗体分泌能力稳定，对HAT培养基敏感等能力。其中，骨髓瘤细胞首选鼠源骨髓瘤，如M0P-21和MC-1l小鼠肿瘤衍生株(THESalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,Calif.USA),以及SP-2/0或X63_Ag8_653细胞株(AmericanTypeCultureCollection,Rockville,Md.USA)o另外，还可以利用人骨髓瘤和人鼠异源骨髓瘤细胞株制备人单抗(Kozbor,J.Immunol.,133:3001(1984);Brodeuretal.,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987)。[0070]杂交瘤细胞生长的培养基用于检测针对特异抗原的单抗的产生。可以使用下列方法来测定杂交瘤细胞产生的单抗的结合特异性:免疫沉淀或体外结合试验，如放射免疫试验(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)。例如，利用Munson等在Anal.Biochem.107:220(1980)中描述的Scatchard分析法可测定单抗的亲和力。[0071]在确定杂交瘤产生的抗体的特异性、亲和力和反应性之后，目的细胞株可以通过Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103,AcademicPress,1996描述的有限稀释法进行亚克隆化。合适的培养基可以是DMEM或RPM1-1640等。另外，杂交瘤细胞还可以腹水瘤的形式在动物体内生长。[0072]利用传统的免疫球蛋白纯化方法，如蛋白A琼脂糖凝胶、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析等，可以将亚克隆细胞分泌的单抗从细胞培养液、腹水或血清中分离出来。[0073]还可以通过基因工程重组技术获得单克隆抗体。利用特异性结合单抗重链和轻链基因的核酸引物进行PCR扩增，可以从杂交瘤细胞中分离得到编码单抗重链和轻链基因的DNA分子。将所得的DNA分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞(如E.coli细胞、COS细胞、CHO细胞、或其它不产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞)，并在合适的条件下进行培养，可以获得重组表达的目标抗体。[0074]本发明还提供了分离的核酸分子，其编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。此类核酸分子可以从杂交瘤细胞中分离得到，也可以利用基因工程重组技术或化学合成方法获得。[0075]在一个方面，本发明提供了分离的核酸分子，其包含能够编码抗体重链可变区的核酸序列，其中所述抗体重链可变`区包含，氨基酸序列为SEQIDNO:5-7的⑶R。[0076]在一个优选的实施方案中，所述抗体重链可变区具有SEQIDN0:2所示的氨基酸序列。[0077]在一个优选的实施方案中，所述核酸分子具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。[0078]在另一个方面，本发明提供了分离的核酸分子，其包含能够编码抗体轻链可变区的核酸序列，其中所述抗体轻链可变区包含，氨基酸序列为SEQIDN0:8-10的⑶R。[0079]在一个优选的实施方案中，所述抗体轻链可变区具有SEQIDN0:4所示的氨基酸序列。[0080]在一个优选的实施方案中，所述核酸分子具有SEQIDN0:3所示的核苷酸序列。[0081]在另一个方面，本发明提供了一种载体，其包含本发明的分离的核酸分子。本发明的载体可以是克隆载体，也可以是表达载体。[0082]在一个优选实施方案中,本发明的载体是例如质粒,粘粒,曬菌体，柯斯质粒等等。[0083]在另一个方面，还提供了包含本发明的分离的核酸分子或载体的宿主细胞。此类宿主细胞包括但不限于,原核细胞例如大肠杆菌细胞，以及真核细胞例如酵母细胞，昆虫细胞，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。本发明的细胞还可以是细胞系，例如293T细胞。[0084]在另一个方面，还提供了制备本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在合适的条件下培养本发明的宿主细胞，和从细胞培养物中回收本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。[0085]在另一个方面，本发明提供了杂交瘤细胞株14H6，其保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏号CCTCC-C201268。