一种菌糠高温分解复合菌剂及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种菌糠高温分解复合菌剂，菌剂由Aeribacillus?pallidus、Geobacillus?stearothermophilus、Brevibacillus?thermoruber、Clostridium?stercorarium?subsp.thermolacticum、Clostridium?thermocellum、Desulfotomaculum?nigrificans等8株嗜热细菌按细胞数含量比混合混合培养，分解能力旺盛时，进行复合菌剂制备，以不同菌糠为吸附载体，加入蛋白胨、酵母粉等，反复喷洒菌液，吸附发酵，60℃烘干即得。本菌剂可用于菌糠饲料化、肥料化和能源转化等用途。
【专利说明】—种菌糠高温分解复合菌剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业副产物的分解及综合利用【技术领域】，具体涉及一种菌糠高温分解复合菌剂。
【背景技术】
[0002]菌糠是利用木屑、棉籽壳、秸杆等木质纤维素原料进行食用菌代料栽培收获食用菌子实体后的培养基剩余物，俗称食用菌栽培废料、菌渣等，是重要的农业副产物资源。近些年来，食用菌产业飞速发展，菌糠资源量越来越大，目前绝大部分菌糠资源未被有效利用，造成资源浪费和环境污染。因此，解决菌糠利用问题对农业资源循环利用和治理环境污染极其重要。菌糠的主要成分是未被食用菌利用的难分解木质纤维素组分。目前，对菌糠的综合利用大致可分为发展动物饲料、肥料、栽培基质等方面。菌糠的快速分解是其进一步得到开发利用的关键环节。然而，目前还没有专门针对菌糠而开发的快速有效分解菌剂的报道和应用。
【发明内容】
[0003]本发明针对上述技术现状，旨在提供一种能快速有效分解均糠的菌糠高温分解复合菌剂及其制备方法。
[0004]本发明目的的实现方式为，一种菌糠高温分解复合菌剂，由以下8株嗜热细菌共同组成:由菌株保藏号ATCC51176, DSM3670Aeribacillus pallidus、菌株保藏号DSM2027, ATCC79 54GeobaciIIus stearothermophiIus、菌株保藏号 DSM7064BrevibaciIIusthermoruber> 菌株保藏号 ATCC43739, DSM29IOClostridium stercorarium subsp.thermolacticum、菌株保藏号 NCIB10682,ATCC27405Clostridium thermocellum、菌株保藏号 DSM574, ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans、菌株保藏号 DSM21625Geobacillus1:1161'1]108111(3081(138；[118、菌株保藏号03]\1245283501113；[(^3(^61'；[11111 thermophilum8 株嗜热细菌按在复合菌剂中的细胞数含量分别为10%-20%、10%-20%、2%-5%、10%-15%、15%_20%、5%_10%、10%-15%、15%-20%的比例混合发酵所得的复合菌剂；
[0005]菌株在混合发酵中的细胞数含量的含义是指复合菌剂中各菌株细胞数占复合菌总细胞数的百分含量。
[0006]制备菌糠高温分解复合菌剂的方法，8株细菌各自培养好后进行复合菌发酵；具体步骤如下:
[0007](I) 8株细菌各自培养，其培养方法分别为:
[0008]菌株保藏号ATCC51176，DSM3670Aeribacillus pallidus 的培养，将由葡萄糖1.0g,蛋白胨7.5g,牛肉膏5.0g,酵母粉2.5g,酪蛋白氨基酸2.5g,氯化钠5.0g,蒸懼水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至8.5 ;60°C避光静止培养48h ；
[0009]菌株保藏号DSM2027,ATCC7954Geobacillus stearothermophiIus 的培养，将由氯化钠5.0g，牛肉膏10.0g，蛋白胨10.0g，蒸馏水1000.0mL组成的培养基，pH值调整:至7.2 ;60°C避光静止培养48h ；
[0010]菌株保藏号DSM7064Brevibacillus thermoruber 的培养，将由葡萄糖 15.0g,酵母粉5.0g, 二水氯化钙0.2g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.0 ;60°C避光静止培养48h ；
[0011]菌株保藏号ATCC43739, DSM29IOClostridium stercorarium subsp.thermolacticum的培养,将由磷酸氢二钾0.3g,磷酸二氢钾0.2g,氯化铵0.5g,七水硫酸镁
