可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂及其制备方法。在液体试剂中加入冻干保护剂，采用真空冷冻干燥的方法，将液态的恒温扩增检测试剂的组分冻干成固态的干粉，该固态试剂可常温运输，在反应时加入液态的反应底物溶解即可进行反应，反应性能优越，操作方便，可广泛应用于各类病原、食品微生物、转基因产品等的现场快速检测。
【专利说明】可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]环介导等温扩增技术是2000年由日本荣研化学株式会社开发的一种新颖的恒温核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶在等温条件(63°C左右)保温30 - 60分钟，即可完成核酸扩增反应。与常规PCR相t匕，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程。环介导等温扩增法是一种全新的核酸扩增方法， 具有简单、快速、特异性强的特点。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，检测成本远低于荧光定量PCR。
[0003]环介导等温扩增技术需要具备以下条件:
(O要被复制的DNA模板；
(2)针对DNA模板设计的特异性引物；
(3)fciDNA聚合酶；
(4)反应液；
(5)dNTP ；
(6)Mg2+；
但这些物质都需要冷冻储存，尤其是fei DNA聚合酶，需要在-20°C保存，其不能反复冻融，因此，给试剂的运输和客户使用带来了极大的麻烦，增加了运输成本，同时，每次实验都要配制相应反应体系，使用起来也非常不方便，容易导致由于操作者操作引起的误差，且容易造成实验间的污交叉染。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于克服现有技术中所存在的不足，提供一种可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂及其制备方法。
[0005]本发明所采取的技术方案是:
一种冻干保护剂，其含有棉籽糖、牛血清白蛋白、聚乙二醇20000和L-苏氨酸。
[0006]作为优选的，所述冻干保护剂含有3~10份棉籽糖、0.1~1份牛血清白蛋白、
0.5~2份聚乙二醇20000和0.01~0.1份L-苏氨酸，按质量份计。
[0007]一种可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂，其包括恒温扩增检测试剂和上述的冻干保护剂。
[0008]所述恒温扩增检测试剂包括恒温PCR反应液、DNA聚合酶、引物和荧光染料。
[0009]作为优选的，所述冻干保护剂在整个体系中的浓度为3.61%~13.1%。
[0010]一种可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂的制备方法，包括如下步骤:
(O按权利要求3~5任一项的配方制备冻干粉原液；(2)将冻干粉原液冻干即可。
[0011]本发明的有益效果是:
I)本发明的干粉化恒温扩增检测试剂可增加恒温扩增检测试剂的稳定性，长期放置后冻干剂的检测灵敏度和检出时间与新配置的检测试剂差别不大，且冻干试剂可常温运输，节约能源和运输成本。
[0012]2 )本发明的干粉化恒温扩增检测试剂已将各非变量试剂进行组合，大大减少实验步骤，方便使用，同时减少实验误差。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1为真空冷冻干燥后的恒温扩增检测试剂。
【具体实施方式】
[0014]下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。如无特别说明，以下“％”均指质量百分比。
[0015]本发明的干粉化恒温扩增检测试剂，组分见表1。下述体系冻干后，只需要加入23 μ I超纯水溶解，再加入2 μ I核酸模板，即可完成对病原的检测。
[0016]表1
【权利要求】
1.一种冻干保护剂，其含有棉籽糖、牛血清白蛋白、聚乙二醇20000和L-苏氨酸。
2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂含有3~10份棉籽糖、0.1~1份牛血清白蛋白、0.5~2份聚乙二醇20000和0.01~0.1份L-苏氨酸，按质量份计。
3.一种可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂，其包括恒温扩增检测试剂和权利要求1或2所述的冻干保护剂。
4.根据权利要求3所述的可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂，其特征在于，所述冻干保护剂在整个体系中的浓度为3.61%~13.1%。
5.根据权利要求3所述的可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂，其特征在于，所述恒温扩增检测试剂包括恒温PCR反应液、DNA聚合酶、引物和荧光染料。
6.一种可常温运输的干粉化恒温扩增检测试剂的制备方法，包括如下步骤: (O按权利要求3~5任一项的配方制备冻干粉原液； (2)将冻干粉原液冻干即可。
【文档编号】C12Q1/68GK103966323SQ201410173060
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2014年4月25日 优先权日:2014年4月25日
【发明者】刘助红, 刘永伟, 刘美贤, 唐大运, 李红梅, 张璜, 曹炜伟, 石磊 申请人:广州迪澳生物科技有限公司