[0086]如本申请所证实的，单克隆抗体14H6的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示(其示例性核苷酸序列如SEQIDNO:1所示)，且轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示(其示例性核苷酸序列如SEQIDN0:3所示)。[0087]单克隆抗体14H6重链的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQIDNO:5-7；轻链的⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列分别为SEQIDN0:8_10。[0088]在另一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。在一个优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记。在一个优选的实施方案中，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。优选地，所述第二抗体还包括可检测的标记。此类可检测的标记时本领域技术人员熟知的，包括但不限于，放射性同位素，荧光物质，发光物质，有色物质和酶(例如辣根过氧化物酶)等。[0089]在另一个方面，本发明提供了检测HPVL2蛋白在样品中的存在或其水平的方法，其包括使用本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。在一个优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记。在另一个优选的实施方案中，所述方法还包括，使用携带可检测的标记的第二抗体来检测本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。所述方法可以用于诊断目的，或者非诊断目的(例如，所述样品是细胞样品，而非来自患者的样品)。[0090]在另一个方面，本发明提供了诊断受试者是否感染了HPV的方法，其包括:使用本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段检测HPVL2蛋白在来自所述受试者的样品中的存在。在一个优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记。在另一个优选的实施方案中，所述方法还包括，使用携带可检测的标记的第二抗体来检测本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。[0091]在另一个方面，提供了本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测HPVL2蛋白在样品中的存在或其水平，或用于诊断受试者是否感染了HPV。[0092]在一个优选的实施方案中，所述L2蛋白是源自HPV16的L2蛋白。[0093]在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。[0094]在另一个方面，本发明提供了用于预防或治疗受试者的HPV感染或与HPV感染相关的疾病(例如宫颈癌)的方法，其包括，给有此需要的受试者施用预防或治疗有效量的本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段，或者本发明的药物组合物。[0095]在另一个方面，提供了本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于预防或治疗受试者的HPV感染或与HPV感染相关的疾病(例如宫颈癌)。[0096]在一个优选的实施方案中，所述HPV选自:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。[0097]在另一个方面，本发明提供了用于中和样品中HPV的毒力的方法，其包括，将包含HPV的样品与本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段接触。在另一个方面，提供了本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段用于制备药物的用途，所述药物用于中和样品中HPV的毒力。在一个优选的实施方案中，所述HPV选自:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。[0098]在另一个方面，本发明还提供了一种分离的表位肽，其由HPVL2蛋白的10—30个连续氨基酸残基组成，且包含HPVL2蛋白的第21—30位氨基酸残基。在一个优选的实施方案中，所述HPVL2蛋白是HPV16L2蛋白。在一个优选的实施方案中，所述HPVL2蛋白的第21—30位氨基酸残基如SEQIDNO:31所示。[0099]在一个优选的实施方案中，本发明的表位肽由L2蛋白的不多于30个的连续氨基酸残基组成，例如，其由30个，29个，28个，27个，26个，25个，24个，23个，22个，21个，20个，19个，18个，17个，16个，15个，14个，13个，12个，11个或10个的连续氨基酸残基组成。