0.5g，二水氯化钙0.25g，氯化钠2.25g，七水硫酸亚铁0.002g,维生素溶液10.0ml，微量元素溶液1.0ml,酵母粉2.0g,酪蛋白胨2.0g,刃天青0.0Olg,碳酸氢钠0.85g,甲醇10.0ml,L-半胱氨酸盐酸盐一水合物0.3g,九水硫化钠0.3g,蒸懼水1000.0ml组成的培养基,pH值调整至6.8 ;在80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养72h ； [0012]所述维生素溶液为Biotin2.0mg, Folic acid2.0mg, Pyridoxine-HCl 10.0mg,Thiamine-HCl ? 2H205.0mg , Riboflavin5.0mg, Nicotinic ac i d5.0mg,D-Ca-pantothenate5.0mg, Vitamin B120.lmg, p-Aminobenzoic acid5.0mg, Lipoicacid5.0mg,加蒸懼水定容至1000.0ml的溶液；
[0013]所述微量元素溶液为7.7M HCl 10.0ml, FeCl2 ? 4H201.5g, ZnCl270.0mg,MnCl2 *4H20100.0mg，H3B036.0mgjCoCl2 *6H20190.0mgjCuCl2 *2H202.0mgjNiCl2 *6H2024.0mg,Na2MoO4 ? 2H2036.0mg,加蒸懼水定容至1000.0ml的溶液；
[0014]菌株保藏号NCIB10682，ATCC27405Clostridium thermocellum 的培养，将由硫酸铵1.3g，六水氯化镁2.6g，磷酸二氢钾1.43g，磷酸氢二钾5.5g，二水氯化钙0.13g，P -磷酸甘油二钠四水合物6.0Og,七水硫酸亚铁1.1Omg,还原型谷胱甘肽0.25g，酵母粉4.5g，刃天青1.0mg,微晶纤维素10.0g,蒸懼水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.2 ;在80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养72h ；
[0015]菌株保藏号DSM574, ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans 的培养，将由憐酸氢二钾0.5g，氯化铵1.0g，硫酸钠1.0g, 二水氯化钙0.1g,七水硫酸镁2.0g, DL-乳酸钠2.0g,酵母粉1.0g,刃天青1.0mg,七水硫酸亚铁0.5g,巯基乙酸钠0.1g,抗坏血酸0.1g,蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.8 ;在80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养72h ；
[0016]菌株保藏号DSM21625Geobacillus thermoglucosidasius 的培养，将由酪蛋白腺15.0g,大豆蛋白胨5.0g,氯化钠5.0g,蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.3 ；60°C黑暗静止培养48h ；
[0017]菌株保藏号DSM24528Symbiobacterium thermophilum 的培养，将由氯化钠 5.0g,硝酸钠1.7g，酵母粉5.0g，蛋白胨10.0g，碳酸氢铵3.2g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，，pH值调整至7.8 ;在80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养72h ；
[0018](2)复合菌发酵
[0019]将经步骤(1)培养好的8株细菌按照比例混合均匀后即获得混合菌种原液，将相当于培养液体积5%的混合菌种原液接种于发酵培养液中，在60°C下黑暗静止培养5天，得复合菌液；
[0020]所述混合发酵培养液为:蛋白胨5.0g，酵母粉1.0g,碳酸钙3g，氯化钠5g，K2HPO4Ig, MgSO4 ? 7H200.35g，菌糠粉 10g，蒸馏水 1000.0mL, pH 值为 7.8，121°C 灭菌 20min ；[0021]所述8株细菌的混合比例为:菌株保藏号ATCC51176，DSM3670Aeribacilluspallidus、菌株保藏号 DSM2027, ATCC7954Geobacillus stearothermophiIus> 菌株保藏号 DSM7064Brevibacillus thermoruber> 菌株保藏号 ATCC43739, DSM29IOClostridiumstercorarium subsp.thermolacticum、菌株保藏号 NCIB10682, ATCC27405Clostridiumthermocellum、菌株保藏号 DSM574, ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans、菌株保藏号 DSM21625Geobacillus thermoglucosidasius、菌株保藏号 DSM24528Symbiobacteriumthermophilum在混合菌种中细胞数含量分别为10%_20%、10%_20%、2%_5%、10%_15%、15%-20%、5%-10%、10%-15%和 15%-20% ；
