一种提高谷氨酰胺转胺酶热稳定性的短肽及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种提高谷氨酰胺转氨酶热稳定性的短肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；本发明还公开了一种热稳定性提高的谷氨酰胺转氨酶，其特征在于C端含有上述短肽，氨基酸如SEQ?ID?NO.2所示。应用上述短肽能显著提高谷氨酰胺转氨酶的热稳定性，其50℃的半衰期由3.7min延长至9.1min，提高1.5倍；TG-tag1熔解温度为76.4oC，与野生酶相比提高7.5℃。
【专利说明】一种提高谷氨酰胺转胺酶热稳定性的短肽及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种短肽及其应用，特别是一种提高谷氨酰胺转氨酶热稳定性的短肽及其应用。
【背景技术】
[0002]微生物谷氨酰胺转胺酶(蛋白质-谷氨酸-谷氨酰胺转胺酶，MicrobialTransglutaminase, EC2.3.2.13简称MTG)能够催化蛋白质肽链中谷氨酰胺残基的Y-羧酰胺基与赖氨酸ε-酰基或其他酰基反应，形成ε_( Y-谷氨酰基)赖氨酸共价键。特殊的催化能力使TGase广泛应用于食品工程、纺织与皮革加工、材料工程、生物医药等领域。但由于MTG异源表达分泌量低等缺陷，限制了 MTG的应用范围。
[0003]在前期研究中，本研究室筛选出一株新的产谷氨酰胺转胺酶的菌株(Streptomyces hygroscopicus CCTCC M203062),通过基因克隆方法,得到了MTG基因序列及其上下游序列，含MTG自身的启动子和终止子(Genebank:EU477523)，并实现了 MTG和其酶原区在大肠杆菌中的高效表达(Liu S，Zhang D, Wang M, Cui W，Chen K, Liu Y, Du G, ChenJ,Zhou Z (2011)The pro-region of Streptomyces hygroscopicus transglutaminaseaffects its secretion by Escherichia col1.FEMS Microbiol Lett324(2):98-105)。
[0004]谷氨酰胺转胺酶具有重要的工业应用价值，但其热稳定性始终是一个不可逾越的障碍，为提高TGase酶的稳定性，本发明选取该稳定短肽融合至TGase酶C端，以期得到热稳定性提高的突变酶。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的问题是提供一种提高的谷氨酰胺转氨酶热稳定性的短肽，其氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。
[0006]SEQ ID N0.1:短肽氨基酸序列为:IGCIILT。
[0007]本发明要解决的技术问题是提供一种热稳定性提高的谷氨酰胺转氨酶，其C端含有上述短肽序列，氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。
[0008]SEQ ID N0.2:谷氨酰胺转胺酶C端加短肽序列为
【权利要求】
1.一种提高谷氨酰胺转氨酶热稳定性的短肽，其氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。
2.一种热稳定性提高的谷氨酰胺转氨酶，其特征在于C端含有权利要求1所述的短肽，氨基酸如SEQ ID N0.2所示。
3.一种应用权利要求1所述短肽提高谷氨酰胺转氨酶热稳定性的方法，其特征在于在谷氨酰胺转氨酶C端插入权利要求1所述短肽序列。
4.权利要求3所述的方法，其特征在于所述短肽通过PCR方法或化学全合成的方法插入谷氨酰胺转氨酶 C端。
【文档编号】C12N9/10GK103554223SQ201310316129
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年7月25日 优先权日:2013年7月25日
【发明者】陈坚, 王广圣, 陈康康, 刘松, 堵国成 申请人:江南大学