例如，本发明的表位肽具有选自SEQIDN0:13、36、38、40、42、44、46、48、50和52所示的氨基酸序列。[0100]特别地，本发明的该表位肽，不需要载体蛋白，即能够被单克隆抗体14H6特异性识别/结合。然而，优选地，可以将本发明的表位肽与载体蛋白融合，以增强表位肽的免疫原性，使得表位肽能够被机体的免疫系统识别，并诱导广谱中和抗体的产生。[0101]因此，在一个方面，本发明还提供了一种重组蛋白，其包含本发明的分离的表位肽和载体蛋白，并且不是天然存在的蛋白或其片段。在所述重组蛋白中，所述表位肽可以连接至载体蛋白的N末端或C末端，插入载体蛋白的内部，或替换载体蛋白的部分氨基酸序列，视所使用的具体载体蛋白而定。此外，任选地，所述表位肽通过连接体(刚性或柔性连接体，例如(GGGGS)3)与载体蛋白相连接。本发明的重组蛋白不受其产生方式的限定，例如，其可以通过基因工程方法(重组技术)产生，也可以通过化学合成方法产生。[0102]在一个优选的实施方案中，所述载体蛋白选自CRM197蛋白或其片段、HPVLI蛋白和HBV核心抗原。[0103]在一个优选的实施方案中，所述载体蛋白是CRM197蛋白或其片段，并且将本发明的表位肽，任选地通过连接体，连接至CRM197蛋白或其片段的N末端或C末端。在一个优选的实施方案中，所述CRM197蛋白的片段是CRM389或CRMA，其序列分别如SEQIDNO:105或119所示。在一个优选的实施方案中，所述连接体的氨基酸序列如SEQIDN0:166所示。在一个优选的实施方案中，本发明的重组蛋白具有选自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:93,95、97、99、101、103、107、109、111、113、115、117、121、123、125、127、129和131。[0104]在一个优选的实施方案中，所述载体蛋白是HPVLI蛋白，并且将本发明的表位肽插入至所述LI蛋白的第127-128位氨基酸残基之间，或第423-424位氨基酸残基之间。在一个优选的实施方案中，本发明的重组蛋白具有选自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:57,59、61、63、65、67、69、71、73和75。[0105]在一个优选的实施方案中，所述载体蛋白是HBV核心抗原，并且用本发明的表位肽替换所述HBV核心抗原的第79-81位氨基酸。在一个优选的实施方案中，所述表位肽与HBV核心抗原通过连接体连接。在一个优选的实施方案中，本发明的重组蛋白具有选自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:79、81、83、85、87和89。[0106]在另一个方面，本发明还提供了一种分离的核酸分子，其包含编码本发明的表位肽或重组蛋白的核苷酸序列。在另一个方面，本发明还提供了一种载体，其包含如上所述的分离的核酸分子。本发明的载体可以是克隆载体，也可以是表达载体。在一个优选实施方案中，本发明的载体是例如质粒，粘粒，噬菌体，柯斯质粒等等。[0107]在另一个方面，还提供了包含如上所述的分离的核酸分子或载体的宿主细胞。此类宿主细胞包括但不限于，原核细胞例如大肠杆菌细胞，以及真核细胞例如酵母细胞，昆虫细胞，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。本发明的细胞还可以是细胞系，例如293T细胞。[0108]在另一个方面，还提供了制备本发明的重组蛋白的方法，其包括，在合适的条件下培养如上所述的宿主细胞，和从细胞培养物中回收本发明的重组蛋白。[0109]在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的重组蛋白，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。[0110]在另一个方面，本发明提供了用于预防或治疗受试者的HPV感染或与HPV感染相关的疾病(例如宫颈癌)的方法，其包括，给有此需要的受试者施用预防或治疗有效量的本发明的药物组合物或重组蛋白。[0111]在另一个方面，提供了本发明的重组蛋白在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于预防或治疗受试者的HPV感染或与HPV感染相关的疾病(例如宫颈癌)。[0112]在另一个方面，本发明提供了用于在受试者体内诱发能够中和至少2个型别的HPV的中和抗体的方法，其包括给有此需要的受试者施用有效量的本发明的药物组合物或重组蛋白。[0113]在另一个方面，提供了本发明的重组蛋白在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在受试者体内诱发能够中和至少2个型别的HPV的中和抗体。