[0022](3)细菌吸附载体的制备:将80°C烘干的菌糠粉碎后，过0.4mm筛子备用； [0023](4)复合菌吸附发酵:在步骤(3)的菌糠粉中加入占菌糠粉重量的0.2%蛋白胨、0.3%鱼粉、0.25%酵母粉和50%自来水，边搅拌边喷洒占菌糠粉重1%的，由步骤(2)所得的复合菌液，置于发酵罐内，60°C避光保温培养，每24小时均匀搅拌I次，每隔48小时重复喷洒同样的菌液，共喷洒3次，第3次喷洒菌液量为菌糠粉重的20%，喷洒后避光保温培养12小时，搅拌均匀后置于60°C烘干，当总体水分含量为20%时停止干燥，得复合菌剂制品。
[0024]本发明的复合菌剂由特定的8株细菌以菌糠为载体进行吸附发酵而成，8株组成菌均为嗜热细菌，其中组成菌Clostridium thermocellum (NCIB10682，ATCC27405)仅在严格厌氧条件下对菌糠等木质纤维素原料具有微弱分解能力，其纯培养物在复合菌剂培养的同等条件下没有分解能力；其余7株组成菌在本发明实验条件下未发现对菌糠具有分解能力；但是将这8株细菌按照一定比例进行混合培养后对菌糠等木质纤维素原料具有显著分解能力。本复合菌剂可用于菌糠饲料化、肥料化和生物能源转化等用途。
【具体实施方式】
[0025]本发明所述的复合菌剂由以下8株嗜热细菌共同组成:由菌株保藏号ATCC51176, DSM3670Aeribacillus pallidus、菌株保藏号 DSM2027，ATCC7954GeobacillusstearothermophiIus> 菌株保藏号 DSM7064Brevibacillus thermoruber> 菌株保藏号 ATCC43739, DSM29IOClostridium stercorarium subsp.thermolacticum、 菌株保藏号 NC皿0682，ATCC27405Clostridium thermocellum、菌株保藏号 DSM574,ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans、菌株保藏号 DSM21625Geobacillus1:1161'1]108111。081(138；[118、菌株保藏号03]\1245283501113；[(^3(^61'；[11111 thermophilum8 株嗜热细菌按在复合菌剂中的细胞数含量分别为10%-20%、10%-20%、2%-5%、10%-15%、15%_20%、5%_10%、10%-15%、15%-20%的比例混合发酵所得的复合菌剂。
[0026]制备方法为将上述8株细菌进行按照指定的比例进行混合培养，待菌群分解能力旺盛时，进行复合菌剂制备，以不同菌糠为吸附载体，加入蛋白胨、酵母粉、鱼粉等，反复喷洒菌液，吸附发酵，60°C烘干即得。
[0027]细菌吸附载体为木屑菌糠、棉籽壳菌糠、木屑棉籽壳菌糠、棉杆菌糠、玉米芯秸杆菌糠等。
[0028]下面以实例说明本发明。
[0029]实例I
[0030]( I) 8株细菌各自培养，其培养方法分别为:[0031]菌株保藏号ATCC51176，DSM3670Aeribacillus pallidus 的培养，将由葡萄糖
1.0g,蛋白胨7.5g,牛肉膏5.0g,酵母粉2.5g,酪蛋白氨基酸2.5g,氯化钠5.0g,蒸懼水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至8.5 ;60°C避光静止培养48h。
[0032]菌株保藏号DSM2027，ATCC7954GeobaciIIus stearothermophiIus 的培养，将由氯化钠5.0g，牛肉膏10.0g，蛋白胨10.0g，蒸馏水1000.0mL组成的培养基，pH值调整:至7.2 ;60°C避光静止培养48h。
[0033]菌株保藏号DSM7064Brevibacillus thermoruber 的培养，将由葡萄糖 15.0g,酵母粉5.0g, 二水氯化钙0.2g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.0 ;60°C避光静止培养48h。
[0034]菌株保藏号ATCC43739, DSM29IOClostridium stercorarium subsp.thermolacticum的培养，培养基为:将由磷酸氢二钾0.3g,磷酸二氢钾0.2g,氯化铵0.5g,七水硫酸镁0.5g，二水氯化钙0.25g，氯化钠2.25g，七水硫酸亚铁0.002g,维生素溶液
10.0ml，微量元素溶液1.0ml，酵母粉2.0g，酪蛋白胨2.0g，刃天青0.001g，碳酸氢钠0.85g，甲醇10.0ml, L-半胱氨酸盐酸盐一水合物0.3g,九水硫化钠0.3g,蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至6.8 ;在80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养72h。
