专利名称：新型麦芽寡糖基海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生产中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于基因工程和酶工程领域，具体涉及具有较高最适反应温度和热稳定性、较低最适PH的麦芽寡糖基海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生产中的应用。
背景技术：
海藻糖(Trehalose)是一种由两个葡萄糖分子通过半缩醛羟基以α _1，1糖苷键结合的非还原性糖，分子式为C12H22O11,相对分子量为378.33。其结构式如式I所示:
权利要求
1.麦芽寡糖基海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生产中的应用，其特征是:所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述麦芽寡糖基海藻糖水解酶具有如SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列。
2.一种海藻糖的生产方法，其特征是:以淀粉为底物，通过双酶转化法制备海藻糖，所用酶包括麦芽寡糖基海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶； 所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列； 所述麦芽寡糖基海藻糖水解酶具有如SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的生产方法，其特征是:麦芽寡糖基海藻糖合成酶具有以下特性: (1)最适作用温度 当pH 5.5温育60 min，最适作用温度60°C ； (2)最适作用pH 当60°C温育60 min,最适pH为5.5 ; (3)热稳定性 当于pH 5.5温浴60 min,在高达65°C下稳定； (4)pH稳定性当于60°C温浴60 min,在pH 4.8-6.3下稳定。
4.根据权利要求1或2所述的生产方法，其特征是:麦芽寡糖基海藻糖水解酶具有以下特性: (1)最适作用温度 当pH 5.3温育60 min，最适作用温度60°C ； (2)最适作用pH 当60°C温育60 min,最适pH为5.3 ; (3)热稳定性 当于pH 5.3温浴60 min,在高达70°C下稳定； (4)pH稳定性当于60°C温浴60 min,在pH 4.5-6.5下稳定。
5.根据权利要求1或2所述的生产方法，其特征是:麦芽寡糖基海藻糖合成酶由基因表达而得，所述基因含有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列或其互补核苷酸序列，或者含有由SEQ ID NO:2因遗传密码子的兼并性而取代一个或多个碱基所形成的核苷酸序列或其互补核苷酸序列；麦芽寡糖基海藻糖水解酶由基因表达而得，所述基因含有SEQ ID N0:4所示的核苷酸序列或其互补核苷酸序列，或者含有由SEQ ID N0:4因遗传密码子的兼并性而取代一个或多个碱基所形成的核苷酸序列或其互补核苷酸序列。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是包括以下步骤:配制淀粉乳，调节pH为5.3-5.8，向其中加入高温淀粉酶进行反应，得到DE值为6-10的淀粉水解物后，高温灭酶；向淀粉水解物中加入麦芽寡糖基海藻糖合成酶、麦芽寡糖基海藻糖水解酶和普鲁兰酶，在50-65°C、pH5.3-5.5的条件下反应25-35 h，制得海藻糖。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是:淀粉乳的质量浓度为20-35%。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是:每升淀粉乳中加入0.2-0.5 ml的高温淀粉酶；每升淀粉水解物中加入100-300 U麦芽寡糖基海藻糖合成酶、300-900 U水解酶，·0.2-1.0 mL普鲁兰酶。
9.根据权利要求6或8所述的制备方法，其特征是:高温淀粉酶在90-10(TC下对淀粉进行酶解；高温淀粉酶的酶解时间为20-30 min ;酶解后在132°C下灭酶1_10 min。
10.根据权利要求6、7或8所述的制备方法，其特征是:海藻糖的转化率为·76.5-85.4%ο
全文摘要
本发明公开了新型麦芽寡糖基海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生产中的应用，所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；所述麦芽寡糖基海藻糖水解酶具有如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列。本发明中麦芽寡糖基海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶具有较高的最适反应温度和热稳定性，具有较低的最适pH，降低了染菌风险，提高了生产的稳定性，显著提高了其和普鲁兰酶联合作用还原性淀粉水解物生产海藻糖的效率，降低了海藻糖成本，为海藻糖在医药、食品和化妆领域的广泛应用奠定坚实的基础。
文档编号C12P19/24GK103205475SQ201310128939
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月15日 优先权日2013年4月15日
发明者张全景, 付吉明, 刘敏, 陈平平, 庄祎, 郑秀宁, 王乔隆, 李慧君 申请人:山东天力药业有限公司