[0114]在另一个方面，提供了一种药物组合物，其包含如上文所述的含有本发明的表位肽的载体蛋白，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。[0115]在另一个方面，本发明提供了用于预防或治疗受试者的HPV感染或与HPV感染相关的疾病(例如宫颈癌)的方法，其包括，给有此需要的受试者施用预防或治疗有效量的本发明的载体蛋白，或者本发明的药物组合物。[0116]在另一个方面，提供了本发明的表位肽或者载体蛋白在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于预防或治疗受试者的HPV感染或与HPV感染相关的疾病(例如宫颈癌)。[0117]发明的有益效果[0118]与现有技术相比，本发明的单克隆抗体及其抗原结合片段具有显著的有利方面。特别地，本发明的单克隆抗体及其抗原结合片段能够广谱地中和多种型别(多达11种)的HPV,从而对于预防或治疗受试者的HPV感染或与HPV感染相关的疾病(例如宫颈癌)具有特别显著的优势。[0119]此外，本发明还提供了能够被本发明的广谱中和单克隆抗体识别的表位肽和含有所述表位肽的载体蛋白。此类表位肽和载体蛋白因含有“广谱”表位，而能够诱导机体产生抗多种型别的HPV的中和抗体，因此，对于预防或治疗受试者的HPV感染或与HPV感染相关的疾病(例如宫颈癌)具有特别显著的优势。[0120]下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得显然。【专利附图】【附图说明】[0121]图1显示HPV16C50L2蛋白的SDS-PAGE检测结果。泳道1:蛋白分子量标记；泳道2:HPV16C50L2蛋白。SDS-PAGE检测结果显示，HPV16C50L2蛋白的纯度在90%以上。[0122]图2显示抗体14H6的SDS-PAGE检测结果。泳道1:蛋白分子量标记；泳道2:抗体14H6。SDS-PAGE检测结果显示，抗体14H6的纯度在95%以上。[0123]图3显示蛋白质印迹分析的检测结果，其显示了HPV16C50L2蛋白与抗体14H6的特异性结合。泳道1:HPV16C50L2蛋白；泳道2:蛋白分子量标记。[0124]图4显示抗体14H6与HPV16C50L2蛋白的N端7段多肽(P1-P7)的反应性的ELISA检测。其中，横坐标表示所使用的多肽，纵坐标表示1glO(14H6抗体对多肽的抗体滴度)，16L2表示用作阳性对照的HPV16C50L2蛋白。结果显示，抗体14H6对P3和16L2具有相似的反应性，而不与其他多肽发生反应。这表明，抗体14H6所识别的表位位于P3上。[0125]图5显示分别以HPV16LI蛋白，乙肝病毒核心抗原(HBVcoreAg，或简称HBcore蛋白)或白喉毒素无毒突变体CRM197为基础的、包含L2蛋白的表位肽的重组载体蛋白的克隆设计。在本发明中，使用了HPV16L2蛋白的9种表位肽:[0126]L2A,HPV16L2的aa21_aa30(aa表示氨基酸，其置于数字η前面时，表示第η位氨基酸(例如，aa21表示第21位氨基酸)；置于数字η之后时，表示多肽长度为η个氨基酸(下同))，10肽;[0127]L2B,HPV16L2的aa20_aa31，12肽;[0128]L2C,HPV16L2的aal9_aa32，14肽；[0129]L2D,HPV16L2的aal8_aa33，16肽；[0130]L2E,HPV16L2的aal7_aa34，18肽;[0131]L2F,HPV16L2的aal6_aa35，20肽；[0132]L2G,HPV16L2的aal5_aa36，22肽；[0133]L2I,HPV16L2的aal3_aa38，26肽；[0134]L2K,HPV16L2的aall_aa40，30肽。[0135]图5A:以HPV16LI蛋白作为蛋白载体，并且可使用下列2个插入位置中的任一个。第一个插入位置为HPV16L1蛋白的aal27-aal28之间(SP，目标多肽的N端与HPV16L1蛋白的aal27的C端融合，且目标多肽的C端与HPV16L1蛋白的aal28的N端融合，下同)。根据所使用的表位肽(L2B，L2C，L2D，L2E和L2F)，将获得的重组蛋白分别命名为HPV16L1-DE-L2B，HPV16L1-DE-L2C,HPV16L1-DE-L2D,HPV16L1-DE-L2E和HPV16L1-DE-L2F。第二个插入位置为HPV16LI蛋白的aa423-aa424之间。类似地，根据所使用的表位肽，将获得的重组蛋白分别命名为HPV16L1-a4-L2B等。[0136]图5Β:以HBcore蛋白作为蛋白载体,插入位置为aa78_82(即，目标多肽的N端与HBcore蛋白的aa78的C端融合,且目标多肽的C端与HBVcore蛋白的aa82的N端融合,相当于用目标多肽替换HBcore蛋白的aa79_81)。此外，为了促进目标多肽和载体蛋白的正确折叠，在目标多肽与载体蛋白之间添加连接体。类似地，根据所使用的表位肽，将获得的重组蛋白分别命名为HBcore-L2A等。[0137]图5C:以CRM197或其片段(B卩，CRM389或CRMA)作为蛋白载体，将目的多肽通过连接体(Linker)连接至蛋白载体的C端。