[0035]所述维生素溶液为Biotin2.0mg, Folic acid2.0mg, Pyridoxine-HCl 10.0mg,Thiamine-HCl ? 2H205.0mg, Riboflavin5.0mg, Nicotinic acid5.0mg,D-Ca-pantothenate5.0mg, Vitamin B120.lmg, p-Aminobenzoic acid5.0mg, Lipoicacid5.0mg,加蒸懼水定容至1000.0ml的溶液。
[0036]所述微量元素溶液为7.7M HCl 10.0ml, FeCl2 ? 4H201.5g, ZnCl270.0mg,MnCl2 *4H20100.0mg，H3B036.0mgjCoCl2 *6H20190.0mgjCuCl2 *2H202.0mgjNiCl2 *6H2024.0mg,Na2MoO4 ? 2H2036.0mg,加蒸懼水定容至1000.0ml的溶液。
[0037]菌株保藏号NCIB10682，ATCC27405Clostridium thermocellum 的培养将由硫酸铵1.3g，六水氯化镁2.6g，磷酸二氢钾1.43g，磷酸氢二钾5.5g，二水氯化钙0.13g，P -磷酸甘油二钠四水合物6.0Og,七水硫酸亚铁1.1Omg,还原型谷胱甘肽0.25g，酵母粉4.5g，刃天青1.0mg,微晶纤维素10.0g,蒸懼水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.2 ;在80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养72h。
[0038]菌株保藏号DSM574, ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans 的培养将由憐酸氢二钾0.5g，氯化铵1.0g,硫酸钠1.0g, 二水氯化钙0.1g,七水硫酸镁2.0g, DL-乳酸钠
2.0g,酵母粉1.0g,刃天青1.0mg,七水硫酸亚铁0.5g,巯基乙酸钠0.1g,抗坏血酸0.1g,蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.8 ;在80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养72h。
[0039]菌株保藏号DSM21625Geobacillus thermoglucosidasius 的培养，将由酪蛋白腺15.0g，大豆蛋白胨5.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1000.0ml，pH值调整至7.3 ;60°C黑暗静止培养 48h。
[0040]保藏号DSM24528Symbiobacterium thermophilum 氯化钠 5.0g,硝酸钠 1.7g,酵母粉5.0g，蛋白胨10.0g，碳酸氢铵3.2g，蒸馏水1000.0ml, pH值调整至7.8 ;在厌氧条件下(80%N2+20%C02)，60°C黑暗静止培养 72h。
[0041](2)复合菌发酵[0042]将经步骤(1)培养好的8株细菌按照比例混合均匀后即获得混合菌种原液，将相当于培养液体积5%的混合菌种原液接种于发酵培养液中，在60°C下黑暗静止培养5天，得复合菌液；
[0043]所述发酵培养液为:蛋白胨5.0g，酵母粉1.0g，碳酸钙3g，氯化钠5g，K2HPO4Ig,MgSO4 ? 7H200.35g，菌糠粉 10g，蒸馏水 1000.0mL, pH 值为 7.8，121 °C灭菌 20min。
[0044]所述8株细菌的混合比例为:菌株保藏号ATCC51176，DSM3670Aeribacilluspallidus、菌株保藏号 DSM2027, ATCC7954Geobacillus stearothermophiIus> 菌株保藏号 DSM7064Brevibacillus thermoruber> 菌株保藏号 ATCC43739, DSM29IOClostridiumstercorarium subsp.thermolacticum、菌株保藏号 NCIB10682, ATCC27405Clostridiumthermocellum、菌株保藏号 DSM574, ATCC19858Desulfotomaculum nigrif icans、菌株保藏号 DSM21625Geobacillus thermoglucosidasius、菌株保藏号 DSM24528Symbiobacteriumthermophilum在混合菌种中细胞数含 量分别为20%、20%、5%、10%、15%、5%、10%和15% ；
[0045](3)细菌吸附载体制备:将80°C烘干的木屑菌糠(原始食用菌栽培料中木屑含量占80%)粉碎后过0.4mm筛子备用；