其中，CRM389是指包含CRM197的第1-389位氨基酸残基(aal-389)的多肽；CRMA是指包含CRM197的第1-190位氨基酸残基(aal_190)的多肽；Linker是指连接体，其氨基酸序列为GGGGSGGGGSGGGGS。类似地，根据所使用的表位肽和蛋白载体，将获得的重组蛋白分别命名为CRM197-L2A等；CRM389_L2A等；和CRMA-L2A坐寸ο[0138]图6显示通过蛋白质印迹分析,使用抗体14H6或单抗21A5(单抗21A5(本实验室制备)特异性抗HPV16LI蛋白)检测图5A中的重组蛋白的结果。其中，各泳道所使用的蛋白样品如下:泳道1:HPV16L1-DE-L2B;泳道2:HPV16L1-DE_L2C;泳道3:HPV16L1-DE_L2D;泳道4:HPV16L1-DE-L2E;泳道5:HPV16L1-DE_L2F;泳道6:HPV16L1蛋白；泳道7:HPV16C50L2蛋白；泳道8:HPV16Ll-a4-L2B;泳道9:HPV16L1-a4-L2C;泳道10:HPV16L1_a4-L2D；泳道ll:HPV16Ll-a4-L2E;泳道12:HPV16L1_a4-L2F。结果显示，图5A所构建的重组蛋白均能与单抗21A5反应；并且，图5A所构建的重组蛋白均能与单抗14H6反应。[0139]结果显示，图5A所构建的重组蛋白均能与单抗21A5反应；并且，图5A所构建的重组蛋白均能与单抗14H6反应。[0140]图7显示经纯化的图5A所构建的重组蛋白的SDS-PAGE检测结果。其中，各泳道所使用的蛋白样品如下:泳道1:蛋白分子量标记；泳道2:HPV16L1-DE-L2B；泳道3:HPV16L1-DE-L2C；泳道4:HPV16L1-DE_L2D；泳道5:HPV16L1-DE_L2E；泳道6:HPV16L1-DE-L2F;泳道7:HPV16L1_4_L2B;泳道8:HPV16L1_a4-L2C;泳道9:HPV16Ll-a4-L2D;泳道10:HPV16L1-4_L2E;泳道11:HPV16L1_a4-L2F，泳道12:蛋白分子量标记。检测结果显示，经纯化的10个重组蛋白的纯度均在95%左右。[0141]图8显示使用透射电镜观察图5A所构建的重组蛋白的结果。其中，图8A为HPV16L1-DE-L2B，图8B为HPV16L1-DE-L2C，图8C为HPV16L1-DE-L2D，图8D为HPV16L1-DE-L2E，图8E为HPV16L1-DE-L2F，图8F为HPV16L1-a4-L2B，图8G为HPV16Ll-a4-L2C,图8H为HPV16L1-a4-L2D，图81为HPV16L1-a4-L2E，图8J为HPVLl-a4-L2F，图8K为HPV16的VLP。结果显示，以HPV16L1-DE为蛋白载体所构建的5个重组蛋白均能形成均一的直径约为50nm的颗粒；以HPV16L1-a4为蛋白载体所构建的5个重组蛋白中，HPV16L1-a4-L2B可形成直径为20nm的颗粒，HPV16L1-a4-L2C可形成直径为40nm的松散颗粒，而HPV16L1-a4-L2D,HPV16L1-a4-L2E和HPV16L1-a4-L2F均可形成直径约5nm的小壳粒。[0142]图9显示各抗体对图5A所构建的重组蛋白的反应性的ELISA检测结果。其中，使用3种抗体(针对HPV16LI蛋白的单抗PDl和8A9，以及针对HPV16L2蛋白的单抗14H6，其中抗体PDl和8A9由厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程研究中心筛选得到)对各蛋白进行ELISA检测，并且HPV16VLP和HPV16C50L2用作对照。结果显示，各重组蛋白对单抗PDl和8A9的反应性与HPV16VLP相当；并且，各重组蛋白对单抗14H6的反应性与HPV16C50L2相当。[0143]图10显示通过ELISA检测用图5A所构建的重组蛋白(5μg和0.5μg)免疫小鼠后获得的血清对HPV16C50L2蛋白的抗体滴度的结果。检测结果表明，用图5A所构建的重组蛋白免疫小鼠后，所产生的血清针对HPV16C50L2蛋白的抗体滴度均在IO5左右，与用HPV16C50L2蛋白单独免疫后的结果相当。这表明，图5A所构建的重组蛋白与HPV16C50L2蛋白的免疫原性相当。[0144]图11显示通过假病毒中和实验检测用图5A所构建的重组蛋白免疫小鼠后获得的血清的中和滴度。PsV，假病毒。结果表明，用图5A所构建的重组蛋白免疫小鼠后，所获得的血清不仅能中和HPV16的假病毒，而且对HPV11、18、45和58假病毒具有交叉中和作用。这表明，用图5A所构建的重组蛋白免疫小鼠后，小鼠获得了广谱的中和保护作用。[0145]图12显示经纯化的图5B所构建的重组蛋白的SDS-PAGE检测结果(上图框)以及用抗体14H6进行的蛋白质印迹分析的检测结果(下图框)。其中，各泳道所使用的蛋白样品如下:泳道1:蛋白分子量标记j}dt2:HBcore-L2Aj}dt3:HBcore-L2Bj}dt4:HBcore-L2C；泳道5:HBcore-L2D;泳道6:HBcore_L2E;泳道7:HBcore_L2F。[0146]SDS-PAGE检测结果显示，经纯化的图5B所构建的重组蛋白的纯度在80%以上。蛋白质印迹分析的检测结果显示，除HBcore-L2A外，图5B所构建的重组蛋白均能与单抗14H6反应。[0147]图13显示图5B所构建的重组蛋白的电镜观察结果。其中图13A-13G所使用的样品如下:图13A=HBcore；图13B:HBcore_L2A；图13C:HBcore_L2B；图13D:HBcore_L2C；图13E:HBcore-L2D;图13F:HBcore_L2E;图13G:HBcore_L2F。电镜结果显示，图5B所构建的6个重组蛋白均能够形成直径为40nm的颗粒。[0148]图14显示单抗14H6与图5B所构建的重组蛋白的反应性的ELISA检测结果。以HBcore和HPV16C50L2分别作为阴性`与阳性对照。检测结果表明，各重组蛋白对单抗14H6的反应性与HPV16C50L2相当。[0149]图15显示通过ELISA检测用图5B所构建的重组蛋白(5μg和0.5μg)免疫小鼠后获得的血清对HPV16C50L2蛋白的抗体滴度的结果。检测结果表明，用图5B所构建的重组蛋白免疫小鼠后，产生的针对HPV16L2蛋白的血清抗体滴度均在IO5左右，与用HPV16C50L2蛋白单独免疫后的结果相当。这表明，图5B所构建的重组蛋白与HPV16C50L2蛋白的免疫原性相当。[0150]图16显示通过假病毒中和实验检测用图5B所构建的重组蛋白免疫小鼠后获得的血清的中和滴度。检测结果表明，用图5B所构建的重组蛋白免疫小鼠后，所获得的血清不仅能中和HPV16的假病毒，而且对HPV18假病毒具有一定的交叉中和作用。这表明，用图5B所构建的重组蛋白免疫小鼠后，小鼠获得了广谱的中和保护作用。[0151]图17显示经纯化的图5C所构建的重组蛋白的SDS-PAGE检测结果(上图框)以及用抗体14H6进行的蛋白质印迹分析的检测结果(下图框)。其中，各泳道所使用的蛋白样品如下:泳道I:CRM197-L2A;泳道2:CRM197-L2C;泳道3:CRM197-L2E;泳道4:CRM197-L2G；泳道5:CRM197-L2I;泳道6:CRM197_L2K;泳道7:CRM389-L2A;泳道8:CRM389_L2C;泳道9:CRM389-L2E;泳道10:CRM389_L2G，泳道11:CRM389-L2I;泳道12:CRM389-L2K;泳道13:CRMA-L2A;泳道14:CRMA-L2C;泳道15:CRMA-L2E;泳道16:CRMA-L2G;泳道17:CRMA-L2I；泳道18:CRMA-L2K;泳道19:蛋白分子量标记。[0152]SDS-PAGE检测结果显示，经纯化的图5C所构建的重组蛋白的纯度在80%以上。蛋白质印迹分析的检测结果显示，除了CRM197-L2A、CRM389-L2A、CRMA-L2A外，图5C所构建的重组蛋白均能与单抗14H6反应。[0153]图18显示单抗14H6与图5C所构建的重组蛋白的反应性的ELISA检测结果。以CRM197蛋白和HPV16C50L2蛋白分别作为阴性与阳性对照。检测结果表明，各重组蛋白对单抗14H6的反应性与HPV16C50L2相当。[0154]图19显示通过ELISA检测用图5C所构建的重组蛋白(5μg和0.5μg)免疫小鼠后获得的血清对HPV16C50L2蛋白的抗体滴度的结果。。检测结果显示，用基于CRMA的重组蛋白免疫小鼠后，所产生的针对HPV16L2蛋白的血清抗体滴度最高，接近IO6;而用基于CRM197或CRM389的重组蛋白免疫小鼠后，所产生的针对HPV16L2蛋白的血清抗体滴度稍低，为大约IO4。[0155]图20显示通过假病毒中和实验检测用图5C所构建的重组蛋白免疫小鼠后获得的血清对各个型别的假病毒的中和滴度。检测结果显示，用图5C所构建的重组蛋白免疫小鼠后，所获得的血清不仅能中和HPV16的假病毒(中和滴度均为IO3左右)，而且对HPV11U8、45、52、59具有交叉中和作用。这表明，用图5C所构建的重组蛋白免疫小鼠后，小鼠获得了广谱的中和保护作用。[0156]序列信息[0157]本发明涉及的序列的信息提供于下面的表1中。[0158]【权利要求】1.能够特异性结合HPVL2蛋白并且能够中和多个型别的HPV的单克隆抗体及其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体包括:包含氨基酸序列为SEQIDNO:5-7的⑶R的重链可变区(VH);和/或包含氨基酸序列为SEQIDNO:8-10的⑶R的轻链可变区(VL)。2.权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的单克隆抗体包括，如SEQIDNO:2所示的VH，和/或，如SEQIDNO:4所示的VL。3.权利要求1或2的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体(例如，scFv)、人源化抗体、嵌合抗体或双抗体。4.