[0046](4)复合菌吸附发酵:在上述木屑菌糠粉中加入占菌糠粉重量的0.2%蛋白胨、0.3%鱼粉、0.25%酵母粉和50%自来水，边搅拌边喷洒占菌糠粉重1%预发酵好的复合菌液置于发酵罐内，60°C避光保温培养，每24小时均匀搅拌I次，每隔48小时重复喷洒同样的菌液，共喷洒3次，第3次喷洒菌液量为菌糠粉重的20%，喷洒后避光保温培养12小时，搅拌均匀后置于60°C烘干，当总体水分含量为20%时停止干燥，得复合菌剂制品，并进行包装。本实例制备的复合菌剂对不同菌糠的分解能力见表1。
[0047]表1复合菌剂对不同菌糠的分解能力
[0048]
【权利要求】
1.一种快速有效的菌糠高温分解复合菌剂，其特征在于由菌株保藏号ATCC51176，DSM3670Aeribacillus pallidus、菌株保藏号 DSM2027，ATCC7954GeobacillusstearothermophiIus> 菌株保藏号 DSM7064Brevibacillus thermoruber> 菌株保藏号 ATCC43739, DSM291OClostridium stercorarium subsp.thermolacticum、 菌株保藏号 NC皿0682，ATCC27405Clostridium thermocellum、菌株保藏号 DSM574,ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans> 菌株保藏号 DSM21625Geobacillus1:1161'1]108111(3081(138；[118、菌株保藏号03]\1245283501113；[0&3(^61'；[11111 thermophilum8 株嗜热细菌按在复合菌剂中的细胞数含量分别为10%-20%、10%-20%、2%-5%、10%-15%、15%_20%、5%_10%、10%-15%、15%-20%的比例混合发酵所得的复合菌剂； 菌株在混合发酵中的细胞数含量的含义是指复合菌剂中各菌株细胞数占复合菌总细胞数的百分含量。
2.制备权利要求1所述的一种快速有效的菌糠高温分解复合菌剂的方法，其特征在于.8株细菌各自培养好后进行复合菌发酵；具体步骤如下: (I)8株细菌各自培养，其培养方法分别为: 菌株保藏号 ATCC51176，DSM3670Aeribacillus pallidus 的培养，将由葡萄糖 l.0g，蛋白胨7.5g，牛肉膏5.0g,酵母粉2.5g，酪蛋白氨基酸2.5g，氯化钠5.0g,蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至8.5 ;60°C避光静止培养48h ； 菌株保藏号 DSM2027, ATCC7954Geobaci I Ius stearothermophi Ius 的培养,将由氯化钠.5.0g，牛肉膏10.0g， 蛋白胨10.0g，蒸馏水1000.0mL组成的培养基，pH值调整:至7.2 ；60°C避光静止培养48h ； 菌株保藏号DSM7064Brevibacillus thermoruber的培养，将由葡萄糖15.0g,酵母粉.5.0g，二水氯化钙0.2g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.0 ;60°C避光静止培养 48h ；
菌株保藏号 ATCC43739, DSM29IOClostridium stercorarium subsp.thermolacticum的培养，将由磷酸氢二钾0.3g，磷酸二氢钾0.2g，氯化铵0.5g，七水硫酸镁0.5g，二水氯化钙0.25g，氯化钠2.25g，七水硫酸亚铁0.002g,维生素溶液10.0ml，微量元素溶液1.0ml，酵母粉2.0g,酪蛋白胨2.0g,刃天青0.001g，碳酸氢钠0.85g，甲醇10.0ml, L-半胱氨酸盐酸盐一水合物0.3g，九水硫化钠0.3g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至6.8 ;在.80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养72h ； 所述维生素溶液为 Biotin2.0mg, Folic acid2.0mg, Pyridoxine-HCl10.0mg,Thiamine-HCl ? 2H205.0mg , Riboflavin5.0mg, Nicotinic ac i d5.0mg,D-Ca-pantothenate5.0mg, Vitamin B120.lmg, p-Aminobenzoic acid5.0mg, Lipoicacid5.0mg,加蒸懼水定容至1000.0ml的溶液； 所述微量元素溶液为 7.7M HCl 10.0ml, FeCl2 ? 4H201.5g, ZnCl270.0mg,MnCl2 *4H20100.0mg，H3B036.0mgjCoCl2 *6H20190.0mgjCuCl2 *2H202.0mgjNiCl2 *6H2024.0mg,Na2MoO4 ? 