权利要求1-3任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的单克隆抗体以小于大约10-5Μ，例如小于大约10-6Μ、10-7Μ、10-8Μ、10-9Μ或ΙΟ,Μ或更小的Kd结合HPV的L2蛋白。5.权利要求1-4任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述L2蛋白是HPV16的L2蛋白。6.权利要求1-5任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的单克隆抗体包括非-CDR区，且所述非-CDR区来自不是鼠类的物种，例如来自人抗体。7.权利要求1-6任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的单克隆抗体是中和抗体，其能够中和至少3种，例如至少4种，至少5种，至少6种，至少7种，至少8种，至少9种，至少10种，或11种型别的HPV;例如，所述的单克隆抗体能够中和下列11种型别的HPV:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。8.权利要求1-7任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株14H6产生的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株14H6保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏号CCTCC-C201268。9.能够特异性结合HPVL2蛋白并且能够中和多个型别的HPV的单克隆抗体及其抗原结合片段，其能够阻断所述L2蛋白与由杂交瘤细胞株14H6产生的单克隆抗体的结合的至少50%，优选至少60%，优选至少70%，优选至少80%，优选至少90%，优选至少95%或优选至少99%，所述杂交瘤细胞株14H6保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏号CCTCC—C201268。10.分离的核酸分子，其包含能够编码抗体重链可变区的核酸序列，其中所述抗体重链可变区包含，氨基酸序列为SEQIDNO:5-7的⑶R；例如，所述抗体重链可变区具有SEQIDN0:2所示的氨基酸序列；例如，所述核酸分子具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。11.分离的核酸分子，其包含能够编码抗体轻链可变区的核酸序列，其中所述抗体轻链可变区包含，氨基酸序列为SEQIDNO:8-10的⑶R；例如，所述抗体轻链可变区具有SEQIDN0:4所示的氨基酸序列；例如，所述核酸分子具有SEQIDN0:3所示的核苷酸序列。12.—种载体,其包含权利要求10和/或11的分离的核酸分子。13.一种宿主细胞，其包含权利要求10和/或11的分离的核酸分子，或权利要求12的载体。14.制备权利要求1-8任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在合适的条件下培养权利要求13的宿主细胞，和从细胞培养物中回收所述单克隆抗体或其抗原结合片段。15.杂交瘤细胞株14H6，其保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏号CCTCC—C201268。16.试剂盒，其包括权利要求1-9任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段；例如，所述单克隆抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记，例如放射性同位素，荧光物质，发光物质，有色物质和酶；例如，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别所述单克隆抗体或其抗原结合片段；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如放射性同位素，荧光物质，发光物质，有色物质和酶。17.用于检测HPVL2蛋白在样品中的存在或其水平的方法，其包括使用权利要求1-9任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段；例如，所述单克隆抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记，例如放射性同位素，荧光物质，发光物质，有色物质和酶；例如，所述方法还包括，使用携带可检测的标记(例如放射性同位素，荧光物质，发光物质，有色物质和酶)的第二抗体来检测所述单克隆抗体或其抗原结合片段。18.权利要求1-9任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测HPVL2蛋白在样品中的存在或其水平，或用于诊断受试者是否感染了HPV。19.一种药物组合物，其`包含权利要求1-9任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。20.用于中和样品中HPV的毒力的方法，其包括，将包含HPV的样品与权利要求1-9任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段接触。21.权利要求1-9任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段用于制备药物的用途，所述药物用于中和样品中HPV的毒力。22.权利要求1-9任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于预防或治疗受试者的HPV感染或与HPV感染相关的疾病(例如宫颈癌)。23.权利要求20的方法或权利要求21或22的用途，其中，所述HPV选自:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。24.—种分离的表位肽，其由HPVL2蛋白的10—30个(例如，30个，29个，28个，27个，26个，25个，24个，23个，22个，21个，20个，19个，18个，17个，16个，15个，14个，13个，12个，11个或10个)连续氨基酸残基组成，且包含HPVL2蛋白的第21—30位氨基酸残基。25.权利要求24的表位肽，其中，所述HPVL2蛋白是HPV16L2蛋白。26.权利要求24或25的表位肽，其中，所述HPVL2蛋白的第21—30位氨基酸残基如SEQIDNO:31所示。27.权利要求24-26任一项的表位肽，其中所述表位肽具有选自SEQIDNO:13,36,38,.40、42、44、46、48、50和52所示的氨基酸序列。28.—种重组蛋白，其包含权利要求24-27任一项的分离的表位肽和载体蛋白，并且不是天然存在的蛋白或其片段，其中，例如，所述表位肽通过连接体(刚性或柔性连接体，例如(GGGGS)3)与载体蛋白相连接；例如，所述载体蛋白选自CRM197蛋白或其片段、HPVLI蛋白和HBV核心抗原。29.权利要求28的重组蛋白，其中，例如，所述载体蛋白是CRM197蛋白或其片段，并且所述表位肽，任选地通过连接体，连接至CRM197蛋白或其片段的N末端或C末端；例如，所述CRM197蛋白的片段是CRM389或CRMA，其序列分别如SEQIDNO:105或119所示；例如，所述连接体的氨基酸序列如SEQIDNO:166所示；例如，所述重组蛋白具有选自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:93、95、97、99、101、103、.107、109、111、113、115、117、121、123、125、127、129和131。30.权利要求28的重组蛋白，其中，例如，所述载体蛋白是HPVLI蛋白，并且将所述表位肽插入至所述LI蛋白的第.127-128位氨基酸残基之间，或第423-424位氨基酸残基之间；例如，所述重组蛋白具有选自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:57、59、61、63、65、67、69、.71,73和75。31.权利要求28的重组蛋白，其中，例如，所述载体蛋白是HBV核心抗原，并且用所述表位肽替换所述HBV核心抗原的第.79-81位氨基酸；优选地，所述表位肽与HBV核心抗原通过连接体连接；例如，所述重组蛋白具有选自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:79、81、83、85、87和89。32.—种分离的核酸分子,其包含编码权利要求24-27任一项的表位肽或权利要求.28-31任一项的重组蛋白的核苷酸序列。33.一种载体,其包含权利要求32的分离的核酸分子。34.一种宿主细胞，其包含权利要求32的分离的核酸分子或权利要求33的载体。35.制备权利要求28-31任一项的重组蛋白的方法，其包括，在合适的条件下培养权利要求34的宿主细胞，和从细胞培养物中回收所述重组蛋白。36.一种药物组合物，其包含权利要求28-31任一项的重组蛋白，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。37.权利要求28-31任一项的重组蛋白在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于预防或治疗受试者的HPV感染或与HPV感染相关的疾病(例如宫颈癌)。38.权利要求28-31任一项的重组蛋白在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在受试者体内诱发能够中和至少2个型别的HPV的中和抗体。【文档编号】C12P21/02GK103483446SQ201210190279【公开日】2014年1月1日申请日期:2012年6月8日优先权日:2012年6月8日【发明者】李少伟,王大宁,肖洁琼,魏旻希,吴坤宝,张军,夏宁邵申请人:厦门大学,厦门万泰沧海生物技术有限公司