2H2036.0mg,加蒸懼水定容至1000.0ml的溶液； 菌株保藏号 NCIB10682，ATCC27405Clostridium thermocellum 的培养，将由硫酸铵.1.3g，六水氯化镁2.6g，磷酸二氢钾1.43g，磷酸氢二钾5.5g，二水氯化钙0.13g，P -磷酸甘油二钠四水合物6.00g，七水硫酸亚铁1.10mg，还原型谷胱甘肽0.25g，酵母粉4.5g，刃天青1.0mg,微晶纤维素10.0g,蒸懼水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.2 ;在80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养72h ； 菌株保藏号DSM574, ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans 的培养,将由憐酸氢二钾0.5g，氯化铵1.0g,硫酸钠1.0g, 二水氯化钙0.1g,七水硫酸镁2.0g, DL-乳酸钠2.0g,酵母粉1.0g,刃天青1.0mg,七水硫酸亚铁0.5g，巯基乙酸钠0.1g,抗坏血酸0.1g,蒸馏水.1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.8 ;在80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养.72h ；
菌株保藏号DSM21625Geobacillus thermoglucosidasius的培养，将由酪蛋白腺.15.0g,大豆蛋白胨5.0g,氯化钠5.0g,蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.3 ；.60°C黑暗静止培养48h ； 菌株保藏号DSM24528Symbiobacterium thermophilum的培养，将由氯化钠5.0g,硝酸钠1.7g，酵母粉5.0g，蛋白胨10.0g，碳酸氢铵3.2g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，，pH值调整至7.8 ;在80%N2+20%C02厌氧条件下，60°C黑暗静止培养72h ； (2)复合菌发酵 将经步骤(1)培养好的8株细菌按照比例混合均匀后即获得混合菌种原液，将相当于培养液体积5%的混合菌种原液接种于发酵培养液中，在60°C下黑暗静止培养5天，得复合菌液； 所述混合发酵培养液为:蛋白胨5.0g,酵母粉1.0g,碳酸|丐3g,氯化钠5g, K2HPO4Ig,MgSO4 ? 7H200.35g，菌糠粉 10g，蒸馏水 1000.0mL, pH 值为 7.8，121 °C灭菌 20min ； 所述8株细菌的混合比例为:菌株保藏号ATCC51176，DSM3670Aeribacilluspallidus、菌株保藏号 DSM2027, ATCC7954Geobacillus stearothermophiIus> 菌株保藏号 DSM7064Brevibacillus thermoruber> 菌株保藏号 ATCC43739, DSM29IOClostridiumstercorarium subsp.thermolacticum、菌株保藏号 NCIB10682, ATCC27405Clostridiumthermocellum、菌株保藏号 DSM574, ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans、菌株保藏号 DSM21625Geobacillus thermoglucosidasius、菌株保藏号 DSM24528Symbiobacteriumthermophilum在混合菌种中细胞数含量分别为10%_20%、10%_20%、2%_5%、10%_15%、15%-20%、5%-10%、10%-15%和 15%-20% ； (3)细菌吸附载体的制备:将80°C烘干的菌糠粉碎后，过0.4mm筛子备用； (4)复合菌吸附发酵:在步骤(3)的菌糠粉中加入占菌糠粉重量的0.2%蛋白胨、0.3%鱼粉、0.25%酵母粉和50%自来水，边搅拌边喷洒占菌糠粉重1%的，由步骤(2)所得的复合菌液，置于发酵罐内，60°C避光保温培养，每24小时均匀搅拌I次，每隔48小时重复喷洒同样的菌液，共喷洒3次，第3次喷洒菌液量为菌糠粉重的20%，喷洒后避光保温培养12小时，搅拌均匀后置于60°C烘干，当总体水分含量为20%时停止干燥，得复合菌剂制品。
3.根据权利要求2所述的制备的一种快速有效的菌糠高温分解复合菌剂的方法，其特征在于细菌吸附载体为木屑菌糠、棉籽壳菌糠、木屑棉籽壳菌糠、棉杆菌糠、玉米芯秸杆菌糠。
【文档编号】C12N1/20GK103614315SQ201310478232
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年10月14日 优先权日:2013年10月14日
【发明者】郭鹏, 程薇, 周明, 陈明利, 高虹, 王晨, 杨德, 李露, 薛淑静, 史德芳 申请人:湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所